肿瘤细胞多药耐药逆转研究

肿瘤细胞多药耐药(MDR)是导致肿瘤化疗失败的原因之一,如何克服MDR,提高化疗疗效已成为国内外研究的热点.文章对肿瘤MDR逆转进行了研究.     

多通道电化学基因传感阵列用于同时检测AML相关多药耐药基因的新方法研究

本研究筛选并制备高特异性 DNA 探针,与纳米粒子标记技术相结合,设计多通道电化学基因传感阵列检测模式,建立灵敏、快速、简便、经济的AML相关多药耐药基因(MDR1和MRP)检测新方法。该方法具有较好的特异性、灵敏度和重现性,能够在1.0×10-14 ~ 1.0×10-12 M和5.0×10-14 ~ 5.0×10-12 M范围内,分别实现对AML 相关多药耐药基因序列MDR1和MRP的定量检测。该方法有望为预测肿瘤治疗效果和临床制定治疗方案提供参考依据。     

多药耐药及相关蛋白质的研究进展

多药耐药 (MDR)是某些肿瘤细胞对多种化疗药物产生交叉耐药的现象 ,也是目前肿瘤化疗失败的重要原因。研究发现 ,肿瘤细胞内的P -糖蛋白 (P -gp)、多药耐药相关蛋白 (MRP)、肺耐药蛋白 (LRP)、乳腺癌耐药蛋白 (BCRP)等蛋白质与MDR密切相关 ,其共同特点是上述蛋白质在MDR细胞中均有过度表达 ,并通过多种途经降低化疗药物在肿瘤细胞内的浓度及改变其在细胞内的分布。此外 ,MDR细胞还常伴随有酶蛋白 (如蛋白激酶C -PKC ,谷胱甘肽S转移酶π -GST -π ,拓扑导构酶Ⅱ -TOPOⅡ等 )活性的改变。因此 ,肿瘤细胞的MDR是一个相当复杂的细胞生理、生化过程 ,是多因素共同作用的结果。     

桂枝茯苓丸联用顺铂紫杉醇化疗提高卵巢癌多药耐药模型裸鼠生存率

研究桂枝茯苓丸逆转人卵巢癌耐顺铂细胞株(SKOV3/DDP)肿瘤模型的耐药作用及其对荷瘤BALB/c裸鼠生存率的影响,探讨其可能的作用机制。采用Cell Counting Kit-8试剂盒检测SKOV3/DDP对顺铂和紫杉醇的耐药性;采用SKOV3/DDP细胞建立卵巢癌耐药肿瘤模型,模型BALB/c裸鼠随机分为桂枝茯苓丸浓缩液16 g·kg~(-1)·d~(-1)(高)、8 g·kg~(-1)·d~(-1)(中)、4g·kg~(-1)·d~(-1)(低)剂量(中药组)、顺铂/紫杉醇组(化疗组)、低剂量桂枝茯苓丸与化疗联用组(中西联用组)和空白对照组,检测各处理组的抑瘤率。观察各组BALB/c裸鼠的生存情况;并采用荧光定量PCR检测各组肿瘤组织中MDR1 mRNA的相对表达。结果是SKOV3/DDP细胞对顺铂和紫杉醇的耐药倍数分别为4.13倍和3.85倍。随着桂枝茯苓丸浓缩液剂量的增加,抑瘤作用增强,裸鼠生存率提高,肿瘤组织MDR1 mRNA表达相对于对照组逐渐下降。西药化疗组在耐药模型裸鼠中的抑瘤效果高于中药组,中西药联用后抑瘤效果显著高于西药化疗组;与其他各组相比,西药化疗组的裸鼠平均体重明显下降,差异均具有显著性(P0.05,P0.01)。中西联用组裸鼠生存率高于桂枝茯苓丸低剂量组和西药化疗组。西药化疗组MDR1mRNA表达相对于对照组显著增加,中西药联用组MDR1 mRNA表达相对于对照组显著下降,差异均具有显著性(P0.05,P0.01)。说明桂枝茯苓丸能够逆转SKOV3/DDP耐药性卵巢癌模型裸鼠的耐药性,提高裸鼠生存率,其机制可能与抑制MDR1 mRNA表达有关。     

华南地区汉族人群MDR1基因单核苷酸多态性研究

 多药耐药基因1（MDR1）单核苷酸多态性（SNP）与疾病的易感性、药物治疗效果以及患者的生存复发等预后密切相关。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）和聚合酶链反应-单链构象多态性（PCR-SSCP）方法,对华南地区无亲缘关系的汉族人群MDR1基因编码区及部分启动子区进行SNP筛查,并比较不同人种间等位基因频率的差异。结果共检测出5个多态位点：T-2410C、T-129C、C1236T、G2677T/A和C3435T,其等位基因频率-2410C为4.65%,-129C为3.11%,1236T为63.31%,2677T为44.66%,2677A为14.47%,3435T为41.18%。除T-2410C位点因报道的太少无法比较外,其余位点等位基因频率在东亚、高加索以及非洲人群中的分布存在显著差异。该研究为进一步研究华南地区汉族人群MDR1基因SNP与药物效果、药物毒副作用以及疾病易感性之间的相关性提供依据。     

多通道电化学基因传感阵列快速联检AML相关耐药基因的新方法

筛选并制备高特异性 DNA 探针,与纳米粒子标记技术相结合,设计多通道电化学基因传感阵列检测模式,建立灵敏、快速、简便、经济的急性髓系白血病（AML）相关多药耐药基因（MDR1和MRP）检测新方法. 该方法具有较好的特异性、灵敏度和重现性,能够在1.0×10^-14 ~ 1.0×10^-12 mol·L^-1和5.0×10^-14~5.0×10^-12 mol·L^-1范围内,分别实现对AML 相关多药耐药基因序列MDR1和MRP的定量检测. 该方法有望为预测肿瘤治疗效果和临床制定治疗方案提供参考依据.     

以多药耐药基因为靶标的siRNA对耐药肿瘤细胞药物敏感性和凋亡的影响

目的:研究应用以多药耐药相关蛋白(MRP)基因为靶标的siRNA( small interference RNA) 抑制相应蛋白表达后,耐药肿瘤细胞药物敏感性和凋亡率的改变.方法:通过脂质体将以MRP基因为靶标的siRNA(100 μmol/L)转入柔红霉素(DNR)0.8、1.6、3.2、6.4、12.8 μg/mL处理的肺癌耐药细胞株SW1573/R20;阿霉素(ADM)1.6、3.2、6.4、12.8、25.6 μg/mL处理的白血病耐药细胞株K562/ADM;顺铂(DDP)0.125、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0 μmol/mL处理的鼻咽癌耐药细胞株CNE2/DDP;以单纯化疗处理组和未处理组为对照.于转染后24、48、72h,用MTT法检测各组细胞生长抑制率,算出各细胞IC50.转染siRNA联合IC50剂量化疗处理6 h后流式细胞仪检测各细胞凋亡率和死亡率,24 h后RT-PCR检测相应基因mRNA表达水平,48 h后检测MRP蛋白表达率.结果:以MRP为靶标的siRNA 明显抑制各肿瘤细胞靶基因蛋白和mRNA的表达,与未处理组相比均有统计学差异(P＜005);转染以MRP为靶标的siRNA后,耐药肿瘤细胞对化疗药物敏感性明显增强,IC50明显降低,细胞凋亡率明显增加,与单纯化疗组相比有统计学差异(P＜005).结论:以MRP基因为靶标的siRNA,通过降低靶基因mRNA和蛋白表达,明显增加耐药肿瘤细胞药物敏感性和凋亡率.     

横纹肌肉瘤多药耐药细胞系RD/VCR的建立

横纹肌肉瘤是一种高度恶性的软组织肿瘤，化疗是最主要的辅助治疗手段．然而，肿瘤细胞对药物产生多药耐药常常导致治疗失败．本实验以长春新碱为诱导剂，在体外成功建立了耐药细胞系DD／VCR，为进一步研究横纹肌肉瘤的耐药机理制作了模型．耐药前后细胞超微结构发生显变化，mdr1及mrp基因，P-糖蛋白及多药相关蛋白的表达与横纹肌肉瘤多药耐药的发生有关。     

耐药逆转与干细胞及树突状细胞治疗实体瘤的应用基础研究

在肿瘤治疗过程中,如何预测耐药基因存在情况并使之发生逆转,如何克服放化疗的骨髓造血毒性,提高放化疗剂量以及如何清除体内残存癌细胞,已成为提高肿瘤疗效、延长患者生存时间的关键。     

肿瘤基因治疗

在单基因缺陷遗传病的基因治疗取得重要研究进展的同时,涉及多基因异常的肿瘤基因治疗研究也取得了令人瞩目的突破.从五个方面考虑肿瘤的基因治疗:信息药物法,导入反意核酸或核酸代酶信息药物抑制肿瘤恶性基因的表达;遗传免疫调节法,导入细胞因子基因刺激对肿瘤细胞毒的免疫反应;正常组织保护法,导入外源基因增强正常细胞对化疗和放疗的抗性,最大限度减小化疗和放疗对正常组织的损伤;药物打靶法,导入外源病毒特殊酶的基因,使这个基因选择性地在肿瘤细胞中表达,进而把一些低毒的原药转化为高毒药物,有针对性地杀伤肿瘤细胞;基因取代疗法,导入外源基因纠正抑癌基因的缺陷,恢复抑癌功能.     

乙肝患者胎盘MDR1 mRNA表达及意义

目的:探讨MDR1 mRNA在乙肝患者胎盘组织中的表达及其意义。方法:选取乙肝患者足月胎盘20例;选择正常产妇足月胎盘20例作为正常对照组。实时荧光定量RT-PCR分别检测两组产妇胎盘中MDR1mRNA的表达。结果:各组荧光定量PCR检测MDR1mRNA的相对表达量为乙肝组(0.454±0.398),正常组(0.086±0.099),与对照组相比,差异有显著性(P<0.001)。结论:MDR1mRNA在胎盘组织中表达的升高,可能与乙型肝炎病毒感染有关。     

Prediction of multiple drug resistance phenotype in cancer cell lines using gene expression profiles and phylogenetic trees

When microarray gene expression data are used to predict multiple drug resistance (MDR) phenotypes for anticancer drugs, the normalization strategy and the quality of the selected signature genes are usually the main causes of inconsistency among different experiments. A stable statistical drug response prediction model is urgently required in oncology. In this study, the microarray gene expression data of multiple cancer cell lines with MDR was analyzed. For each probe-set, the expression value was defined as present/absent (1/0) and was classified into a gene set defined with protein domain organization (PDO). After employing the gene content method of phylogenetic analysis, a phylogenetic model (cell tree) for MDR phenotype prediction was built at the PDO gene set level. The results indicate that classification of cancer cell lines is predominantly affected by both the histopathological features and the MDR phenotype (paclitaxel and vinblastine). When applying this model to predict the MDR phenotype of independent samples, the phylogenetic model performs better than signature gene models. Although the utility of our procedure is limited due to sample heterogeneity, it still has potential application in MDR research, especially for hematological tumors or established cell lines.     

Several alleles of the multidrug-resistance gene are closely linked to chloroquine resistance in Plasmodium falciparum

The lethal form of human malaria caused by Plasmodium falciparum is virtually uncontrollable in many areas because of the development of drug resistance, in particular chloroquine resistance (CQR). CQR is biologically similar to the multiple drug resistance phenotype (MDR) of mammalian tumour cells, as both involve expulsion of drug from the cell and both can be reversed by calcium channel antagonists. A homologue (pfmdr1) of the mammalian multidrug resistance gene has been implicated in CQR because it is amplified in some CQR isolates of P. falciparum as is an mdr gene in MDR tumour cells. We show here that the complete sequences of pfmdr1 genes from 2 CQ sensitive (CQS) P. falciparum isolates are identical. In 5 CQR isolates, 1-4 key nucleotide differences resulted in amino acid substitutions. On the basis of these substitutions, we have correctly predicted the CQS/CQR status of a further 34 out of 36 isolates. This is a paradox as CQR arises much less frequently than would be predicted if single point mutations were sufficient. We conclude that a mutated pfmdr1 gene is one of at least two mutated genes required for CQR.     

靶向肿瘤多药耐药基因mdr1的siRNA的构建与鉴定

mdr 1基因及其表达产物P-gp是引起肿瘤细胞多药耐药(MDR)的主要原因,抑制mdr 1基因的表达可用于逆转MDR.RNAi可用于特异抑制靶基因的表达,本研究的目的是构建获得可特异有效靶向mdr 1基因的siRNA元件.应用siRNA设计软件与mRNA结构分析软件设计构建了3个分别靶向mdr 1基因mRNA环结构和茎结构的siRNA元件,同时构建了携带mdr1基因序列的luc报告质粒,通过siRNA表达质粒与携带靶序列的报告质粒的共转染抑制实验检测不同siRNA的抑制效率,结果显示靶向环结构siMDR1B具有较好的抑制效率和特异性.进一步将siMDR1B表达载体与mdr1基因表达载体共转染细胞,应用免疫流式细胞术检测显示,相比对照细胞,siMDR1B可显著抑制其转染后mdr1基因产物P-gp蛋白的表达活性.同时采用CCK-8细胞活性检测试剂评价了siMDR1B对细胞活性的影响,结果显示siMDR1B不会影响细胞活性,具有良好的特异性.本研究获得的可有效靶向mdr 1基因的siRNA元件可为进一步开展逆转MDR研究提供重要基础.     

反义基因逆转肿瘤细胞多药耐药性和诱导细胞凋亡的研究

探讨克服肿瘤细胞多药耐药（ＭＤＲ１）性的方法,提高化疗效果。本文采用多药耐药反义基因（ＭＤＲ１－ＲＳＰＳ－ＯＤＮ）逆转Ｋ５６２／ＡＤＭ肿瘤细胞的ＭＤＲ１,诱导肿瘤细胞凋亡,发现ＭＤＲ１－ＡＳＰＳ－ＯＤＮ诱导Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞株细胞产生大量ＤＮＡ断片,ＦＡＣＳ检测发现几乎全部ＭＲＤ＋Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞发生凋亡。其结果表明ＤＭＤＲ１－ＡＳＰＳ－ＯＤＮ能有效、特异地抑制ＭＤＲ１基因表达,逆转肿瘤细胞的ＭＤＲ１,促进阿霉素诱导ＭＤＲ＋１Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞凋亡,为其临床应用提供理论依据     

Western-blot方法分析人甲状腺及其肿瘤组织中bFGFs

目的：研究人甲状腺瘤的发生分期ｂＦＧＦｓ（ｂａｓｃ Ｆａｂｒｏｂｌａｓｔ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒｓ）基因异常表达的关系。方法：采用Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ方法对人甲状腺及其肿瘤组织来源的ｂＦＧＦｓ进行分析研究。结果：人正常甲状腺组织来源的ｂＦＧＦｓ分子量为１７ＫＤ和１８ＫＤ,而人甲状腺肿瘤组织来源的ｂＦＧＦｓ为１４ＫＤ、１７ＫＤ和１８ＫＤ。结论：１４ＫＤｂＦＧＦｓ的出现提示人甲状腺肿瘤的发生和发展可能与ｂＦＧＦｓ的基因异常表达有关。