儿茶素对晚期糖基化终末产物诱导的内皮细胞凋亡的干预作用

目的探讨儿茶素对晚期糖基化终末产物（AGEs）诱导内皮细胞凋亡的干预作用。方法糖孵育法制备晚期糖基化终末产物,分离肾血管内皮细胞,将内皮细胞分成空白对照组、AGE组、浓度分别为10、15、20μg／ml的儿茶素组共五组。实验末,采用AlamarBlue还原法测定同内皮细胞增生活力,TUNEL法测定细胞凋亡率,生化法测定培养上清中·OH、MDA浓度,RT-PCR测定Bcl-2mRNA表达,Western-Blotting测定Bcl-2蛋白活性。结果与对照组相比,AGE组内皮细胞增生活性、Bcl-2基因与蛋白活性显著降低（P均〈0．01）;凋亡率、·OH与MDA浓度显著增加（P均〈0．01）;与AGE组相比,儿茶素各浓度组内皮细胞增生活力与Bcl-2基因与蛋白活性表达增高,凋亡率、·OH与MDA浓度降低;儿茶素各剂量组之间呈浓度梯度效应。结论儿茶素可降低AGEs引起的血管内皮细胞凋亡,其机制可能是通过有效清除活性氧自由基、上调Bcl-2mRNA与活性蛋白表达,阻断内皮细胞内过氧化物的堆积二种途径实现的。     

姜黄素诱导肝癌HepG2细胞凋亡及其对bcl-2及survivin蛋白表达的影响

目的 研究姜黄素对HepG2细胞凋亡的促进作用,并探讨其可能的的作用机制.方法 实验分为空白对照组、1 mg/ml、1.5mg/ml、2mg/ml的姜黄素处理组,MTT法检测不同浓度姜黄素对细胞增殖抑制情况;电镜观察细胞形态及其结构变化;流式细胞术检测凋亡率;Western blot检测各组作用24 h后细胞中bcl-...     

参附动员内皮祖细胞改善肝移植大鼠缺血再灌注损伤

目的 观察参附注射液对发生肝移植缺血再灌注损伤(IRI)的大鼠外周血中内源性内皮祖细胞(EPCs)的作用以及此作用对其肝脏功能的影响.方法 100只雌性SD大鼠随机分为3组:原位肝移植(0LT)+参附(SF)组,OLT对照组,假手术组.3组均于术后第1、4、7天取血液标本流式细胞术检测外周血内皮祖细胞数量及生化分析仪检测肝功能,观察胆汁分泌量,并取肝组织标本进行HE染色形态学观察肝脏损伤.结果 OLT+ SF组外周血中的EPCs在术后1天开始增加,第4天达到高峰并持续至第7天;并且在3个时间点上,OLT+ SF组的外周血EPCs数量较其它两组明显增加,具有统计学意义(p ＜0.01);OLT+ SF组在用药后IRI有所改善,较对照组有统计学差异(p＜0.05).结论 参附注射液能显著动员大鼠骨髓中的内源性EPCs进入外周血,修复损伤的肝血窦,改善微循环,进而改善肝移植术后的缺血再灌注损伤.     

香烟烟雾提取物对人内皮细胞细胞色素C氧化酶活性及细胞凋亡的影响

目的探讨香烟烟雾提取物（cigarette smoking extract,CSE）对内皮细胞细胞色素C氧化酶（cytochmme Coxidase,COX）活性及凋亡的影响。方法体外培养ECV304,分别给予0％、0．5％、1％、5％CSE刺激12h,及5％CSE刺激0h、6h、12h、24h后,生化法检测COX活性;投射电镜和流式细胞仪观察细胞凋亡情况。结果CSE引起COX活性下降,且随着刺激浓度和时间的增加而下降（P〈0．05）;电镜示CSE干预组细胞出现明显的凋亡形态学改变;流式细胞仪结果示不同浓度CSE分别作用12h后凋亡率依次增高,除O％CSE组和0．5％CSE组间比较无统计学意义（P〉0．05）,余各组间比较均有统计学意义（P〈0．05）;5％CSE作用不同时间后,随着干预时间的延长细胞凋亡率逐渐升高（P〈0．05）。结论CSE抑制内皮细胞COX活性,呈浓度和时间依赖性;CSE诱导内皮细胞凋亡,呈浓度和时间依赖性;COX活性的下降可能在CSE所致的内皮细胞凋亡中具有重要作用。     

Survivin过表达对MS1细胞Survivin基因及蛋白表达与凋亡的作用

目的 探讨Survivin过量表达对MS1细胞Survivin基因及蛋白表达与凋亡的影响.方法 构建Survivin真核表达载体,以脂质体转染MS1细胞,采用流式细胞仪的方法检测细胞凋亡;Real-time PCR和Western blot检测Survivin的mRNA及蛋白水平.结果 转染Survivin实验组与空载体对照组比较,Survivin mRNA和蛋白表达明显增高,实验组细胞凋亡率较对照组下降.结论 Survivin过表达可使MS1细胞的Survivin蛋白及mRNA高表达并能使细胞凋亡凋亡率下降,为后续的动物实验打下了理论依据.     

青蒿水提液对肺癌A549细胞的影响

目的研究青蒿水提液对肺癌A549细胞株增殖的影响和诱导凋亡的情况。方法不同浓度青蒿水提液作用于细胞不同时间,四甲基氮噻唑蓝（MTT）法检测吸光度值（A490nm）并计算增殖抑制率;AnnexinV-FITC／PI荧光染色后流式细胞仪检测细胞凋亡率;并以荧光显微镜观察细胞形态改变情况;蛋白质印迹法分析细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表这。结果青蒿水提液呈时间和剂量依赖性抑制A549细胞增殖;荧光显微镜下A549细胞出现不同时期凋亡特征性改变;流式细胞仪检测细胞凋亡率随着药物浓度增加而升高;A549细胞株的Bax蛋白表达量增多、Bcl-2蛋白表达量下降。结论青蒿水提液促进体外培养的A549细胞株增殖抑制并诱导凋亡,其机制可能与A549细胞Bax表达上调和Bcl-2表达下调有关。     

Effect of temperature on in vitro proliferative activity of human umbilical vein endothelial cells

Human umbilical vein endothelial cells, skin fibroblasts, and retinal pigment epithelial cells are cultivated in medium supplemented with 15 to 20% serum in our laboratory. The effects of various incubation temperatures on the proliferation of these cells was examined. Our study shows that the mitogenic response of the endothelial cells to a change of temperature differed markedly from that of the fibroblasts and epithelial cells. Cultivation of human umbilical vein endothelial at 37°C required seeding densities as high as 1–2×10⁴ cells/cm², and yet resulted in a low growth rate and premature senescence. However, under the same culture conditions, but at 33°C, the proliferative capacity of these endothelial cells was potentiated. The results were striking; at 33°C the cells grew actively and the life span was extended. The number of cumulative population doublings increased fourfold compared with that for the same cells cultivated at 37°C. The inoculum size could be reduced, since at 33°C the endothelial cells were able to replicate at seeding densities as low as 20 cells/cm². The cells serially subcultured at 33°C retained morphological features and specific immunological markers of endothelial cells.     

脂联素对1型糖尿病小鼠视网膜节细胞和血管的影响

目的:研究脂联素对1型糖尿病小鼠视网膜节细胞和血管的影响.方法:使用玻璃体腔内注射脂联素,腹腔内注射链脲佐菌素(STZ),免疫荧光,非侵入性眼压测量等实验方法,对1型糖尿病的视网膜节细胞数量的改变和血管形态的变化做研究.结果:1型糖尿病鼠脂联素组的眼压比1型糖尿病鼠对照组明显低(p＜0.01),而与正常鼠脂联素组相比明显升高(p＜0.01).与1型糖尿病鼠对照组相比,1型糖尿病鼠脂联素组的视网膜血管管径更粗一点.Brn3a+视网膜神经节细胞在1型糖尿病鼠脂联素组明显比1型糖尿病鼠对照组要多(p＜0.05),而与正常鼠脂联素组比较明显低一些(p＜0.01).结论:脂联素可明显改善1型糖尿病小鼠视网膜神经节细胞数量的下降,并可延缓视网膜血管形态的变化.APN有成为一种治疗糖尿病性视网膜病变的潜在可能性.     

NSA2在激光诱导的小鼠脉络膜新生血管模型中表达的时相性和定位研究

目的探讨NSA2在激光诱导的小鼠脉络膜新生血管（choroidal neovascularization,CNV）模型眼组织中的表达及其意义。方法532nm激光诱导C57BI/6J小鼠CNV模型。用CD31抗体标记血管内皮细胞的方法对CNV模型进行鉴定,采用RT-PCR和Western blotting方法检测正常对照组和光凝后1d、3d、5d、7d和14d组小鼠CNV中NSA2mRNA和蛋白表达的时间变化规律。取光凝后7d组小鼠眼做眼球冰冻切片,用免疫荧光染色方法对NSA2蛋白在CNV中的表达进行定位研究。结果NSA2在正常小鼠的视网膜脉络膜组织中弱表达。视网膜光凝后,NSA2mRNA和蛋白在CNV模型眼组织中的表达有明显的时间变化规律,光凝后l～3d逐渐增强,3d达高峰,之后逐渐减弱,14d时仍稍高于正常水平。同时发现NSA2在CNV区域表达较强。结论NSA2在CNV形成早期表达上调,具有明显的时间变化规律,且在CNV区域有较强的表达,因此我们推断NSA2可能在CNV形成这一病理过程中起着重要作用。