动物mtDNA的研究及在鱼类生态学中的应用

概述了动物线粒体的主要特征、动物线粒体DNA(mtDNA)的结构特点、多态和进化；以及线粒体DNA多态研究方法，最后介绍了动物mtDNA的多态性在研究鱼类群体遗传结构上的应用。     

一母系遗传非综合征耳聋家系的线粒体DNA突变分析

在问卷调查及家系随访的基础上,在安徽省淮北市收集到一母系遗传非综合征耳聋家系,利用聚合酶链式反应-限制片段长度多态性分析(PCR-RFLP)和测序技术,检测了该家系成员线粒体DNA(mtDNA)上可导致非综合征耳聋的两个突变热点处(12S rRNA基因上的1 555位点和tRNASer(UCN)基因上的7 445位点)的碱基变化,发现该家系所有母系成员的mtDNA上都有A1555G同质型突变,但7 445位点无异常;进而对该家系两个表型明显不同母系成员(一例具有先天性耳聋表型,另一例听力正常)的mtDNA进行全长测序,结果未在mtDNA上发现除A1555G以外的其他位点突变,只发现了27处多态性序列变化,且两成员的mtDNA无序列差异.说明mtDNA上的A1555G同质型突变是该家系部分母系成员致聋的分子生物学基础之一;推测该家系A1555G突变携带者临床表型的差异可能与mtDNA多态性无关,而更可能是核修饰基因与A1555G突变协同作用的结果.     

白蚁mtDNA提取方法改良及检测

利用mtDNA多态性进行种类鉴定是一种分子生物学常用方法,从DNA水平对白蚁进行物种鉴别并探讨物种的进化,其必要前提是提取到一定数量和质量的mtDNA．在分离得到线粒体后,分别采用CTAB、SDS2种方法提取mtDNA．紫外分光光度计检~I]DNA纯度及浓度,用mtDNA特异性引物进行PCR扩增检测．试验证明2种方法均能成功提取白蚁的mtDNA,SDS法提取效果较好．     

乌金猪mtDNA D-Loop区的遗传多样性

为揭示乌金猪3个地方类群遗传多样性及其分布情况.以乌金猪的3个地方类群凉山猪、大河猪和柯乐猪为对象,研究了线粒体DNA Ｄ环高变区（mtDNA D-loop HVI）的序列多态性.研究表明,在全长290 bp的核苷酸序列中共检测到46个突变位点,其中简约信息位点为5个,单一多态位点为37个,其中以A/G突变为主.凉山猪的3个类群（昭觉、美姑、西昌）首先聚为一类,然后凉山猪与大河猪聚为一类,最后凉山猪与柯乐猪聚类.3个地区的乌金猪有2个母系起源,大河猪与凉山猪为一个母系起源,柯乐猪为另一个母系起源.就总体而言,乌金猪的各地方类群凉山猪与大河猪遗传亲缘关系最近,其次是柯乐猪,有2个母系起源.     

内蒙古赤峰地区青铜时代古马线粒体DNA分析

为了探索中国家马的起源,对内蒙古赤峰地区大山前和井沟子遗址青铜时代9匹古马进行了线粒体DNA(mtDNA)研究,分别扩增并测序了线粒体16S rRNA基因和mtDNA控制区(D-loop)片段.结合东亚、中亚、近东、欧洲等地家马的mtDNA序列进行系统发育网络分析(phylo-genetic network).对极端保守的16S rRNA基因分析表明赤峰地区的埋藏环境适合古DNA的保存.系统发育网络显示9匹古马并没有聚集在一个聚簇中,而是分散在具有一定地理分布倾向的现代家马聚簇中.研究发现赤峰地区古马的母系遗传呈现高度多样性,对现代家马mtDNA基因池的形成具有重要的贡献,从一个侧面反映了中国家马起源的复杂性.     

苏姜猪线粒体基因组全长测序及线粒体基因多样性分析

从分子水平上探究苏姜猪的遗传多样性,采用二代测序方法测定了苏姜猪线粒体基因组全序列,整合NCBI数据库中已公布的家猪类,以及本实验室测定的苏姜猪线粒体基因组全序列,使用蛋白编码基因和rRNA基因联合的数据集,基于贝叶斯法(BI法)和最大似然法(ML法)构建了家猪类的系统发生树,测序结果表明,该样本线粒体基因组全长15 436 bps,包含典型的家猪类线粒体基因组37条基因,结构紧凑,其线粒体基因组碱基组成(A+T)约占40%,(C+G)约占60%,t RNA总共有8处错配,结果表明苏姜猪具有丰富的遗传多样性,江海型线粒体核苷酸多态性高于全国6个类型猪的平均水平,体现了其独特的遗传多样性.在基于线粒体基因组完整编码区的系统发育分析中,苏姜猪在中国6个类型家猪中单独成为一支,支持其作为一个新猪种而存在.     

真菌的分子生物学鉴定方法

真菌的分子生物学鉴定的方法及原理，真菌DNA碱基组成的分类鉴定、DNA分子杂交、真菌mtDNA限制性片段长度分态性的分析以及随即扩增多态性DNA分析。     

勒氏笛鲷（Lutjanus russellii）线粒体DNA全序列的测定与分析

通过长距PCR法(long-PCR)测得勒氏笛鲷(Lutjanus russellii)全长16505 bp的mtDNA基因组全序列(GenBank序列号:EF514208).序列分析结果表明,南海海域勒氏笛鲷的mtDNA基因组全序列结构组成与其他硬骨鱼类的结果较为一致,由13个蛋白编码基因,22个tRNA基因,2个rRNA基因和非编码区组成.序列比对显示,勒氏笛鲷和蓝点笛鲷(L.rivulatus)所属的笛鲷科(Lutjanidae)与黑带鳞鳍梅鲷(Pterocaesio tile)所属的梅鲷科(Caesionidae)的亲缘关系密切.勒氏笛鲷全序列虚拟酶切结果证明了以往纯化mtDNA的限制性酶切长度多态性分析(mtDNA-RFLP)所得结果的可靠性;所开发的长距PCR引物能快速获取足量的mtDNA大片段进行限制性酶切长度多态性分析,可应用于物种辨别和群体分析.     

鲇16SrRNA基因扩增片段的RFLP研究

利用PCR技术进行了鲇(Silurus asotus)5个地理种群线粒体DNA(mtDNA)限制性片段长度多态性(RFLP)研究.这5个地理种群是长江上游支流(四川境内的攀枝花雅砻江、岷江、自贡、贵州遵义的乌江)和长江中游支流沅江上游的潕阳河.选用10种限制性内切酶水解,只有HaeIII产生了限制性片段长度多态性.在长江上游支流的各地理种群之间不存在限制性片段长度多态性,长江中游支流沅江上游的潕阳河地理种群与长江上游支流的各地理种群间在该基因片段上存在一定程度的多态性变异.     

黑线仓鼠与大仓鼠线粒体DNA控制区全序列SNPs分析

以华北地区大仓鼠和黑线仓鼠为研究对象,运用第三代DNA分子标记SNPs(single nucleotide polymorphisms)技术,研究了其线粒体DNA控制区(mtDNA D-loop)全序列的单核苷酸多态性.结果表明:在黑线仓鼠和大仓鼠种群中共检测到11个单倍型,22个多态位点,其中只有2个是颠换,其余都是转换.不同种群的核苷酸多态性不同,种群内的核苷酸多态性小于种群间的核苷酸多态性.线粒体DNA D-loop全序列适合作黑线仓鼠和大仓鼠的核苷酸多态性和遗传进化关系的分析.     

猪胆汁酸的药理作用研究(Ⅱ)——猪胆汁酸镇咳作用的初步观察

本文利用提取胆红素后的猪胆汁废液所制备的猪胆汁酸,作对SO_2诱发咳嗽的正常NIH系小白鼠镇咳效果观察。结果表明;猪胆汁中的胆汁酸对SO_2诱发咳嗽的小白鼠具有延长诱发咳嗽潜伏期和减少单位时间内咳嗽次数的效果。当口服15mg/kg时,诱发咳嗽的潜伏时间平均延缓6秒以上,P<0.01,与中成药蛇胆川贝散相一致;单位时间的咳嗽次数减少43％以上,P<0.01,优于蛇胆川贝散的效果。提示猪胆汁酸与贝母、桔梗等配伍时,对延长潜伏期具有协同作用。     

猪胆汁酸组份的药理作用研究(Ⅰ)——猪胆汁酸的抑菌作用

本文报导了从猪胆汁中分离出的猪胆酸、猪去氧胆酸及其组合物对部分革兰氏阳性菌具有明显的抑制作用,为开拓猪胆汁酸的应用提出了依据。     

Research on an active and continuous monitoring system for human respiratory system

Continuous and dynamic measurements of human respiratory parameters are very important for vital diseases of respiratory system during mechanical ventilation. This paper analyzed the structure and mechanical properties of the human respiratory system, and designed an active intervening monitoring micro system for it. The mobile mechanism of the micro system is soft and earthworm-like movement actuated by pneumatic rubber actuator, the measurement and therapy unit of the system is an extensible mechanism with sensors in the front. The micro monitoring system can move in respiratory tract and measure the respiratory parameters in bronchium continuously. Experiments had been done in swine＇s respiratory tract, the results proved that the micro robot system could measure the respiratory parameters in real-time successfully and its movement was smith in swine＇s respiratory tract.     

中国猛禽类线粒体DNA遗传多态性研究进展

鸟类线粒体ＤＮＡ的研究在种群生物学和进化生物学研究方面越来越显示出重要的作用,特别是在遗传多态性和基因流研究方面更具特殊意义。简要回顾了鸟类线粒体ＤＮＡ的研究历史,并分析了中国猛离线粒体ＤＮＡ遗传多态性的研究现状及进展,要点：１．猛禽类线粒体基因组大小存在遗传多态性,２：猛禽类线粒体ＤＮＡ的进化速率与哺乳类相同,３;种间或种内存在丰富的遗传变异;４．不同地理种群存在ｍｔＤＮＡ克隆群的连续性。     

凤尾菇线粒体DNA片段的克隆与同源性分析

将Ｓａｕ３ＡＩ部分酶切的凤尾菇线粒体ＤＮＡ插入质粒载体的ｐＢＳ＾＋的ＢａｍＨＩ位点，然后以凤尾基线粒体ＤＮＡ为探针与重组质粒ＤＮＡ进行斑点杂交，筛选到６个阳性克隆，选取其中２个阳性克隆的插入片段分别与来６个属的１３个食用菌品种的线粒体ＤＮＡ进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交，其结果显示两探针能与所有测定的侧耳属品种的线粒体ＤＮＡ杂交，并具多态性，但与其它属线粒体ＤＮＡ只有不同程度的杂交，两探针中Ｈ４的杂交范     

一种四膜虫线粒体DNA提取的新方法

本文根据四膜虫线粒体DNA（mtDNA）对碱稳定这一特性，建立了一种更为简便的，能直接提取四膜虫线粒体DNA的方法。该方法快速简便，重复性好，可用于游离细胞材料mtDNA的提取。     

茄子雄性不育株和可育株的胞质DNA和核DNA差异分析

以茄子(Solanum melongenaL)雄性不育株“正兴1号”(S)和可育株(F)的总DNA为模板,对60个随机引物进行了筛选,找到5个其RAPD(Random amplified polymorphic DNA,RAPD)扩增产物在茄子雄性不育系和对照材料间存在稳定差异的引物．将该5个引物同时扩增总DNA、核DNA和线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)．以总DNA为模板时得到多态性片段9个,以核DNA为模板时得到5个,以mtDNA为模板时得到9个．以总DNA为模板时得到的9个扩增片段中,有5个在总DNA和mtDNA中同时出现,而在核中没有出现,即认为来自mtDNA,这5个片段中,有4个来自可育株,1个来自不育株,说明不育株和可育株在mtDNA上存在差异;有4个片段同时出现在以总DNA和核DNA为模板的扩增中,但在以mtDNA为模板的扩增中却没有出现,认为是来自核DNA,这4个片段中,有3个来自不育株,一个来自可育株,说明可育株和不育株在核DNA上也存在差异．结果初步表明：新发现的茄子雄性不育可能是核质相互作用所引起．     

改良碱变性法抽提冷冻山羊肝脏组织线粒体DNA

通过实验建立了一种简便、快捷地从冷冻山羊肝脏组织中制备高质量线粒体DNA（mtDNA）的方法.以差速离心法分离线粒体,用碱性SDS法裂解线粒体膜,释放线粒体DNA后用酚／氯仿抽提.与其他方法相比较,该方法具有对组织新鲜度要求不高,快速、简便、经济、产品产量高以及稳定性好等特点,其得率和纯度均能满足mtDNA多样性分析的要求.     

恩施悬棺人骨mtDNA初步分析

本文以恩施宋代悬棺的骨骼或牙齿样品为对象,经过一系列的处理,获得并扩增了mtDNA的HVSI区的部分序列,通过几个实验初步认定是古DNA.同时通过与部分现代人mtDNA数据的比较参照,对所研究样品单倍群归属进行了初步确定,发现他们主要属于南方类型,但也可能有北方成分.