精氨酸激酶及其底物复合物的结晶和结晶学初步研究

精氨酸激酶是一种存在于无脊椎动物体内的磷酸源激酶,对于无脊椎动物体内能量的代谢、储存和利用具有至关重要的作用.海参体内的精氨酸激酶在磷酸源激酶的进化中具有特殊的地位,氨基酸序列比对的结果表明:它与鲎源单亚基精氨酸激酶的氨基酸序列的同源性为64%,而与双亚基兔肌肌酸激酶的氨基酸序列同源性却达到了75%.为了揭示海参源精氨酸激酶的催化机理,研究其与单亚基精氨酸激酶及肌酸激酶催化机理的异同,实验获得了精氨酸激酶复合物晶体,取得了X射线衍射数据,进行了结晶和结晶学的初步研究.     

用点突变方法研究海参精氨酸激酶的活性位点

为研究动物能量代谢,用点突变的方法从双亚基海参(Stichopusjaponicus)精氨酸激酶中得到了3个突变体:C274A、R283G和H287A,并通过大肠杆菌E.coli表达。大部分精氨酸激酶都以包涵体的形式存在。经过纯化之后对3种突变体的催化活性和一些结构特征进行了分析。这3种突变体丧失了绝大部分催化活力,特别是突变体C274A,与野生型相比除了活性完全丧失之外,结构却几乎没有变化。这3个残基对海参精氨酸激酶结构或功能的保持有着重要作用,Cys274残基可能是海参精氨酸激酶的活性位点。     

昆虫病原线虫及其在害虫防治中的应用

介绍了昆虫病原线虫的分类、生物生态学特性及在害虫防治中的研究进展,展望了昆虫病原线虫的发展前景。     

精氨酸激酶基因的蛋白表达及实时荧光定量分析

为构建棉铃虫精氨酸激酶基因(AK)的原核表达系统及确定2种不同品系的棉铃虫体内AK的表达量差异,以pET-28a质粒为表达载体,将AK基因重组转化至大肠杆菌BL21中进行原核表达。采用SDS-PAGE电泳及实时荧光PCR定量分析。结果表明:经IPTG诱导AK基因在大肠杆菌BL21得到表达,表达的融合蛋白其分子量与预测结果一致;石河子地区田间品系棉铃虫体内AK基因的表达量远远大于敏感品系棉铃虫体内AK基因的表达量为77.36%,表明石河子田间品系棉铃虫的生命代谢活动的能力要强于敏感品系。     

天门冬氨酸对精氨酸激酶的作用研究

应用酶活测定、荧光发射光谱等方法分析了精氨酸激酶在不同浓度天门冬氨酸中活性变化和去折叠动力学。实验结果表明：天门冬氨酸引起精氨酸激酶失活与去折叠,并且过程中没有蛋白质的聚沉;精氨酸激酶的去折叠遵循一级反应动力学的二相过程,包括快相和慢相;失活与天门冬氨酸浓度呈正相关;当去除天门冬氨酸的影响,精氨酸激酶的活力能得到恢复。通过对比实验结果暗示,天门冬氨酸是通过其解离状态的H＋改变了机体pH值而影响精氨酸激酶活性的,并且就天门冬氨酸对精氨酸激酶影响及其意义进行探讨。     

昆虫性信息素在害虫防治中的应用

介绍了昆虫性信息素在害虫防治中的应用,其中包括害虫的预测预报、诱杀成虫、干扰交尾及存在的问题和应用前景。     

锯缘青蟹精氨酸激酶基因的克隆与表达

通过分子生物学方法,克隆得到锯缘青蟹（Scylla serrata）精氨酸激酶（Arginine Kinase,AK）开放阅读框基因序列.测序结果显示：该开放阅读框基因的序列长度为1 071 bp,编码356个氨基酸残基;该序列登录Genbank（GQ：851626）,序列比对结果显示,锯缘青蟹精氨酸激酶与凡纳滨对虾（...     

生境与害虫防治

本文综述了改变害虫生境的不同措施在害虫防治中的应用 ,并对其前景作了展望。     

昆虫病原线虫在林业害虫防治中的应用

我国森林害虫有4000～5000种,易于暴发成灾的熏要害虫达几十种,每年发生面积近600万公顷,如松毛虫年发生达150万公顷,杨树蛀干害虫发生近50万公顷,杨树食叶害虫达70万公顷,大小蠹虫近30万公顷等等,每年国家需要投入巨额经费开展防治,以保护绿化的成果和挽回经济损失。本文仅就昆虫病原线虫在林业害虫防治中取得的进展做简要综述。     

家蝇防御素defensin cDNA的克隆及在毕赤酵母中的表达

提取家蝇总RNA,RT-PCR扩增编码家蝇防御素defensin的cDNA,克隆并测定了其序列,将该cDNA序列与酵母表达载体pPICZαA重组,构建酵母分泌型表达载体pPICZα-de,电激法转化毕赤酵母(Pichia pasto-ris)受体菌GS115。经表型筛选和PCR鉴定证明目的片段已稳定整合到酵母染色体基因组中。在含不同浓度的Zeoc in平板上筛选到高拷贝整合的转化子,阳性克隆经甲醇诱导表达,用Tric ine-SDS-PAGE确定了表达产物的正确性,琼脂孔穴平板扩散法、比浊法测定了表达产物的活性,对金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus具有一定的杀菌活性。     

舍蝇（Musca domestica vicina）发育与习性

在室温25℃±1℃,相对湿度55%～65%条件下,舍蝇的卵期0.92～1.25(1.04)d,幼虫期4～6.75(5.65)d,蛹期5～7.78(6.80)d,成虫产卵前期4～6(5.33)d.完成一个世代的发育需13.92～21.78(18.82)d.还报告了舍蝇各虫期的主要特征和卵、幼虫及成虫的重要习性.     

北京地区家蝇(Musca domestica L.)乙酰胆碱酯酶(AChE)动力学性质研究

实验结果表明,在北京地区家蝇种群以及实验室敏感系和用残杀威选育的抗性种群中,其乙酰胆碱酯酶(AChE)对乙酰硫代胆碱的米氏常数(K_m)值最大相差4倍,最大反应速度(V_(max))相差近8倍。敌百虫与家蝇AChE的双分子速率常数(Ki)值,农大敏感品系(SA)为7.41×10~4(L/mol,分~(-1)),而北京宜武种群AChE的Ki值仅为5.13×10~2,相差达144倍,崇文、密云和回龙观种群AChE的Ki值和SA品系相比,差异也在10倍以上,说明北京地区家蝇AChE对敌百虫的敏感度明显降低了。这些家蝇种群的AChE对敌百虫的亲合力(解离常数Kd)和SA品系相比,宜武种群相差近2890倍,其它种群也相差50倍以上,而磷酸化速率常数(k_2)则相差不大,说明北京地区家蝇对敌百虫的敏感度降低是由于解离常数—Kd值的改变造成的。     

舍蝇（Musca domestica vicina）幼虫分泌物及血淋巴活性研究

首次报告舍蝇幼虫分泌物具有抗根结线虫（Meloigyne sp.)活性,同时未经外源诱导的舍蝇幼虫,其分泌物和血淋巴提取液也有抗菌活性。IEF－PAGE电泳分析表明,幼虫分泌物和血淋巴提取液呈微酸性至弱碱性,前者电泳带为6条,后者7条,两者的第二和第五电泳带在同等的位置上。     

Cloning and molecular characterization of a gene encoding MAP kinase from maize and its expression in E. coli

A new MAPK gene, ZmSIMK1 （Zea mays L. salt-induced mitogen-activated protein kinase 1）, is isolatod from a maize eDNA library. The full-length ZmSIMK1 gene contains 1636 bp and an open reading frame of 1122 nucleotides capable of eneoding 373 amino acid polypeptides with a predicted molecular mass of 42.3 kda and pI of 6.01. The putative ZmSIMK1 protein contains all 11 conserved subdomains that are characteristics of serine/threonine protein kinases and the TEY motif, which is the putative phosphorylation site. Northern blot analysis shows that ZmSIMK1 is ubiquitously expressed in roots, stems, and leaves of maize seedlings and its mRNA accumulation is observed in maize seedlings treated with 30 mmol/L PEG-6000 and 137 mmol/L NaCl, but the expression of ZmSIMK1 is not significantly affected by 4℃ treatment. The expression vector pET-ZmSIMK1 is constructed by inserting the coding region of ZmSIMK1 eDNA into pET-42a（＋）, and transformed into E. coli strain BL21（DE3）. A 77kda fusion protein is induced by the further culture at 37℃ after addition of 1 mmol/L IPTG.     

纳豆激酶基因克隆及其在大肠杆菌中活性表达研究

以纳豆芽孢杆菌基因组DNA为模板，PCR扩增了纳豆激酶基因（natto kinase gene）中编码前肽、成熟肽的核苷酸序列（pro-NK），构建大肠杆菌表达质粒pTYB102，转化大肠杆菌ER2566。在IPTG诱导下，分别在15℃（14h）、30℃（3h）、37℃（2h）条件下培养，pTYB102均能表达出有活性的纳豆激酶。实验证实纳豆激酶基因得到活性表达需要Pro序列。SDS－PAGE表明，15℃和30℃和37℃培养表达的杂蛋白更少。薄层扫描测定表达的纳豆激酶占菌体总蛋白30％以上。     

频振杀虫灯防治西昌石榴害虫研究初报

2003年3月至2004年9月,在西昌黄联镇、安宁镇、礼州镇的多个石榴园,用“佳多”牌(A型)频振杀虫灯对石榴害虫进行防治,其杀虫效果极佳,可有效控制石榴主要害虫,特别是鳞翅目害虫的危害。     

智能控制及其应用综述

介绍了智能控制的产生背景以及智能控制的概念、性能和特点,分析了几种典型的智能控制技术及当前的工程应用现状。最后,对今后智能控制的发展前景进行了展望。     

智能控制及其应用综述

介绍了智能控制的产生背景以及智能控制的概念、性能和特点,分析了几种典型的智能控制技术及当前的工程应用现状.最后,对今后智能控制的发展前景进行了展望.