融合蛋白GSH-bFGF的构建、表达及体外活性检测

目的:设计构建和表达新型融合蛋白谷胱甘肽-碱性成纤维细胞生长因子(Glutathione-basic fibroblast growth factor,GSH-b FGF),并检测其体外抗氧化、抗衰老能力.方法:采用RT-PCR,酶切,连接,转化等分子克隆技术构建新型融合蛋白GSH-b FGF,并通过镍柱亲和层析、阳离子交换层析纯化该目的蛋白.通过CCK-8试剂盒检测GSH-b FGF对鼠源成纤维细胞NIH-3T3的促增殖活性.同时,经总抗氧化检测试剂盒检测GSH-b FGF的抗氧化能力.结果:克隆表达并纯化获得融合蛋白GSH-b FGF.CCK-8促增殖结果显示质量浓度为20 ng/m L的GSH-b FGF可显著促进鼠源成纤维细胞NIH-3T3增殖.体外抗氧化结果显示GSH-b FGF有显著的抗氧化活性,纯化得到的GSHb FGF蛋白的GSH浓度约为(0.06±0.02)μmol/L,抗氧化能力为(0.56±0.23)mmol/g.结论:新型融合蛋白GSHb FGF有显著的体外促增殖能力及抗氧化活性.     

异丙肾上腺素诱发大鼠特异性心肌缺血所引起心肌细胞病理组织的变化

目的 观察皮下注射不同天数异丙肾上腺素(1 mg/kg体质量)诱发大鼠特异性心肌病所引起心肌组织切片HE染色、VEGF(血管内皮生长因子)、FGF(成纤维细胞生长因子)表达及心电图T波的变化。方法 除空白组外各组大鼠皮下多点注射异丙肾上腺素(1 mg/kg),分别为连续皮下多点注射异丙肾上腺素(1 mg/kg)2 d组、连续皮下多点注射异丙肾上腺素(1 mg/kg)4 d组、连续皮下多点注射异丙肾上腺素(1 mg/kg)6 d组。给药1周后,大鼠麻醉,测心电图,取心脏,采用HE染色观察大鼠心肌细胞损伤程度的变化,采用免疫组化技术染色观察心肌组织切片VEGF(血管内皮生长因子)、FGF(成纤维细胞生长因子)表达的变化。结果 与空白对照组相比连续皮下多点注射异丙肾上腺素(1 mg/kg)6 d组HE染色组织切片镜下观察具有明显差异,同时随着造模时间的延长模型组心肌组织切片VEGF(血管内皮生长因子)、FGF(成纤维细胞生长因子)表达情况与空白对照组比也存在显著性差异。结论 本研究结果表明与空白对照组相比连续皮下多点注射异丙肾上腺素(1 mg/kg)6 d组模型大鼠特异性心肌病所引起的心肌组织切片HE染色、VEGF(血管内皮生长因子)、FGF(成纤维细胞生长因子)表达及心电图T波的变化具有显著性差异,因此大鼠连续皮下多点注射异丙肾上腺素(1 mg/kg)6 d可以作为特异性心肌病药效评价的实验动物模型使用。     

纹状体神经干细胞的分离培养及其鉴定

胎脑内存在有能分化为神经元和神经胶质细胞的神经干细胞 .在表皮生长因子 (EGF)或碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)存在的条件下 ,从 14d胎鼠纹状体分离培养神经干细胞 ,并通过间接免疫荧光细胞化学法对其鉴定 ,发现大量呈 Nestin抗原阳性的干细胞团的形成 ,EGF和 b FGF对神经干细胞的增殖及分化能产生一定的影响 ,但它们对增殖及分化的影响是有差别的 .     

成纤维细胞生长因子9的研究进展

成纤维细胞生长因子9（fibroblast growth factor 9,FGF 9）最初发现于人类神经胶质瘤细胞,是成纤维细胞生长因子家族的成员之一,广泛分布于人体各种组织中,是一个在胚胎发育过程中以及成年后许多生物学功能所需的有效促进有丝分裂和细胞生长的因子。本文综述了FGF 9的基因特点以及研究现状。     

FGF23通过FGFR4激活TGF-β通路促进心肌梗死后肾脏纤维化

目的 心肌梗死(心梗)常伴肾功能下降,然而其病理基础仍不清楚。本研究探讨成纤维生长因子23(FGF23)在心肌梗死小鼠肾脏纤维化进程中的作用,并阐明其作用机制。方法 通过外科手术结扎小鼠心脏前降支构建心肌梗死模型,利用小鼠心脏超声检测心功能变化,ELISA测定小鼠血浆FGF23水平,马松三色染色观察评估肾脏纤维化程度,免疫组化检测肾脏FGF23、成纤维细胞生长因子受体4 (FGFR4)和Klotho蛋白的变化,Western blotting检测小鼠肾脏组织和细胞中FGF23、FGFR4、Collagen I、Vimentin和TGF-β等蛋白的变化。结果 心肌梗死明显上调血浆和肾脏FGF23蛋白水平(P<0.05),心肌梗死后肾脏纤维化明显增加(P<0.05),肾脏FGF23、FGFR4、Collagen I、Vimentin和TGF-β蛋白水平显著上调(P<0.05)。然而,肾脏Klotho水平明显下调(P<0.05)。正常大鼠肾脏成纤维细胞(NRK-49F)中得到了类似的结果,FGFR4抑制剂(BLU9931)可以降低纤维化相关蛋白的表达(P<0.0...     

成纤维细胞生长因子23在慢性肾脏疾病血磷代谢中的作用

 成纤维细胞生长因子23(FGF23)是近年来发现的由骨细胞产生的一种激素,主要作用是抑制肾小管磷重吸收和1,25(OH)₂D循环水平。慢性肾脏疾病(CKD)是世界范围内影响数百万人的公共卫生疾病。FGF23循环水平升高导致的血磷稳态失调是CKD早期和普遍的并发症。本文综述FGF23家族结构、FGF23在调节磷和维生素D代谢中的作用及其合成和分泌的调控。重点介绍FGF23在CKD中与血钙、血磷及甲状旁腺激素(PTH)的作用机制,以及FGF23在评估CKD进展、预测预后中的作用。分析表明,FGF23可能成为慢性肾脏疾病骨和矿物质代谢中的重要诊断标志和治疗对象。     

乳铁蛋白对口腔癌细胞中VEGF和bFGF表达的影响

目的探讨乳铁蛋白对口腔癌细胞中血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)表达的影响.方法选用人口腔鳞癌细胞系CAL-27,分为0.006,0.013,0.025,0.050 g/L重组人乳铁蛋白实验组和空白对照组.应用RT-PCR法检测VEGF和b FGF mRNA表达水平;应用Western Blot法检测VEGF和b FGF蛋白表达水平.结果 CAL-27口腔癌细胞VEGF和b FGF mRNA均随着乳铁蛋白浓度增加表达量逐渐减少;0.050 g/L乳铁蛋白实验组VEGF和b FGF mRNA表达量明显低于空白对照组,差异具有统计学意义(P0.05).CAL-27口腔癌细胞VEGF和b FGF蛋白产物随着乳铁蛋白浓度增加表达量逐渐减少;0.050 g/L乳铁蛋白实验组VEGF,b FGF蛋白表达量明显低于空白对照组,差异具有统计学意义(P0.05).结论乳铁蛋白可有效抑制口腔癌细胞系CAL-27细胞中VEGF,b FGF的转录和表达,进而抑制血管生成,可作为乳铁蛋白抗口腔癌的机制之一.     

幼鼠正畸牙移动中牙周组织内b-FGF的动态变化

目的：研究碱性成纤维细胞生长因子（b—FGF）在幼年Wistar大鼠牙周组织内的表达与分布及其在正畸牙移动中的作用。方法：建立幼年Wistar大鼠正畸牙移动的模型,在不同牵引时间段用4％中性甲醛行升主动脉灌注固定、取材、脱钙、制作石蜡标本。应用SP免疫组织化学法和图象分析仪进行半定量分析。结果：正常大鼠牙周组织中b—FGF表达较低。实验组在1d组张力侧的成牙骨质细胞b—FGF表达高于对照组,10、14d组张力侧的成纤维细胞、成骨细胞b—FGF阳性着色较正常对照组及压力侧表达有显著性差异。玻璃样变区无b—FGF表达。结论：b—FGF参与了正畸牙移动过程中牙周组织的改建。     

山羊FGF5基因cDNA分子克隆及序列分析

采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,首次从山羊脑组织总RNA中扩增出成纤维细胞生长因子5(FGF 5)基因的cDNA编码序列.通过对序列的分析表明,克隆的山羊FGF 5cDNA编码序列与其他动物的序列具有高度的同源性.与G enbank中人和小鼠序列比较,山羊与人和小鼠的FGF 5核苷酸序列的同源性分别为91%和87%.编码的氨基酸序列比较,山羊和人的相似性为87%,山羊与小鼠的相似性为83%.如FGF s家族的其他成员一样,山羊的FGF 5蛋白也有一信号肽序列.山羊FGF 5基因外显子在编码氨基酸时,对同义密码子的使用表现有强烈的偏好性.不同物种对同义密码子使用的偏倚程度与偏好类型各不相同,也具有种属特异性.山羊FGF 5基因所编码的蛋白质中,20种氨基酸的含量差异很大,极性氨基酸含量高于非极性氨基酸含量.     

成果推介

成纤维细胞生长因子-2结构类似物生产方法及应用一、项目简介该项目由暨南大学生物工程研究所研制。其治疗烧烫伤的重组牛碱性成纤维细胞生长因子(rbbFGF)已获得新药证书,并与长春长生公司合作生产,是我国第二个基因重组一类新药;治疗脑中风的重组人碱性成纤维细胞生长因子(rhbFGF)现正申报临床批文。碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)是一种促细胞生长作用很强的多肽细胞生长因子,是一种广谱的有丝分裂原,对广泛的来源于中胚层和神经外胚层的细胞具有明显的促增殖作用和促细胞迁移作用。bFGF主要有促进血管新…     

威灵仙水提物对卵形鲳鲹源溶藻弧菌的抑制作用

近年来水产养殖行业不断扩大,但随之而来的鱼病对养殖行业造成了巨大损失.本研究以卵形鲳鲹(前期发病)上分离出的溶藻弧菌为实验对象,批量筛选多种中草药,选择抑菌效果最好的一种或几种中草药,并探究不同浓度中草药水提物的抑菌效果,确定其杀菌浓度(MBC)及最小抑菌浓度(MIC),再通过生化指标胞内乳酸脱氢酶(Lactate d...     

南方根结线虫侵染对乌桕癞皮夜蛾幼虫生长发育和食物利用的影响

为明确南方根结线虫(Meloidogyne incognita)侵染对癞皮夜蛾(Gadirtha fusca)幼虫的影响是否因龄期而异,本研究以南方根结线虫侵染乌桕(Triadica sebifera),选用该植株叶片饲喂癞皮夜蛾大龄幼虫,以未受南方根结线虫侵染植株的叶片作为对照,比较不同龄期幼虫生长指标和食物利用指标的差异。结果表明：随着幼虫龄期的增加,癞皮夜蛾幼虫体质量、取食量及发育历期呈上升趋势;相对生长率呈下降趋势;食物利用率和食物转化率先上升后下降,而近似消化率则呈先下降后略微上升的趋势。线虫侵染处理后,与对照相比,癞皮夜蛾4龄幼虫的相对生长率、食物利用率和食物转化率显著提高;5龄、6龄幼虫的虫体质量和5龄幼虫的相对生长率以及6龄幼虫的取食量、近似消化率、化蛹率显著降低。南方根结线虫侵染对癞皮夜蛾幼虫生长及食物利用的影响因发育阶段而异,主要通过抑制两个末龄龄期幼虫的生长发育及化蛹,从而间接减轻癞皮夜蛾对乌桕的危害。     

拟南芥雄性不育突变体opw(only pollen wall)候选突变基因的克隆

在T-DNA插入突变体Salk_059463株系的群体中,筛选到两株雄性不育突变体,对TDNA序列上的一对引物进行PCR鉴定,结果表明:其基因组中没有T-DNA插入.遗传分析表明这两株雄性不育突变体由同一单个隐性基因控制,引起不育的主要原因是从花药发育的第8期开始,小孢子细胞质内容物逐渐减少直至消失,到花药发育的第12期,药室内的小孢子只剩下一个花粉壁空壳,故该突变体命名为opw(only pollen wall).利用图位克隆的方法对OPW基因进行了定位,结果表明OPW基因位于第二条染色体上分子标记T28M21和T3G21之间的12 kb区间内,该区间内一共有21个基因注释.通过克隆区间内的基因并测序发现opw-1突变体基因组中At2g40140基因编码序列的外显子在第289和第290个碱基之间插入了一个A碱基,而opw-2突变体基因组中At2g40140基因编码序列的外显子在第412和第413个碱基之间插入了一个T碱基,造成的编码序列移码使第424至第426碱基成为终止密码子,故At2g40140是编码OPW的候选基因.     

Tup1基因缺失对酿酒酵母耐高糖性状的影响

研究Tup1基因对酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）细胞耐高糖性状的影响。利用Cre/loxP系统对单倍体细胞中的转录因子Tup1基因进行敲除,单倍体细胞复倍后研究基因缺失菌株的性状变化。结果表明,Tup1基因缺失虽然减弱了菌株的呼吸能力,但却增强了菌株在高浓度葡萄糖培养基中的生长和发酵能力。Tup1基因可能通过调节酿酒酵母细胞呼吸强度来调控细胞的高糖应激反应。     

红色赤潮藻对球形棕囊藻的化感作用研究

红色赤潮藻(Akashiwo sanguinea)和球形棕囊藻(Phaeocystis globosa)都是近年来在我国近岸海域频繁引发赤潮的藻类。为了探索红色赤潮藻和球形棕囊藻之间是否存在化感作用及作用方式,本研究采用不同起始密度培养红色赤潮藻与球形棕囊藻,并将前者的完整细胞培养液、无细胞滤液、藻液超声破碎液分别与球形棕囊藻进行混合培养,分析红色赤潮藻对球形棕囊藻细胞生长的影响。结果显示,在红色赤潮藻细胞起始密度保持5×10⁵ cells/L的混合培养条件下,起始密度分别为5×10⁵、1×10⁶、2×10⁶、1×10⁷ cells/L的球形棕囊藻生长均受到明显的抑制;无论是含有红色赤潮藻完整细胞的培养液,还是其无细胞滤液或藻液超声破碎液,均对球形棕囊藻的生长具有显著抑制作用(P<0.01),抑制强度由强至弱依次为完整细胞培养液、无细胞滤液和藻液超声破碎液;相反,球形棕囊藻的存在对红色赤潮藻细胞的生长无显著影响(P>0.05)。因此,红色赤潮藻具有抑制球形棕囊藻生长...     

木芙蓉对土壤铅离子的耐性及转移富集特性研究

为了解木芙蓉对土壤铅污染的修复潜力,以木芙蓉扦插幼苗为材料,通过盆栽试验研究不同程度土壤铅污染对木芙蓉幼苗生长、生理生化指标及铅离子转移富集特性的影响.结果表明:轻度(300 mg/kg)、中度(800 mg/kg)铅污染对木芙蓉幼苗生物量的影响不显著,植株生长正常;重度(1 300 mg/kg)铅污染对木芙蓉光合系统、抗氧化系统造成严重伤害,显著抑制了木芙蓉幼苗根长、根粗和生物量的增长.随着铅污染质量分数升高,幼苗根系铅含量显著上升,在重度铅污染时达到最大值,为1 610.106 mg/kg;地上地下部转移率在中度铅污染时达到最大值,为0.093;地下部富集系数在重度铅污染下大于1,与对照差异明显.说明木芙蓉根系对铅离子有较强富集能力,向茎叶转移较少,可作为修复轻度、中度铅污染的树种之一.     

不同栽培基质对两种石斛生长及生理的影响

以金钗石斛和蜂腰石斛为试验材料,采用菌渣、松树皮、草炭、木屑、椰糠和水苔为栽培基质,研究不同配比的栽培基质对两种石斛生长和生理的影响.筛选出更适宜两种石斛幼苗生长的最佳基质配方,为两种石斛的规模化生产奠定基础.结果表明:添加有菌渣、水苔、草炭和椰糠等材料的基质都较常规栽培基质(松树皮+水苔)能不同程度地增加两种石斛的成活率,有效提高生物量,促进植株生长.通过隶属函数综合评价可知,m(菌渣)∶m(松树皮)∶m(水苔)=1∶2∶1的基质配方最有利于金钗石斛幼苗的生长,而m(草炭)∶m(松树皮)∶m(椰糠)=1∶2∶1的基质最有利于蜂腰石斛幼苗的生长.且这两种混合栽培基质能有效增加金钗石斛和蜂腰石斛幼苗的叶绿素、可溶性糖和可溶性蛋白含量;增强POD和SOD活性,提高植株抗逆性.     

萘对铜绿微囊藻和聚球藻生长及叶绿素荧光影响的比较

为探究萘对不同粒径蓝藻的胁迫效应,采用5组不同质量浓度萘(0、0.01 mg/L、0.1 mg/L、1 mg/L、10 mg/L)分别对聚球藻(Synechococcus sp.)和铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa,PCC7806)进行为期7 d的处理,分析不同浓度萘处理下,藻细胞浓度、叶绿素a含量及叶绿素荧光参数的变化,探究不同浓度萘处理对2种藻的生长及生理影响。结果表明:(a)整个处理周期内,聚球藻的生长被显著抑制,其叶绿素a含量减小了3.9%~40.4%;(b)聚球藻的潜在光合作用能力、光合作用速率均有所减弱,但其耐受强光的能力有所增强,说明聚球藻对萘具有较强的敏感性;(c)萘对铜绿微囊藻生长具有显著的促进作用,增强了其潜在光合作用能力,但抑制了其细胞内叶绿素a的合成。     

Effects of electrolysis on Microcystis aeruginosa in water

Microcystis aeruginosa (blue-green algae) is of concern in relation to drinking water because of its ability to produce toxins and odors that can significantly impair water quality. The drinking water contaminated with toxic cyanobacteria could cause the death of the domestic and wild animals and the cases of human illness. To minimize the threat, the treatment of eutrophicated water containing algae (M.aeroginosa) was conducted via electrochemical oxidation process, with titanium based anode coated with RuO₂ in this study. The research showed that the electrochemical oxidation process was effective in inhibiting the growth of the algae such as M.aeruginosa. The electrolysis parameters such as: electrolysis time, current density, and electrodes distance were analyzed by the orthogonal collocation method. The results showed the electrolysis time was the dominant factor for the inhibition of the algal growth. The optimal operating conditions were: current density of 10 mA/cm² and the electrodes distance of 6 cm. The inhibitive efficiency was 92.64% with the electrolysis time of 40 minutes. The preliminary mechanism of this process was also explored and proposed in this paper.     

黄葛树对土壤铅、镉污染耐受性的研究

以黄葛树为实验材料,通过盆栽实验研究梯度浓度土壤外源铅胁迫(0,250,500,900mg/kg)、外源镉胁迫(0,5,10,20,30mg/kg)对黄葛树形态生长、生理生化特征的影响,旨在综合评价黄葛树对土壤铅、镉污染的适应性,为黄葛树对土壤铅、镉污染的修复潜力研究提供基础.结果表明:250mg/kg铅污染胁迫与5mg/kg镉胁迫对黄葛树株高、地径净生长量、可溶性糖质量分数、SOD活性均无显著影响;250,500mg/kg铅污染与5,10mg/kg镉污染显著增加了黄葛树叶片叶绿素质量比;实验组MDA浓度均显著高于对照;实验设置污染浓度内,900mg/kg铅胁迫与30mg/kg镉胁迫对黄葛树生长的抑制作用最强.研究说明:土壤铅、镉污染对黄葛树生长的影响具有"低促高抑"的特点,500,10mg/kg是铅、镉胁迫对黄葛树生长产生抑制作用的临界质量比,此临界质量比与土壤污染标准相比较可得黄葛树对镉胁迫的耐受性更强.