肝抑素研究Ⅱ——小鼠再生肝细胞分裂规律及兔肝抑素对肝细胞分裂中期作用的研究

本文通过一系列实验,确定了昆明小鼠再生肝的细胞分裂高峰在肝大部切除后48及72小时,并以此为依据,在细胞分裂高峰期(48小时),观察了本室提取的兔肝抑素对细胞分裂期的影响,结果发现分裂中期的细胞受到了抑制,表现为中期分裂相的累积和后期分裂相的减少。     

肝抑素研究Ⅲ——兔肝抑素对再生肝细胞糖元变化的研究

本实验用昆明小鼠,对肝脏进行大部切除后,除部分进行对照外,实验组分别在手术后24、30、36、42小时处死鼠。处死前由腹腔注射本室提取的具一定纯度的肝抑素,用PAS技术示多糖,观察肝细胞中糖元变化,发现手术后下降的糖元比未经肝抑素处理的肝细胞糖元恢复较晚,说明肝抑素对再生肝细胞糖元有抑制、延缓作用。     

大鼠肝再生中肝细胞基因表达与DNA裸露的相关性研究

为了解大鼠肝再生中肝细胞的基因表达与DNA裸露的相关性,分离大鼠肝细胞,提取裸露DNA,用SOLEXA方法对DNA测序,用BWA软件拼装测序片段,用IPA软件分析拼装的基因种类和作用,用Rat Genome230 2.0芯片检测基因的转录情况.研究表明,大鼠肝再生的12h(PH后12h),肝细胞的裸露DNA涉及16 912个基因,1 701个基因发生了有意义裸露量变化.其中,25个基因的裸露量上调,1 676个基因的裸露量下调.与Rat Genome 230 2.0芯片的检测的基因转录比对表明,肝细胞的AKR7A3,BMYC,CDC25B等26个基因的裸露量和表达量均下调,表明大鼠肝再生12h时,这些基因的表达可能受染色体结构调控.     

肝细胞生长因子（HGF）对肝再生的影响

肝细胞在正常情况下很少分裂，但在肝损伤后会表现出强大的再生能力。肝细胞生长因子（Hepatocyte Growth Factor，HGF）是一个多效应生长因子，参与机体多种器官组织细胞的生长、再生和重塑等过程。但是它在肝再生中所起的作用尤为突出，现就其做一综述。     

5-羟色胺对大鼠肝细胞DNA合成增强作用的研究

目的：调查诱导或增强肝细胞ＤＮＡ合成因素。方法：；从成年大鼠肝脏分离肝细胞，在含＾３Ｈ－胸苷的培养液中培养，向含或不含表皮生长因子（ＥＧＦ）和胰岛素的肝细胞培养加入不同浓度的５－羟色胺（５－ＨＴ）以观察对ＤＮＡ合成的影响。在部分含５－ＨＴ的培养中加入５－ＨＴＨ２受体拮抗物酮舍林以检查Ｈ２受体的参与。ＤＮＡ合成以＾３Ｈ－胸苷掺入肝细胞ＤＮＡ的量用液体闪烁计数法测量。结果５－ＨＴ单独不能刺激ＤＮＡ合成     

平阳霉素抑制艾氏腹水瘤细胞DNA合成的研究

利用液体闪烁技术测定了平阳霉素对ＤＮＡ合成的特异性前体３Ｈ－ＴｄＲ的掺入，表明平阳霉素抑制艾氏腹水瘤（ＥＣＡ）细胞ＤＮＡ的合成，并且这种抑制作用随药物浓度的增加和反应时间的延长而加强。ＩＣ５０约为２５６μｇ／ｍｌ。     

糖尿病肾病大鼠肝DNA甲基化酶活性及基因组DNA对DNaseⅠ敏感性的分析

用3H标记的S-腺苷酰-L-甲硫氨酸(3H-SAM)作为甲基供体,以同位素掺入法测定了正常大鼠、糖尿病肾病大鼠、中药"糖微康"治疗的糖尿病肾病大鼠、西药"开博通"治疗的糖尿病肾病大鼠的肝细胞的DNA甲基化酶活性,并对从以上各组动物肝组织中提取的基因组DNA分别进行DNaseⅠ敏感性分析.结果显示:糖尿病肾病大鼠肝DNA甲基化酶活性明显低于正常鼠肝,其基因组DNA对DNaseⅠ敏感性比正常大鼠肝增强;中药"糖微康"治疗及西药"开博通"治疗的大鼠的肝DNA甲基化酶活性均有所回升,且中药组更接近正常大鼠对DNaseⅠ的敏感性.     

糖尿病肾病大鼠肝DNA甲基化酶活性及基因组DNA对DNaseⅠ敏感性的分析

用3H标记的S-腺苷酰-L-甲硫氨酸(3H-SAM)作为甲基供体,以同位素掺入法测定了正常大鼠、糖尿病肾病大鼠、中药"糖微康"治疗的糖尿病肾病大鼠、西药"开博通"治疗的糖尿病肾病大鼠的肝细胞的DNA甲基化酶活性,并对从以上各组动物肝组织中提取的基因组DNA分别进行DNaseⅠ敏感性分析.结果显示:糖尿病肾病大鼠肝DNA甲基化酶活性明显低于正常鼠肝,其基因组DNA对DNaseⅠ敏感性比正常大鼠肝增强;中药"糖微康"治疗及西药"开博通"治疗的大鼠的肝DNA甲基化酶活性均有所回升,且中药组更接近正常大鼠对DNaseⅠ的敏感性.     

芳醛电合成的研究—Ⅰ对甲苯甲醛电合成方法的改进

确定了用Ｐｂ（＋）－Ｐｂ（－）电极对使Ｍｎ（Ⅱ）电氧化成Ｍｎ（Ⅲ）的优选条件，并测定了在四丁基溴化铵催化下选用Ｍｎ（Ⅲ）氧化对二甲苯制对甲苯甲醛反应的动力学参数。     

抗郑氏植物蛋白兔血清抑制小鼠体内肿瘤生长的初步研究

郑氏植物蛋白系从某种低等植物提取的一种糖蛋白。已有的实验结果提示郑氏植物蛋白具有肿瘤抗原活性。笔者对抗郑氏植物蛋白兔血清小鼠体内抗肿瘤作用进行了实验 ,结果表明 ,注射抗郑氏植物蛋白兔血清的试验组小鼠的实体瘤均重分别仅为生理盐水和正常兔血清两个对照组小鼠瘤块的 5 3.1%和 5 6 .5 % ,该抗血清对小鼠体内Sp2 / 0实体瘤的生长具有明显的抑制作用。提示郑氏植物蛋白及其抗血清对肿瘤疫苗研制以及应用于肿瘤诊治方面均具有较大的潜在价值     

外源性DNA对小鼠自身DNA的保护作用

采用骨髓有核细胞微核率测定法，检测小鼠服用鲤鱼精巢ＤＮＡ后，６０Ｃｏ－γ射线对小鼠骨髓细胞染色体损伤的严重程度，结果表明，小鼠每天每千克体质量灌胃鲤鱼精巢ＤＮＡ１００ｍｇ，连续１５ｄ，可使总剂量６Ｇｙ的６０Ｃｏ－γ射线致小鼠骨髓有核细胞微核发生率减少４７．２％（Ｐ＜０．００１）；采用全血ＵＤＳ测定法，检测小鼠血细胞ＤＮＡ受紫外线损伤后的修复速度，结果表明，小鼠每天每千克体质量灌胃鲤鱼精巢ＤＮＡ３０ｍｇ，连续３个月，其全血ＵＤＳ增加４０．０２％（Ｐ＜０．００１）．     

小鼠脾细胞DNA合成实验技术及其影响因素的研究

本文以测定氚化胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR)掺入新鲜制备的离体的小鼠脾有核细胞DNA的方法,来判断细胞DNA合成能力,并对影响脾细胞DNA合成的某些基本因素的作用进行了研究。研究表明,2毫升pH7.4的Eagle培养液中含4×10(?)个脾有核细胞时,加入1.2微居里~8H-TdR(比活度为5居里/毫摩尔),持续作用4小时,可获最佳实验结果。植物血凝素(PHA)和小牛血清在此实验中可以不用。     

分子印章法DNA芯片的合成(Ⅰ)

用Micron XYZScope考察了用不同方法处理的玻璃片对膜厚为0.6～1.0mm,阵点高度为15?μm的聚二甲基硅氧烷(PDMS)印章的粘附固定情况以及对印章收缩的影响.经硅烷化的玻璃片与PDMS印章结合牢固,虽然印章表面阵点的面积收缩为0.286%,但由于分子间的强相互作用力以及分子之间的铆合作用,使其印章的线收缩为0.0403%.这一结论保证了寡核苷酸合成过程中一套印章在合成载片位点上的多次准确定位以及印章多次压印偶联反应不发生错位,亦即为分子印章法DNA芯片的正确合成提供了依据.     

血清浓度对SMMC—7721细胞DNA合成的影响

以人肝癌ＳＭＭＣ－７７２１细胞为材料研究了不同血清浓度对ＤＮＡ合成和细胞生长状态的影响，结果表明几乎在所有处理中短时无血清培养都能刺激ＳＭＭＣ－７７２１细胞的ＤＮＡ合成，且＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入量与培养液中ＦＣＳ浓度成明显负相关，＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入量比值最高可达３９．３２倍．１８ｈ内，随培养时间的增加无血清培养对细胞ＤＮＡ合成的刺激作用逐渐下降，＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入量比值从３９．３２倍下降为３．５３倍，     

大鼠正常肝和再生肝的肝细胞分离、鉴定及纯度、活性分析

按Higgins等方法制作大鼠2/3肝切除(parital hepatectomy,PH)模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60%Percoll密度梯度离心分离肝细胞,用免疫组织化学方法定性、定位再生肝(regenerating liver,RL)、分散的肝脏细胞及分离的肝细胞中白蛋白(albumin,ALB)和葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6-phosphatase,G-6-P),用蛋白免疫印迹方法定量肝细胞的ALB和G-6-P,用RT-PCR定量肝细胞的ALB和G-6-P mRNA.初步证实纯化的细胞中,ALB和G-6-P阳性细胞占96%以上;PH后各时间点纯化的肝细胞的ALB和G-6-P mRNA量稳定,相应的蛋白量亦稳定.表明改进后的分离肝细胞方法具有收率高、纯度高、活性好等特点.     

吖啶橙—细胞DNA荧光抑制法初步筛选抗癌药物的研究

以二倍体鼠肝细胞为标准细胞用荧光探针吖橙示踪药物／细胞ＤＮＡ的作用而提出了一种用Ｈａｄａｍａｒｄ变换显微荧光图象分析法初步筛选抗癌药物的新方法。对Ｄ－氨基葡萄糖的３ｄ过渡金属的配合物，Ｄ－氨基葡萄糖与β－萘酚醛有Ｓｃｈｉｆｆ碱及其与３ｄ过渡金属的配合物和它们分别与甘氨酸形成的混配物共四个系列２２种化合物与细胞ＤＮＡ的作用进行了研究，结果表明：Ｃｏ，ＮＧ，Ｃｏ，ＮＧ，ＣｕＧｌｕ，ＮｉＮＧＣｕＧｌＧ，     

阿尔泰藜芦生物碱Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ对癌细胞DNA合成的影响

用体外细胞培养~3H—TbR 参入法,培育12、24、36和48h,阿尔泰黎芦(Veratrum lodelianum Bernh)碱Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ能抑制小鼠 S180和腹水型肝癌细胞 DNA 的合成.三种生物碱对腹水型肝癌细胞DNA 合成的抑制均比 S180的高.对腹水型肝癌细胞 DNA 合成 ID50依次为66μg/ml,66μg/ml 和56μg/ml.它们对癌细胞 DNA 合成的抑制机理,似均为 DNA 模板损伤型.     

睾酮对大鼠再生肝细胞转录活性的影响

以血清睾酮(testosterone,T)和核仁组织区相关嗜银蛋白(argyrophil nucleolar organiting regions,AgNORs)为指标,探讨去睾丸大鼠部分肝切除(partial hepatectomy,PH)后,外源注射睾酮对其血清睾酮水平及再生肝细胞DNA转录活性的影响.结果显示:外源睾酮可使大鼠血清睾酮水平显著升高,呈明显剂量-时间效应.除低剂量睾酮(0.5mg/kg体重)处理外,其它各组再生肝细胞AgNORs颗粒数在PH后24h均明显下降,PH后24～72h又持续升高.PH后各时期,低剂量睾酮使AgNORs数目显著高于芝麻油组;而中、高剂量睾酮(2.5mg/kg和5mg/kg体重)使AgNORs数目减少,并呈现明显剂量-效应关系.结果表明:低剂量睾酮对肝细胞的转录活性起促进作用;中、高剂量则起抑制作用,且随着睾酮浓度升高,抑制作用增强.     

枸杞对大鼠肝再生的影响

以肝/体重比和核仁组成区相关嗜银蛋白(AgNORs)颗粒数为指标,研究了枸杞水煎剂对大鼠2/3肝切除后肝再生的影响.结果表明:肝切除后第3 d实验组大鼠的肝/体重比大于对照组,但无显著性差异,第4 d实验组大鼠的肝/体重比显著大于对照组(P<0.05);第3 d和第4 d实验组大鼠的肝细胞AgNORs颗粒数显著大于对照组(P<0.05).初步证实枸杞水煎剂对肝切除后的大鼠肝细胞分裂增殖有促进作用.