松科植物木质素合成相关基因研究进展

植物木质素是影响纸浆材品质的关键因素,而松科植物作为重要的纸浆材,对其木质素合成相关调控基因进行系统了解,可为完善木质素生物合成模型提供一定的理论依据。笔者通过对国内外已有研究进行分析,总结植物木质素结构、木质素合成途径、木质素合成相关酶基因及松科植物木质素合成基因的研究进展。归纳出松科植物火炬松(Pinus taeda)、马尾松(P. massoniana)、辐射松(P. radiata)、挪威云杉(Picea abie)等木质素合成酶基因研究主要集中在苯丙氨酸解氨酶(phenylalanineammonialyase,PAL)、4-香豆酸辅酶A连接酶(4-coumarate CoA ligase, 4CL)、肉桂酸4-羟化酶(cinnamic 4-hydroxygenase, C₄H)、香豆酸3-羟化酶(Coumarate 3-hydroxylase, C3H)、咖啡酰辅酶A-O-甲基转移酶(caffeoyl coenzyme A-O-methyltransferase, CCoAOMT)、肉桂酰基辅酶A还原酶(Cinnamoyl CoA reductase, CCR)和肉桂醇脱氢酶(Cinnamyl alcohol dehydrogenase, CAD)等一些常见基因上,其他莽草酸羟基肉桂酰转移酶(shikimate hydroxycinnamoyl transferase, HCT)、阿魏酸5-羟化酶(ferulo 5-hydroxylase, F5H)、O-甲基转移酶(O-methyltransferase, OMT)及咖啡酸-O-甲基转移酶(caffeic acid O-methyltransferase, COMT)等基因研究较欠缺,此外,还有部分基因未涉及。木质素合成是研究松科植物纸浆材的重要切入点,对现有松科植物木质素合成过程中存在问题进行精确的估计,对进一步深入研究松科植物木质素合成机制和优质纸浆材选育具有重要意义。     

GRP1.8融合4CL1基因调控杨树木质素生物合成

将形成层定位启动子GRP1.8与毛白杨的4-香豆酸:辅酶A连接酶基因融合,叶盘法转化毛白杨741,southern杂交检测表明融合基因已经整合到转基因杨树的基因组中.通过实时定量PCR技术测定mRNA的表达量,GC-MS分析4CL底物香豆酸的含量和定量硫酸木质素含量,分析了4CL基因的过量表达对转基因杨树生理生长的影响.实验结果表明,整合了正义4CL1的转基因植株在茎中的酶活性比野生植株增加了30%,木质素含量增加了40%.     

丝瓜果实发育过程中4—CL连接酶的特性研究

以丝瓜果实为材料，分析了４－香豆酸辅酶Ａ连接酶（４－ＣＬ）的理化性质及其在木质素合成和导管分子（ＴＥ）分化中作用。发现４－ＣＬ存在两种同工酶，经柱层析后，酶Ｉ纯化１５．６８倍，含量为２２．６３％；酶Ⅱ纯化４４．２３倍，含量为３．９１％。酶Ｉ对得豆酸和咖啡酸有较大亲和性，对阿魏酸较小；而酶Ⅱ对香豆酸和咖啡酸有一定亲和性，对阿魏酸亲和性极小。酶Ｉ有较好的热稳定性，最适温度为４０℃，最适ｐＨ８．０。发现     

毛白杨4CL基因启动子的克隆及初步功能分析

4CL(4-coumarate:CoA ligase,4-香豆酸:辅酶A连接酶)在植物木质素合成途径中催化羟基香豆酸生成羟基肉桂酰CoA,主要在木质部中表达,对植物木质素生物合成具重要调控作用.为研究4CL基因启动子在转基因植物中的表达特性,探索其在植物基因工程研究中的潜在应用价值,利用PCR方法从毛白杨基因组DNA中扩增得到了4CL启动子片段.序列分析表明与美洲山杨(P.tremuloids)的4CL启动子同源性为95%.采用生物信息学方法对该序列进行分析.与GUS基因融合构建双元表达载体,转化烟草的瞬时表达检测可见明显GUS活性.     

植物4CL基因家族结构功能与表达特性研究进展

4-香豆酸：辅酶A连接酶（4CL）是植物苯丙烷衍生物,如类黄酮和木质素等,生物合成途径的一种关键酶,在大多数维管植物中4CL基因以基因家族的形式出现.4CL基因家族成员在植物组织中存在差异表达,并参与不同的苯丙烷类衍生物的生物合成.从4CL酶的基因结构、基因家族组成与表达特性等方面详细论述了当前最新研究进展,这将有助于更好地理解植物4CL基因参与苯丙烷类衍生物途径的合成与代谢机制.     

小麦根尖细胞分化过程中木质素合成及其相关酶的活性变化

小麦（Triticumaestivum）根尖细胞分化过程中，苯丙氨酸解氨酶[PAL．EC4．3．1．5]和对香豆酸辅酶A联结酶[4CL，EC6．2．1．12]的活性从分生区至成熟区逐渐增加．PAL活性在分生区细胞中为0.4CL活性近似为0．在成熟区细胞中PAL和4CL活性均增加到最大．木质素的含量变化与PAL和4CL活性存在着平行性，同样在分生区细胞中木质素含量很低，到伸长区稍许增加，至成熟区增加最多．PAL和4CL是木质素合成的开始步骤和关键酶．木质素主要在管状分子和细胞壁次生加厚时沉积，是细胞分化的重要标志之一．     

大鼠灌胃中国蜂胶醇提物后血浆中5种酚酸类成分的HPLC测定及其药代动力学

对大鼠灌胃蜂胶乙醇提取物(EEP)后,血浆中5种酚酸类成分的药代动力学特性进行研究.用HPLC-UV法测定血浆中咖啡酸、香豆酸、阿魏酸、异阿魏酸和3,4-二甲氧基肉桂酸的浓度.应用WinNonlin非典型房室模型计算软件计算相应的药代动力学参数.血浆中内源性物质和内标对酚酸类成分测定无干扰,回收率、准确度及日内、日间精密度均符合生物样品测定要求.结果表明,该方法简便、快速、重复性好,适用于咖啡酸等5种蜂胶中酚酸类成分的大鼠血药质量浓度测定及体内药动学研究.     

双氯醇胺对大鼠肝脏氮和葡萄糖代谢及相关酶活性的影响

利用离体肝脏灌流技术测定了 CL(二个实验组 ,CL给药量分别为 1× 1 0 - 8mol和 1× 1 0 - 6mol)对大鼠肝脏物质代谢及相关酶活性的影响 .结果表明 CL可使大鼠离体肝脏灌流液中尿素氮浓度下降 ,并有一定的剂量效应和时间效应 .在给药后灌流的 1、2、3、4 h内 ,与对照组相比 ,1× 1 0 - 6mol的 CL使大鼠离体灌流的肝脏产生的尿素氮分别下降了1 4 .79% ( P>0 .0 5 ) ,1 7.88 ( P>0 .0 5 ) ,2 6 .79 ( P<0 .0 5 )和 2 9.95 ( P<0 .0 1 ) . 1× 1 0 - 8mol的 CL具有类似的效应 .而 CL对大鼠离体肝脏灌流液中葡萄糖的水平影响不大 .CL可抑制大鼠肝组织中 GPT的活性 ,灌流 4 h后 1× 1 0 - 6mol的 CL使得肝组织中 GPT活性下降了 2 4 .6 5 % ( P<0 .0 5 ) ,但 1× 1 0 - 8mol的 CL仅使 GPT活性下降 7.5 0 % ( P>0 .0 5 ) .CL 还抑制大鼠肝组织中 G6 PDH的活性 ,1× 1 0 - 6mol的 CL可使肝脏中 G6 PDH活性下降 36 .0 4 % ( P<0 .0 5 ) ,同样1× 1 0 - 8mol的 CL对 G6 PDH活性影响不显著 .提示 CL可直接通过影响肝脏的氮代谢及相关酶的活性继而影响机体的物质代谢 .     

双氯醇胺对大鼠肝脏氮和葡萄糖代谢

利用离体肝脏灌流技术测定了CL(二个实验组,CL给药量分别为1×10-8 mol和1×10-6 mol)对大鼠肝脏物质代谢及相关酶活性的影响.结果表明CL可使大鼠离体肝脏灌流液中尿素氮浓度下降,并有一定的剂量效应和时间效应.在给药后灌流的1、2、3、4 h内,与对照组相比,1×10-6 mol的CL使大鼠离体灌流的肝脏产生的尿素氮分别下降了14.79%(P>0.05),17.88%(P>0.05),26.79%(P<0.05)和29.95%(P<0.01). 1×10-8 mol的CL具有类似的效应.而CL对大鼠离体肝脏灌流液中葡萄糖的水平影响不大.CL可抑制大鼠肝组织中GPT的活性,灌流4 h后1×10-6 mol的CL使得肝组织中GPT活性下降了24.65%(P<0.05),但1×10-8 mol的CL仅使GPT活性下降7.50%(P>0.05).CL还抑制大鼠肝组织中G6PDH的活性,1×10-6 mol的CL可使肝脏中G6PDH活性下降36.04%(P<0.05),同样1×10-8 mol的CL对G6PDH活性影响不显著.提示CL可直接通过影响肝脏的氮代谢及相关酶的活性继而影响机体的物质代谢.     

毛细管电泳法检测紫甘蓝色素酰基化基团的成分

采用毛细管电泳电化学检测法测定了紫甘蓝色素酰基化基团的组分,即分别为芥子酸、阿魏酸、P-香豆酸和咖啡酸。实验优化了4种酸的电泳条件:以直径300μm的碳圆盘电极作为工作电极,检测电位为0.9 V(vs.SCE),分离电压14 kV,进样6 s,在浓度为60 mmol/L硼砂(pH8.7)运行缓冲液中,上述4种组分能够在10 min内完全分离。4种酸的混合标准溶液7次连续平行进样,重现性良好,峰高的相对标准偏差(RSD)分别为:2.7%,2.4%,1.6%和4.1%。4种酸的峰高与浓度在2~3个数量级范围内线性关系良好,检出限质量浓度分别为:2.5×10-7,3.0×10-7,3.2×10-8和1.0×10-7g/mL。该方法简单易行,快速灵敏可靠。     

瑞氏木霉β-内切葡聚糖酶的纯化及其部分酶学性质研究

 利用盐析、SephadexG-75和DEAE-SephadexA50层析,从瑞氏木霉TrichodermareeseiQM9414发酵液中纯化了2个具有β-内切葡聚糖酶活性的组分Eg1和Eg2,分子质量分别为65.47ku和57.04ku.其最适温度分别为50℃和55℃,最适pH分别为4.8和5.0,米氏常数Km分别为3.76×10^-2g/L和4.20×10^-2g/L.根据其酶学性质,这是一类不同于已有的β-内切葡聚糖酶,为瑞氏木霉T.reeseiQM9414所产β-内切葡聚糖酶的进一步研究奠定了基础.     

流动注射化学发光测定洗衣粉中的磷含量

在碱性介质中,Cu2+对鲁米诺-盐酸羟胺的化学发光有明显的增敏作用,而PO3-4能与Cu2+反应生成Cu3(PO4)2沉淀,对Cu2+增敏的鲁米诺-盐酸羟胺的化学发光有抑制作用,据此建立测定洗衣粉中PO3-4的流动注射化学发光分析方法.在1.0×10-10～1.0×10-7 mol·L-1范围内,洗衣粉中PO3-4的浓度与相对发光强度有良好的线性关系,线性方程为△I=214.6 +214.6c,线性相关系数为0.999 3,检出限为1.0×10-12mol·L-1.对1.0×10-7mol·L-1的PO3-4进行11次平行测定,其相对标准偏差为1.3;.此方法用于测定洗衣粉中磷的含量,结果令人满意.     

光对黄化玉米叶片PEP羧化酶活性和特性的调节

以玉米为材料，研究了光对其ＰＥＰ羧化酶活性和特定的调节．发现绿苗远比黄化苗中ＰＥＰ羧化酶活性高，光处理后黄化苗中ＰＥＰ羧化酶活性明显增高，这种增高能被环已酰亚胺所抑制，表明是酶蛋白合成致使酶活性增高的过程。绿苗和黄化苗ＰＥＰ羧化酶在Ｋｍ（ＰＥＰ）、Ｋｍ（Ｇ－６－Ｐ）、Ｖｍａｘ和Ｈｉｌｌ系数等动力学常数上存在差异；前者Ｋｍ（ＰＥＰ）、Ｋｍ（Ｇ－６－Ｐ）和Ｖｍａｘ比后者对应的三个动力学常数大，但Ｈｉｌｌ系数比后者小，说明绿苗和黄化营中的ＰＥＰ羧化酶不完全为同一种酶，而是互为同工酶．黄化苗经照光处理后，其ＰＥＰ羧化酶的动力学常数与绿苗．ＰＥＰ羧化酶的动力学常数趋于相同．这进一步证实光诱导黄化苗中合成了ＰＥＰ羧化酶。     

用铁砂代替Fe_2O_3制备M_x—2000软磁铁氧体

用铁砂代替Fe_2O_3,制备性能优良的软磁MnZn铁氧体,其性能如下:μ_1:2000±20％; B(H=800A/m):360-390mT;H_c:12.8-14.8A/m:T_c:160-180℃tgδ/μ(f=100KC,H=0.4A/米):21.0-27.0×10~(-6);Tkμ/μ(20-60℃):1.3-1.8×10~(-6).针对铁砂的特点,本文对用铁砂制备软磁MnZn铁氧体的工艺进行研究,得出一些规律和特点。     

示波极谱溶出法直接测定镍中痕量镉和铊

<正> 痕量镉或铊的极谱测定方法很多,但对于镍中ppb级的镉,二次导数法和催化法灵敏度不够,阳极溶出法需除去基本元素镍。等不经分离直接测定镍中铊,我们的实验证明,镍量不能高于0.03M(约1.7mg/ml),且在酸性条件下易受到镉波干扰。如果用表面活性剂抑制镉波测定铊,铊波在-0.45伏左右(静汞滴电极上),易受铅波干扰。用EDTA掩蔽镉、铅、镍,因其溶解度限制,允许镍浓度不可能太大,且又     

脂蛋白酯酶的分离纯化及其部分性质研究

将Candida rugosa用橄榄油诱导培养,所得上清液依次经过截留分子量10 000中空纤维柱浓缩,85%硫酸铵沉淀,然后经过DEAE-Sepharose F.F.离子柱和Phenyl Sepharose CL-4B柱进行交换层析和疏水层析,得到了活力达6.04 U/mg的脂蛋白酯酶,纯化倍数和回收率分别为13.8倍6.6%。所得纯化酶经还原和非还原SDS-PAGE分析为单一蛋白染色带,HPLC显示纯度为95%以上。该酶的最适温度为40℃～50℃之间,最适pH为7.5,具有较强的热稳定性和酸碱稳定性,在最适温度和pH条件下该酶Km值为3.4×10-4mol/L。     

钩藤提取物与阿片受体结合特点分析

用放射配体结合实验方法确定钩藤提取物是否能与阿片受体发生相互作用,具体以3H-diprenorphine为标记配体,反应体系及反应条件同饱和结合实验,选用不同浓度的吗啡(10-10~10-5nmol/L)或钩藤提取物(0.125~4mg/mL)为竞争药物,考察钩藤提取物与转染阿片受体的结合水平.结果表明,钩藤提取物(0.125~4 mg/mL)浓度依赖地竞争3H-diprenorphine(1nmol/L)与μ、δ、κ3种阿片受体的结合,其IC50值分别为(1.27±0.86)mg/mL(n=3)(、0.59±0.21)mg/mL(n=4)和(1.20±0.24)mg/mL(n=3),其Ki值分别为(0.41±0.27)mg/mL(n=3)、(0.26±0.09)mg/mL(n=4)和(0.38±0.08)mg/mL(n=3),说明钩藤提取物非选择性地与μ、δ、κ三种阿片受体结合.     

Influence of site-directed mutation of cytochrome b5 Phe35 on the protein’s structure and properties

Kinetic studies of the heme dissociation from the wild type and Phe35Tyr, Phe35Leu mutants of bovine liver microsomal ferricytochrome b 5 indicate that the oxidized Phe35Tyr mutant is more stable towards denaturant than wild type but Phe35Leu mutant proceeded with a different mechanism compared with wild type cytochrome b 5 and Phe35Tyr mutant protein. Because of the decrease of side chain volume in Phe35Leu mutant, a cavity produced in the interior of the protein may offer a channel for urea molecule to enter the hydrophobic pocket. When urea concentration is larger than 5 mol/L, the urea molecule may compete to coordinate the iron of heme with His39, that results in sharp increase of the rate of heme dissociation. The interaction between cytochrome b 5 and cytochrom c demonstrated that a 1:1 protein complex was formed between the two proteins. The binding constants of cytochrome b 5 with cytochrome c are: wild type K A=4.2(±0.01)×10 6(mol/L) -1 , Phe35Tyr K A=3.7(±0.01)×10 6(mol/L) -1 and Phe35Leu K A=4.7(±0.01)×10 6(mol/L) -1 respectively ( I =1 m mol/L, pH 7.0 soldium phosphate buffer, 25℃). These results clearly show that the mutation at Phe35 has no influence on the binding of cytochrome b 5 with cytochrome c and that the hydrophilic patch residues are not involved in the binding of cytochrome b 5 and cytochrome c.     

过氧化草酸酯化学发光检测DNA荧光探针

根据过氧化草酸酯与双氧水作用产生的高能中间体激发荧光物质发光的原理,研究了利用过氧化草酸酯TCPO-H2O2化学发光体系测定Cy5标记的DNA探针的新方法,探讨了溶剂、酸度、催化剂及发光溶液浓度对化学发光信号的影响,确立了最佳分析条件.其线性范围为8.4×10-9~2.8×10-6mol/L,检出限(3σ)为2.8×10-9mol/L.据此建立了操作简便、灵敏度高的测定Cy5标记的DNA探针的新方法.     

温和气单胞菌单克隆抗体的制备及特性分析

利用细胞融合技术建立了5株分泌抗温和气单胞菌CR79-1-1株单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞系,通过特异性鉴定获得两株与参考菌株中的温和气单胞菌发生反应,但与嗜水气单胞菌以及鳗弧菌、爱德华氏菌、克鲁氏耶尔森菌、大肠杆菌、荧光假单胞菌均不反应的杂交瘤细胞系,分别命名为2G3和1A4.快速酶联免疫分析法(ELISA)测得2G3和1A4的亲和常数分别为1.72×108和5×108M-1;应用方阵配对实验证实,2株单抗针对特异性抗原上不同表位.