siRNA靶向沉默TAK1基因对前列腺癌细胞DU145耐药性和增殖能力的影响

目的研究siRNA沉默转化生长因子β激活激酶(TAK1)基因对前列腺癌细胞DU145增殖及药物敏感性的影响,对其相关作用机制进行初步初探。方法用Lipofectamine 2000将TAK1 siRNA及阴性对照siRNA序列转入细胞DU145中,用MTT法检测两组细胞增殖能力的变化,同时检测其对多西紫杉醇(艾素)、奥沙利铂(L-OHP)、5-氟尿嘧啶(5-FU)的敏感性的变化,应用western blot检测细胞TAK1、COX-2、bcl-2及JNK的表达。结果 siRNA-TAK1组细胞增殖能力显著低于siRNA-control组(P0.05)。siRNA-TAK1组,艾素、L-OHP和5-FU的24 h、48、72H IC50分别为(mg·L~(-1)):0.52±0.02、0.35±0.03、0.17±0.01;1.79±0.10、0.99±0.05、0.57±0.04和53.41±2.15、25.91±1.55、10.89±0.81;siRNA-control组分别为(mg·L~(-1)):0.62±0.04、0.32±0.02;2.10±0.05、0.63±0.04和28.31 4-1.14、13.73±0.82、5.77±0.43。siRNA-TAK1组的IC50均明显低于siRNA-control组(P0.05),转染48 h后siRNA-TAK1组TAK1、COX-2、bcl-2蛋白的表达显著低于siRNA-control组(P0.05)。结论干扰TAK1蛋白表达抑制TGF-β和COX-2信号通路可能是降低细胞增殖能力和增强细胞DU145药物敏感性的一个机制。     

氧化苦参碱对人宫颈癌SiHa细胞株增殖及凋亡的影响

目的研究氧化苦参碱对体外人宫颈癌SiHa细胞株增殖活性及凋亡的影响。方法对人宫颈癌SiHa细胞株进行体外培养,经氧化苦参碱处理的细胞组为实验组,未经处理组为对照组。采用MTT细胞存活实验检测氧化苦参碱对入宫颈鳞癌SiHa细胞的增殖影响,并计算IC50;倒置相差显微镜下观察不同浓度的氧化苦参碱作用48h后SiHa细胞的形态改变;Hoechst33258染色法和Western blot法检测氧化苦参碱对SiHa细胞核及凋亡相关蛋白(P53、Bax及Bcl-2)表达水平的影响。结果 MTT结果显示氧化苦参碱剂量-时间依耐性抑制人宫颈癌SiHa细胞的体外增殖(P0.05),计算24 h、48 h和72 h的IC50分别为(1 028.41±3.57)μg/ml、(701.72±6.01)μg/ml和(406.88±2.15)μg/ml;氧化苦参碱处理48 h后,SiHa细胞的形态特征及数目发生显著变化,且随氧化苦参碱浓度的增加而愈加明显;Hoechst33258染色证实氧化苦参碱处理后SiHa细胞发生凋亡,可见典型的凋亡特征;Western blot结果证实氧化苦参碱(700μg/ml、1 600μg/ml)处理48 h后,和对照组比较,药物处理组细胞凋亡周期蛋白P53、Bax表达上调(P0.05),而Bcl-2表达下调(P0.05),Bax/Bcl-2的比率明显增加(P0.05)。结论氧化苦参碱可抑制体外人宫颈癌SiHa细胞的体外增殖活性发挥其抗肿瘤作用,其作用机制可能诱导SiHa细胞的凋亡有关。     

P16及COX-2蛋白在宫颈癌中表达及意义

目的 探讨P16及COX-2蛋白在宫颈癌中表达及意义.方法 收集宫颈活检或手术标本138例,采用免疫组织化学方法分别检测P16及COX-2蛋白的表达,并分析结果.结果 正常宫颈组织、宫颈低级别上皮内瘤变(LSIL)、宫颈高级别上皮内瘤变(HSIL)、宫颈癌中P16蛋白阳性表达分别为0％(0/30)、42.3％ (11/26)、71.9％(23/32)、92％(46/50).COX-2蛋白阳性表达分别为3.3％(1/30)、50％(13/26)、75％(24/32)、88％ (44/50).随着宫颈病变分级升高,P16及COX-2蛋白阳性率逐渐上升,统计学差异有显著性(p＜0.05);结论 P16及COX-2的高表达在宫颈癌的发生、发展中均起作用.     

外源性细胞色素C对脓毒症小鼠心肌TGF-β1和Smad1/5/8影响的实验研究

目的 探讨外源性细胞色素c (Cytc)对脓毒症小鼠心肌TGF-β1和Smad1/5/8的作用及影响.方法 雄性昆明小鼠78只,随机分为假手术组( Sham)、脓毒症组(CLP)、细胞色素C处理组(T).CLP组和T组用盲肠结扎穿孔法造模,Sham组仅开腹翻动盲肠.24 h造模成功后,T组经尾静脉注射外源性Cyt c(20 mg/kg)、Sham组和CLP组分别经尾静脉注射150(1生理盐水.30 min后以0、6h、12 h点取材,每个时间点5只小鼠,测左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末期压(LVEDP)、左室内压力变化最大上升和下降速率(LV±dp/dt-max);取心肌组织分别做组织学检查、RT-PCR和Western-Blot检测TGF-β1和Smad1/5/8蛋白的表达;24h点留取电镜标本,余下的小鼠观察生存率.结果 与CLP组比较,T组一般情况好转,生存率提高,病理学改善;LVSP、LVEDP和LV±dp/dt-max提高(P＜0.05);各组TGF-β1和Smad1/5/8蛋白均有表达,CLP组表达明显增加,经外源性Cytc干预后蛋白表达减少,CLP组与其它组比较差别有统计学意义(P＜0.05).结论 外源性Cytc逆转脓毒症小鼠心肌线粒体功能抑制和心肌抑制,改善心功能.     

RNA干扰靶向沉默COX 2基因对MG 63骨肉瘤细胞生物学特性的研究

目的 通过构建小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)降低MG 63骨肉瘤细胞环氧合酶 2(COX 2)基因的表达,并进一步研究其对MG 63骨肉瘤细胞增值、侵袭、迁移能力的影响及分子机制。方法 设计靶向干扰COX 2基因的siRNA,通过脂质体转染MG 63骨肉瘤细胞,使其抑制MG 63骨肉瘤细胞COX 2基因的表达,后采用噻唑蓝(MTT)比色法、Transwell小室实验研究其对MG 63骨肉瘤细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响,采用RFQ PCR和Western blot分别从基因和蛋白的水平检测MG 63骨肉瘤细胞侵袭性相关因子基质金属酶(MMP 9)的表达及血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果 转染MG 63骨肉瘤细胞后,实验组与阴性对照组和空白对照组比较,通过RFQ PCR和Western blot检测COX 2基因表达降低约90%(P0.05),MTT检测MG 63骨肉瘤细胞增值能力明显受到抑制(P0.05),Transwell实验检测MG 63骨肉瘤细胞侵袭、迁移能力明显下降(P0.05),经RFQ PCR、Western blot检测侵袭性相关因子MMP 9和血管内皮生长因子VEGF的mRNA及蛋白表达降低(P0.05)。空白对照组和阴性对照组比较无明显变化,差异无统计学意义(P0.05)。结论 人MG 63骨肉瘤细胞COX 2基因被抑制后,MG 63骨肉瘤细胞增值、侵袭、迁移能力明显下降。     

刚地弓形虫培养上清抑制THP-1细胞增殖及诱导凋亡的研究

摘要：目的提取弓形虫体外细胞共培养上清,并研究上清对人急性单核细胞白血病细胞THP-1增殖及凋亡的影响。方法收集对数生长期的THP-1细胞以5X10^7／ml细胞浓度接种于不同培养瓶中,对照组加入含10％胎牛血清的RPMll640,实验组加入相同体积不同数量（2×10^7／ml、4X10^7／ml、8×10^7／m1）弓形虫速殖子培养上清,采用四甲基氮噻唑蓝（MTY）法检测吸光度（A490值）并计算THP-1细胞增殖抑制率;倒置显微镜下观察细胞形态变化;Annexin-V-FITC／PI染色细胞后上流式细胞仪检测各个时间点细胞凋亡率变化,以Western印迹方法分析凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达或活性。结果MTY法检测结果弓形虫培养上清呈时间剂量依赖性抑制THP-1细胞株增殖,倒置显微镜下观察处理组细胞有发泡现象和凋亡小体出现。流式细胞仪检测弓形虫感染后的THP-1细胞凋亡率较对照组有升高趋势（P〈0．05）,呈量效依赖性,Westernblot检测刚地弓形虫培养上清作用于THP-l细胞48h后实验组的Bax、Bcl-2蛋白表达较对照组的比值分别有明显的升高与降低（P〈0．05）。结论刚地弓形虫速殖子培养上清对体外培养THP-l细胞增殖有明显的抑制作用,并可诱导THP-1细胞凋亡。     

鸟苷酸交换因子DOCK1对心肌细胞存活的影响

目的 探讨鸟苷酸交换因子DOCK1对心肌细胞存活的影响.方法 用重组真核质粒pCXN2-Flag-hDOCK1(人DOCK1过表达质粒),pCXN2-Flag(空质粒)及空白试剂分别转染大鼠源H9C2心肌细胞,并给予缺氧/复氧(H/R)干预.将心肌细胞分为空白组,空质粒组,DOCK1过表达组,空白+-H/R组,空质粒+H/R组,DOCK1过表达+H/R组.用RT-PCR测定DOCK1mRNA水平.流式细胞术、MTT分别测定细胞的凋亡率和增殖率.结果 DOCK1过表达组(1.51 ±0.169)％,(2.49±0.442)％,(38.94±0.580)％,(P＜0.05)较空白组(-),(3.61±0.334)％,(20.64±0.720)％,(P＜0.05)和空质粒组(-),(3.66±0.373)％,(22.29±0.838)％,(P＜0.05),DOCK1过表达+H/R组1.03±0.171,(5.38±0.431)％,(17.33±0.343)％,(P＜0.05)较空白+H/R组[(-),(2.49±0.442)％,(7.95±0.322)％,(P＜0.05)和空质粒+H/R组(-),(10.32±0.388)％,(7.92±0.351％,(P＜0.05),人的DOCK1RNA分别显著增加、心肌细胞凋亡率分别显著降低及增殖率分别显著增加.较DOCK1过表达组.DOCK1过表达+H/R组人的DOCK1 mRNA显著降低.较空白组(0.64±0.145),(P＜0.05)、空质粒组(0.60±0.182),(P＜0.05)及DOCK1过表达组(0.60±0.182),(P＜0.05),空白+H/R组(0.30±0.115),(P＜0.05)、空质粒+H/R组(0.36±0.101),(P＜0.05)及DOCK1过表达+H/R组(1.03±0.171),(P＜0.05)大鼠的DOCK1 mRNA分别显著降低、心肌细胞凋亡率分别显著增加及增殖率分别显著降低.结论 DOCK1可抑制H9C2心肌细胞的凋亡,促进H9C2心肌细胞的增殖、存活；且DOCK1可抑制H/R诱导的H9C2心肌细胞凋亡增加及增殖、存活的降低.     

Mavacoxib体外对人骨肉瘤MG-63细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨一种长效环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,Cox-2)抑制剂Mavacoxib(Trocoxil~(TM))对体外培养的人骨肉瘤细胞MG-63增殖和凋亡的影响及可能的作用机制。方法用MTT法检测不同浓度Mavacoxib在各时间点对MG-63细胞的生长抑制率,并观察其有效的作用浓度及作用时间;FCM法、Real-time PCR法和Western blot法分别检测Mavacoxib 50μmol/L干预MG-63细胞48小时后的细胞凋亡率及Cox-2、Bcl-2、Survivin和Bax的表达;Western blot检测Mavacoxib干预MG-63细胞后p-P38和P38蛋白的表达。结果 Mavacoxib可抑制MG-63细胞的增值(P0.05);与空白对照组相比较,Mavacoxib干预组Bcl-2、Survivin下调,而Bax上调(P0.05)。Mavacoxib干预MG-63细胞可促使P38信号通路蛋白的活化(P0.05)。结论 Mavacoxib可通过抑制Cox-2、调节细胞凋亡因子及诱导P38通路的活化而抑制人骨肉瘤MG-63细胞。     

Lumican基因对人肺腺癌细胞株A549体外增殖和侵袭的影响

目的 观察基膜聚糖(Lumican)基因过度表达对人肺腺癌细胞株A549体外增殖和侵袭的影响.方法 以携带人Lumican基因的重组慢病毒感染A549细胞,用嘌呤霉素(puromycin)筛选法建立稳定细胞株.分别用Real-time PCR和Western blotting方法检测A549细胞组、空载体组及Lumican感染组目的基因mRNA和蛋白的表达.运用MTT法研究Lumican基因对A549细胞增殖的影响.运用Transwell法检测Lumican基因对A549细胞侵袭的影响.结果 ①各组Lumican mRNA表达差异显著(x2=21.60,P＜0.01),Lumican感染组明显高于其它两组(F=102.86,P＜0.000 1),Lumican感染组的蛋白表达水平高于其它两组.②Lumican感染组在不同时间(1、2、3、4、5 d)OD(吸光度)值与A549细胞组和空载体组差异不显著(P＞0.05).③各组穿膜细胞数差异显著(x2=23.49,P＜0.01),Lumican感染组明显高于其它两组(F=73.92,P＜0.001).结论 成功构建了Lumican高表达的人肺腺癌A549稳定细胞株,Lumican基因对人肺腺癌细胞的体外增殖能力无影响,但能增强人肺腺癌细胞的体外侵袭能力.     

枸杞多糖对人肺腺癌 A549细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨枸杞多糖(LBP)对体外培养的人肺腺癌细胞 A549的增殖抑制作用及其可能的作用机制.方法用不同浓度的LBP处理 A549细胞,MTT法检测24、48、72h时间点 LBP对 A549细胞的生长抑制率,实验设为对照组和实验组(1/2IC50作用48小时),MTT法绘制生长曲线、细胞计数计算倍增时间、流式细胞仪检测凋亡率及其细胞周期、RT PCR检测 SurvivinmRNA的变化、Westernblot检测 CyclinB1蛋白的变化,transwell体外侵袭实验观察药物对细胞体外侵袭的影响.结果 MTT显示不同浓度的LBP均能明显抑制 A549细胞的增殖且成剂量 效应关系,实验组细胞的倍增时间、凋亡率与对照组相比,均有统计学意义(P<0.05);LBP使细胞阻滞在 G2期,SurvivinmRNA表达和 CyclinB1蛋白的表达均降低,与对照组相比差异有显著性(P<0.05).结论 LBP可抑制 A549细胞的增殖,其机理可能与 LBP使 SurvivinmRNA表达下降引起细胞凋亡及 CyclinB1蛋白的表达降低造成细胞周期阻滞及抑制细胞的侵袭能力有关     

沉默Maspin基因对人乳腺癌细胞MCF-7侵袭迁移能力的影响

目的 探讨靶向沉默maspin基因对乳腺癌MCF-7细胞侵袭和迁移能力的影响.方法 构建针对maspin基因的具有荧光蛋白表达的shRNA真核表达载体,稳定转染入乳腺癌细胞MCF-7中.通过划痕实验和Transwell小室侵袭实验分别观察转染前后细胞迁移及侵袭能力的影响.分别用RT-PCR及Western Blot检测转染重组质粒前后细胞maspin mRNA和蛋白表达情况.结果 成功构建表达质粒pGenesil-HK、pGenesil-maspin-1和pGenesil-maspin-2,并成功稳定转染MCF-7细胞.与未转染组和pGenesil-HK组相比,转染pGenesil-maspin-1和pGenesil-maspin-2后的MCF-7细胞划痕伤口愈合速度加快(P＜0.05),细胞侵袭至小室下层的细胞数明显高于对照组(P＜0.05).RT-PCR及Western Blot结果表明转染pGenesil-maspin-1和pGenesil-maspin-2后的细胞maspin的mRNA和蛋白表达明显下降.结论 靶向maspin基因的RNA干扰能够下调maspin基因在乳腺癌MCF-7细胞中的表达,并能增强肿瘤细胞的侵袭和迁移能力.     

携SiRNA的聚乳酸羟基乙酸微球对Bel-7402/5-Fu细胞MDR1基因沉默作用的研究

目的 探讨携SiRNA的聚乳酸羟基乙酸(PLGA)微球通过沉默肝癌耐药细胞多药耐药基因(MDR1)基因,实现肝癌耐药的逆转.方法 合成针对MDR1的RNA干扰小片段(SiRNA),通过超声复乳法制备携药微球,转染肝癌耐药细胞Bel-7402/5 -Fu.运用Real-time PCR与Western blot方法,通过检测其mRNA及P糖蛋白表达水平,评价RNA干扰对MDR1表达的影响.MTT法检测RNA干扰逆转Bel-7402/5 Fu细胞对药性的效果,通过实验组细胞和对照组细胞之间的半数抑制剂量(IC50),计算RNA干扰组细胞的耐药逆转倍数.结果 在肝癌耐药细胞Bel-7402/5-Fu中,RNA干扰明显抑制了MDR1 mRNA和蛋白产物P糖蛋白的表达水平,且出现了P糖蛋白的持续低表达.MTT法显示,相同药物浓度下,实验组细胞生长明显受到抑制,表明其耐药性明显下降,其对药逆转倍数为11.56.结论 携SiRNA的PLGA微球能够有效减少肝癌耐药细胞Bel-7402/5-Fu的MDR1mRNA及P糖蛋白的表达水平,降低其耐药性.     

Roux-en-Y胃旁路术对2型糖尿病大鼠肾脏非对称性二甲基精氨酸代谢的影响

目的研究Roux-en-Y胃旁路术对2型糖尿病大鼠肾脏非对称性二甲基精氨酸(ADMA)代谢的影响。方法 40只SD大鼠,随机分为正常对照组(NC组,n=8)和糖尿病模型组(32只)。糖尿病模型组成模30只,随机分为糖尿病对照组(DC组,n=8)、糖尿病假手术组(DSO组,n=8)及糖尿病手术组(DO,n=14),DO组行胃旁路术,DSO组行胃窦十二指肠离断原位吻合。检测术前、术后1、2、4、8周血胰高血糖素样肽(GLP-1)水平,测定术前、术后8周空腹血糖(FBG),肾脏ADMA、血尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、一氧化氮(NO)水平,一氧化氮合酶(NOS)活性;检测蛋白质精氨酸甲基转移酶1(PRMT1)mRNA及二甲基精氨酸二甲胺水解酶1(DDAH1)mRNA,PRMT1蛋白表达水平,PAS染色观察肾脏组织学变化。结果随着手术时间延长,D0组GLP-1水平增加,其余各组无明显变化(P0.05),术后8周,DC和DSO组较DO组和NC组FBG、BUN、Cr、ADMA水平,PRMT1mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P0.05),NO、NOS、水平、DDAH1的mRNA表达明显降低(P0.05);PAS染色示DC组和DSO组肾小球基质沉积,阳性染色物增多,余无明显变化。结论 2型糖尿病肾脏组织中的ADMA升高;胃旁路术促进ADMA代谢,改善了肾功能。     

腹腔置管引流对重症急性胰腺炎大鼠肺损伤的作用及机制研究

目的探讨腹腔置管引流对重症急性胰腺炎大鼠肺损伤的作用及相关机制。方法 30只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组(仅行开腹手术)、SAP组(5%牛磺胆酸钠逆行胰胆管注射诱导SAP模型)、APD组(SAP模型基础上行APD干预),每组10只。3组大鼠分别于造模后24h取材,光镜观察胰腺及肺组织病理学变化并评分;检测血液及腹水中淀粉酶、TNF-α、IL-1β含量;取肺组织检测其中TNF-α、IL-1β、NF-κB含量;免疫组化及western blotting检测肺组织中HMGB1蛋白表达情况。结果假手术组大鼠无腹水产生,而SAP组有腹水产生;与假手术组相比,SAP组、APD组血清中的淀粉酶、TNF-α、IL-1β含量明显升高(p0.05);两组肺组织中MPO、MDA、TNF-α、IL-1β、NF-κB含量也明显较假手术组升高(p0.05);免疫组化及western blotting也观察到两组肺组织中HMGB1蛋白表达明显高于假手术组(p0.05);镜下见以上两组胰腺及肺组织损伤程度也较假手术组明显(p0.05)。而与SAP组相比,APD治疗组上述指标均明显降低(p0.05)。结论 APD可通过引流出含大量有害物质的腹水,降低SAP大鼠血液中的炎症水平,减少肺组织中炎症介质的表达,从而减轻SAP大鼠肺损伤。     

磁性丹参微球在骨折大鼠体内定位试验及对成骨细胞增殖分化的影响

目的观察磁性丹参微球在骨损伤后的体内分布特点及对成骨细胞的增殖与功能分化的影响,探讨磁性微球促骨愈合缓释诱导的作用机制。方法建立大鼠股骨骨折模型,在磁靶向作用下注射磁性丹参微球制剂,筛选最佳浓度,考察其磁响应性。MTT法检测1 d、4 d、8 d和12 d成骨细胞的增殖情况,Western blotting检测BMP2和BMP7蛋白的表达情况,RT-PCR检测BMP2和BMP7 mRNA的表达。结果 (1)在3500Oe磁场下给予60 mg/L的微球制剂后,骨折组织的丹参素含量检测达到最大值(P0.05)。(2)MTT试验显示在成骨细胞对数生长期第4天和第8天药物组+磁场组增殖效果明显高于其他三组(P0.01),药物组高于空白组和磁场组(P0.05)。(3)Western blotting检测药物+磁场组的BMP2和BMP7在所有时间点表达量均高于空白组(P0.05),BMP2、BMP7药物组表达量高于空白组和磁场组(P0.05)。(4)实时荧光定量PCR检测第12d时BMP2、BMP7 mRNA表达升高最为明显(P0.05),药物组和药物+磁场组表达量高于空白组和磁场组(P0.05)。结论磁性丹参微球在大鼠体内有较好的磁响应性,并对成骨细胞的增殖以及骨形态蛋白BMP2和BMP7的表达有明显促进作用。     

成年大鼠脊髓损伤后Sonic Hedgehog信号通路成分的动态表达

目的观察Sonic Hedgehog(Shh)信号通路中Shh、Gli-1在成年大鼠脊髓损伤后的动态表达,探讨Shh信号通路对大鼠脊髓损伤后的调控作用。方法将64只健康SD大鼠随机分为正常组(n=8),假手术组(n=8),脊髓损伤12h、1d、3d、7d、14d和21d组(n=8),共8组。构建大鼠脊髓损伤模型,观察损伤后大鼠行为学的改变,并应用实时荧光定量PCR技术(Real-Time Quantitative PCR)和蛋白免疫印迹法(Western Blotting)检测Shh、Gli-1 mRNA和相关蛋白表达水平的变化。结果行为学观察表明,大鼠脊髓损伤后运动功能下降,RT-PCR和免疫印迹法表明,Shh、Gli-1在正常组织少量表达,脊髓损伤后Shh、Gli-1表达均明显增高,损伤后第7天达到峰值,损伤21天后仍有高水平的表达。结论脊髓损伤可以上调Shh信号通路成分的表达并表现出一定的动态变化规律,提示Shh信号通路可能参与了脊髓损伤后神经细胞的调控作用。     

surfactin对舌鳞癌Tca8113细胞株增殖、凋亡和迁移作用的影响

目的初步探讨枯草芽孢杆菌发酵产物surfactin对舌鳞癌Tca8113细胞的增殖、凋亡及迁移作用的影响。方法体外培养舌鳞癌Tca8113细胞,加入不同浓度梯度的药物,分别培养24 h、48 h后,SRB(磺酰罗丹明B)法检测surfactin对舌鳞癌细胞的增殖抑制作用;平板克隆形成实验,检测surfactin对舌鳞癌Tca8113细胞生长能力的影响;Hochest/PI双染法观察surfactin对舌鳞癌Tca8113细胞形态变化的影响;Annexin-V-FITC/PI双染流式细胞仪检测surfactin对舌鳞癌Tca8113细胞调亡的影响;wound healing实验观察药物作用前后肿瘤细胞迁移距离的变化;免疫印迹法验证基质金属蛋白酶MMPs表达的情况。结果 SRB结果分析,surfactin能够有效抑制舌鳞癌细胞的增殖,并随药物浓度的升高和作用时间的延长抑制率不断升高,呈时间-剂量依赖性,24 h、48 h的半数抑制浓度(IC50)分别为74 ug/ml和53 ug/ml;平板克隆实验结果显示surfactin能够抑制舌鳞癌Tca8113细胞的克隆形成,药物组与对照组比较具有统计学意义(P0.05);Hochest/PI双染法、Annexin-V-FITC/PI双染流式细胞仪检测得出surfactin能够诱导舌鳞癌Tca8113细胞凋亡;wound healing实验观察得到,surfactin可明显阻碍舌鳞癌细胞划痕后的愈合能力;免疫印迹法结果得出surfactin可以通过下调MMPs蛋白表达抑制舌鳞癌Tca8113细胞迁移。结论 surfactin能够明显抑制舌鳞癌Tca8113细胞的增殖、迁移并有促凋亡的作用。     

成年大鼠脊髓损伤后内源性神经前体细胞的增殖与分化规律的研究

目的观察成年大鼠脊髓损伤后内源性神经前体细胞的增殖与分化,探讨内源性神经前体细胞的自然变化规律。方法制作脊髓压迫损伤模型,Brdu腹腔注射标记神经前体细胞,免疫荧光法(Immunofluoreseence)检测大鼠脊髓Brdu、GFAP、MBP阳性细胞数的变化。结果 1)正常组可观察到少量Brdu阳性细胞,脊髓损伤后Brdu阳性细胞显著增加(p0.05),并在第7天达到最大值,21天时仍高水平表达。2)正常组可见少量Brdu/GFAP和Brdu/MBP阳性细胞,脊髓损伤后Brdu/GFAP,Brdu/MBP双标阳性细胞数显著增加(p0.05)。结论脊髓损伤后神经前体细胞的数量在第7天达到最大值,我们认为,一周内可能是神经前体细胞增殖分化调控的关键时期。此外,新生星形胶质细胞和少突胶质细胞大量增殖,并与神经前体细胞的迁移、后肢功能恢复表现出一定的同步性,提示新生胶质细胞可能参与了脊髓损伤后神经功能的修复作用。     

环磷酰胺抑瘤作用及含药血清对肿瘤细胞凋亡水平的影响

目的:采用小鼠腋下接种瘤株的方法,建立肝癌荷瘤小鼠动物模型;利用血清药理学的方法,观察环磷酰胺(CTX)舍药血清体外的抑制肿瘤细胞生长及调亡作用的研究.方法 :小鼠肝癌细胞混悬液用生理盐水按1:1进行稀释制成含瘤腹水混悬液,在给药前24 h,每只小鼠腋窝皮下接种0.2 ml.CTX对小鼠肝癌抑瘤实验连续给药10 d,测定肿瘤作用端粒酶活性与细胞凋亡表达.结果:(1)CTX能够明显抑制肝癌肿瘤的生长(P＜0.01);(2)30%、20%和10%含药血清高中低剂量含药血清对HepG2肿瘤细胞具有明显的抑瘤作用,Hochest染色肿瘤细胞出现凋亡形态;而流式细胞仪检测可见含药血清高中低剂量的促肿瘤凋亡率,明显高于正常血清组.CTX能够明显升高肝癌荷瘤小鼠体内bc1-2的水平(P＜0.01);(3)CTX能够明显促进肝癌细胞的凋亡.结论 :CTX具有抑制小鼠肝癌的作用;能够明显促进肝癌细胞的凋亡;CTX的抑瘤作用可能与升高动物体内的bcl-2水平及促进癌细胞的凋亡有关,从而表现抗肿瘤的作用.