溶氧反馈-分批补料高密度培养枯草杆菌谷氨酰胺合成酶工程菌

为了建立枯草杆菌谷氨酰胺合成酶基因重组工程菌BL21/pET28b-glnA的高密度培养工艺,首先以摇瓶培养为基础,对影响工程菌生长及目的蛋白表达的因素如培养基、pH值、诱导剂浓度及时间等进行优化,再扩大至BIOTECH-SBG(5 L)自动玻璃发酵罐培养,利用溶氧反馈补料策略进行分批补料,并在培养过程中保持20%～50%的溶解氧,7.0～7.5的pH,以及1.0g/L乳糖诱导12 h,成功地进行了工程菌的高密度培养,最终细菌干重达到48.1 g/L,目的蛋白的表达量占菌体蛋白总量的55%,粗提物酶比活为10.35 U/mg,整个补料过程细菌比生长率稳定的控制在0.1 h-1左右.     

人α2a干扰素酵母工程菌高产培养条件的研究

研究了摇瓶培养条件对人α2a干扰素酵母工程菌生长及表达的影响,结果表明,当基础料中腺嘌呤含量为20μg/mL,在发酵进行至12h时再加入20μg/mL腺嘌呤时,IFN-α2a生物活性及比活分别达到了7.3×106IU/mL及6.77×107IU/mg.发酵过程中后期补入适量葡萄糖,且维持低糖水平,有利表达.维持总碳源含量不变,使培养基中葡萄糖与蔗糖比例为1∶0.1,结果IFN-α2a生物活性及比活分别比对照增加了一倍以上.在发酵进行至12h时,加入2g/L谷氨酸,IFN-α2a生物活性及比活分别比对照提高了1.76倍及1.94倍,而添加0.25～1.0g/L赖氨酸也能显著提高表达水平.培养基初始pH对产物表达有较大影响,初始pH为6.5时,对表达最有利.利用上述摇瓶培养优化条件,在2.6L生物反应器中进行补料分批培养,人α2a干扰素生物活性达到了1.3×107IU/mL,为原工艺的3倍.     

人α2a干扰素酵母工程菌高产培养条件的研究

研究了摇瓶培养条件对人α2 a干扰素酵母工程菌生长及表达的影响 ,结果表明 ,当基础料中腺嘌呤含量为 2 0 μg/m L,在发酵进行至 1 2 h时再加入 2 0 μg/m L腺嘌呤时 ,IFN- α2 a生物活性及比活分别达到 7.3× 1 0 6IU/m L及 6.77× 1 0 7IU/mg。发酵过程中后期补入适量萄萄糖 ,且维持低糖水平 ,有利表达。维持总碳源含量不变 ,使培养基中葡萄糖与蔗糖的比例为 1∶ 0 .1 ,结果 IFN-α2 a生物活性及比活分别比对照增加了一倍以上。在发酵进行至 1 2 h时 ,加入 2 g/L谷氨酸 ,IFN-α2 a生物活性及比活分别比对照提高了 1 .76倍及 1 .94倍 ,而添加 0 .2 5～ 1 .0 g/L赖氨酸也能显著提高表达水平。培养基初始 p H对产物表达有较大影响 ,初始 p H为 6.5时 ,对表达最有利。利用上述摇瓶培养优化条件 ,在 2 .6L生物反应器中进行补料分批培养 ,人 α2 a干扰素生物活性达到 1 .3×1 0 7IU/m L ,为原工艺的 3倍。     

产苯丙氨酸解氨酶重组大肠杆菌的培养

L-苯丙氨酸是人体8种必需氨基酸之一。酶法转化是目前生产L-苯丙氨酸的主要方法。为了提高苯丙氨酸解氨酶的产量,对可高效表达苯丙氨酸解氨酶基因的重组大肠杆菌JM105进行培养,对发酵过程中pH值对工程菌生长的影响进行了研究。结果表明,摇瓶培养条件下,控制发酵过程中发酵液的pH值可显著提高菌体产量,当控制pH值为7.0左右时,菌体量比对照高87%。在初始pH值为7.5的情况下,培养10h后将培养液pH值分别调整为5.5、6.0、6.5、7.0、7.5和8.0,则以pH值为7.5时的菌体量最高。10L发酵罐中控制发酵液pH值为7.5,菌体密度可达A600=20mol/L（DCW=11g/L）,比不控制pH值高出33%。试验结果为进一步开展该工程菌的高密度培养提供了一定的参考。     

流加培养裂殖壶菌发酵生产二十二碳六烯酸

利用流加技术高密度培养裂殖壶菌生产二十二碳六烯酸(DHA),根据裂殖壶菌间歇发酵的特性,通过分别流加浓缩全培养基和高浓度葡萄糖(600 g/L)以提高细胞密度和DHA含量.结果表明,当培养过程中葡萄糖浓度降至10 g/L左右时,采用变速流加葡萄糖使发酵液的糖浓度维持在10～20 g/L之间,对裂殖壶菌的生长和脂肪酸的积累最有利,发酵120 h后,其生物量、脂肪酸以及 DHA含量达到最大值,分别为60.6、40.2和8.0 g/L,DHA 累计速率为66.7 mg/(L·h).     

摇瓶中重组大肠杆菌生产人γ-干扰素工艺优化

目的优化大肠杆菌生产重组人γ-干扰素摇瓶发酵工艺条件,分析摇瓶发酵过程中的制约因素。方法在摇瓶中研究了种子菌龄、接种量和诱导时机等因素对工程菌生产rhIFN-γ和质粒稳定性的影响,及优化条件下工程菌发酵参数。结果最佳条件:种子液为OD6000.5~1.5,接种量为6%,培养至OD600为1.5时42℃诱导表达4 h。在此条件下,在摇瓶中使用M9II培养基时,质粒无丢失,摇瓶中rhIFN-γ的表达量占菌体总蛋白的43.2%,光密度为3.3。对发酵过程中总糖、还原糖、总氮和pH的分析表明,发酵过程中培养基中碳源、氮源丰富,而溶解氧的不足和pH值偏酸性可能是整个培养过程的限制性因素。结论构建的工程菌发酵的稳定性和重复性良好,为rhIFN-γ的大规模生产提供可靠的放大依据。     

生物反应器高密度异养培养小球藻

首先用摇瓶实验确定异养流加分批培养小球藻中起始葡萄糖及KNO3的适宜浓度与流加葡萄糖及KNO3浓度的控制范围和补料液中最适C/N值.培养基中起始添加10g·L-1葡萄糖和1.6g·L-1KNO3较适宜.在此前提下,流加分批培养时葡萄糖和NO3-质量浓度应分别控制在617～245g·L-1和≤0.44g·L-1,补料液中最适C/N值为41.2.据此结果,经5L通风搅拌反应器放大培养实验,效果良好.连续流加分批异养培养小球藻59h,总糖60g·L-1,得藻生物量341g·L-1,葡萄糖转化率为56.8%,实现了高密度培养.     

重组SOD在毕赤酵母中表达的发酵工艺研究

以实验室构建的产SOD重组菌为出发菌株,研究其摇瓶发酵工艺条件以提高表达水平,进而在5L高密度发酵. 以确定接种后诱导时间（16h）、诱导剂浓度（2%）、温度（30℃）、初始pH值（6.2）和诱导时间72h为条件,摇瓶水平酶活比初始时提高了64%;经5L罐发酵实验,酶活达到40864U·mL^-1,是摇瓶的86倍.     

重组人载脂蛋白AⅠ米兰突变体在酵母中的分泌表达

将重组质粒pPIC9K-apoAⅠ-milano用BglⅡ酶切后转化Pichia pastoris GS115菌株,筛选得到G418高抗性转化子,经甲醇诱导和摇瓶发酵,用SDS-PAGE与Western blot检测上清液,发现有明显的重组人载脂蛋白AⅠ米兰突变体(rAIM)表达,但其分子量比正常蛋白小.对酵母工程菌的摇瓶发酵条件进行优化后,rAIM表达水平得到提高, 约为70 mg/L发酵液,其中正常大小的rAIM所占的比例约为80%.采用冷丙酮沉淀法初步纯化了酵母工程菌发酵液中的rAIM,并验证其有磷脂结合能力.     

重组大肠杆菌BL21(pBAI)生产人干扰素α2b

通过培养重组大肠杆菌BL21(pBAI)表达人干扰素α2b(Human Interferon α2b,hIFNα2b).hIFNα2b表达由PL,启动子控制,通过升温至42℃诱导表达.本研究比较了分批培养和多种补料分批培养方式下hIFNα2b的生产,其中通过恒速流加葡萄糖,hIFNα2b的表达量达到6 540 mg/L,平均生产速率和比速率分别为546 mg/(L·h)和27 mg/(g·h).升温前1.5 h补充25 g酵母提取物,并以0.27 g/(g·h)的比速率供应葡萄糖,hIFNα2b的平均生产速率达到1 006 mg/(L·h),比生产速率为54 mg/(g·h),对有机氮源的得率提高到138 mg/g.     

2006年7月汉中地区异常高温天气特征分析

通过对2006年7月汉中市出现的持续高温天气进行分析,揭示持续高温天气发生发展的天气学原因,为今后的预报提供指导依据。同历史资料做对比,深入分析高温阶段天气形势特征。发现2006年汉中持续高温刷新了多项历史纪录:日最低气温28.1℃、日平均气温>30℃连续9天、日最低气温>25℃连续9天、日平均气温32.7℃。高温持续时间的长短,取决于副高的控制时间的长短,而副高控制时间的长短又与副高的位置、波长的长短有关。高空南亚高压的位置及持续时间也是高温天气得以持续的重要条件。台风及其减弱为弱低压后,其携带的大量暖湿水汽以及弱低压外围的偏北下沉气流对高温天气起到辅助加强作用。     

加速甘肃省“两高一优”农业建设与持续发展的设想

剖析了甘肃省农业发展的优势和所面临的问题，认为加速“两高一优”农业建设和持续发展具有重要意义，并提出了加速“两高一优”农业建设和持续发展的总体设想与具体可行的对策措施。     

"三高"处理在镇城底矿南四采区三维地震勘探中的应用

在镇城底矿南四采区进行三维地震勘探中，将三高资料处理应用到山区三维地震资料的处理中确实能够起到良好的效果。     

新品种玉米对畜禽的营养特性及饲喂效果

综述了高油玉米、高赖氨酸玉米、高油高赖氨酸玉米、高有效磷玉米等新品种玉米对畜禽的营养特性及饲喂效果。新型玉米的出现在一定程度上解决了浣玉米品质低的问题，尤其是高油玉米集高能和高蛋白质、高赖氨酸于一身，在饲粮配合中的地位更加突出。     

抗高温高密度水基钻井液体系的室内实验研究

为了满足当前深井、超深井逐步向深层次开发的需要,在分析评价各种抗高温水基钻井液处理剂的基础上,优化研制出一种以OCL-JB为主要降滤失剂的抗210℃高温的高密度水基钻井液体系,并对体系的性能进行评价。实验结果表明,新型抗高温、抗盐降滤失剂OCL-JB抗温性好,能与多种处理剂配伍;OCL-JB主要是通过吸附作用,增大粘土颗粒的zeta电位和水化膜来提高泥浆中粘土微粒的聚结稳定性,控制钻井液高温高压滤失量。所研制的抗高温高密度(2.3 g/cm3)钻井液经过210℃高温后性能稳定,具有良好的高温高压流变性能和滤失造壁性能,抑制能力和抗污染能力强,润滑性好。     

C60高强高性能混凝土的配制

通过选择适宜的配合比与高效减水剂,采用合理的搅拌与成型工艺,依靠优选当地易得的原材料可以配制出C60级的高强高性能混凝土。     

啤酒花专用微肥的研究

施用酒花专用微肥,可增加土壤中微素含量,有利于酒花对大量和微量元素的吸收。由于营养的改善,亩增产鲜花64—168公斤,甲酸平均含量由6.1—6.9％提高到7.3—7.6％,高于出口标准。     

大流动性高强混凝土的配制研究

介绍了大流动性高强混凝土的配制研究情况 ,分析了微细矿渣粉 (HBP)掺量和水灰比等影响因素 ,讨论了 HBP提高混凝土强度的机理。研究结果证明 :微细矿渣粉能够显著提高混凝土的抗压强度 ;当掺量在 5 %～ 15 %的范围内时 ,抗压强度随着掺量的增大而提高 ;使用 H BP、P.O5 2 5 R水泥和高效减水剂 ,能够配制出坍落度达 2 0 cm、2 8d抗压强度 78.3 MPa的混凝土。     

基于高温高过载下电子元器件参数变化研究

针对引信工作环境的特点,以典型的引信组件及其电子元器件为研究对象,通过实验研究引信组件及电子元器件在高温和高过载下特性参数的变化规律,并通过实验数据的处理与分析,为提高引信系统的可靠性水平提供了分析手段.