脊椎动物促性腺激素释放激素的结构、基因表达与调控的研究进展

综述了有关对脊椎动物促性腺激素释放激素的结构、基因表达与调控的研究进展 .阐明促性腺激素释放激素结构多样性 ,功能多样性 ,及其基因表达与调控 ,并对可能的应用前景作简要阐述     

南方鲇促生长激素释放激素基因的部分cDNA克隆及序列分析

促生长激素释放激素（GHRH）是一种重要的内分泌激素,主要功能是调节脑垂体分泌生长激素（OH）．实验旨在克隆分析南方鲇GHRH基因的cDNA序列．从南方鲇的脑组织中提取总RNA并反转录成cDNA,再根据已知GHRH基因的保守区域序列设计引物,通过反转录聚合酶链式反应（RT—PCR）实验,获得了一条334bp的片段并进行了测序,序列信息分析表明,该序列与沟鲇的GHRH基因同源,相似性达99％．根据同源性检索结果推测该序列编码110个氨基酸,并基于该编码序列分析了南方鲇GHRH的功能结构域以及南方鲇同其他物种的遗传发生关系,     

GnRH对虎纹蛙LH和FSH分泌活动的调节作用

通过在体和离体实验,研究了ｍＧｎＲＨ和ｃＧｎＲＨ－Ⅱ对生殖前期虎纹蛙垂体ＬＨ及ＦＳＨ的合成与分泌的影响．结果表明：在体条件下,ｍＧｎＲＨ和ｃＧｎＲＨ－Ⅱ都能极显著刺激♀蛙和♂蛙垂体ＬＨ及ＦＳＨ的释放,也能显著升高♀蛙垂体ＬＨ的含量,但对♂蛙垂体ＬＨ及ＦＳＨ的含量无明显影响;ｃＧｎＲＨ－Ⅱ能极显著升高♀蛙垂体ＦＳＨ的含量．在刺激♀蛙垂体ＬＨ的合成、释放以及♂蛙垂体ＦＳＨ的释放方面,ｍＧｎＲＨ的作用显著强于ｃＧｎＲＨ－Ⅱ．离体实验中,０．１ｎｇ／ｍＬ的ｍＧｎＲＨ和１ｎｇ／ｍＬ的ｃＧｎＲＨ－Ⅱ都能极显著刺激离体♀蛙垂体碎片ＬＨ的释放．     

斑马鱼3种胰蛋白酶原基因的克隆、序列分析及组织表达

 胰蛋白酶是丝氨酸蛋白酶类超家族成员之一,在动物蛋白消化中起着重要作用。为深入研究胰蛋白酶在鱼类中的蛋白结构和生理功能,利用RT-PCR和RACE方法,成功获得了斑马鱼3种胰蛋白酶原cDNA序列(zftry1a、zftry1b和zftry2)。结果表明,zftry1a和zftry1b均有242个氨基酸残基组成,其中包括15个氨基酸的信号肽和5个氨基酸(LDDDK)的激活肽。zftry2由247个氨基酸残基组成,其中包括15个氨基酸的信号肽和9个氨基酸(APLGDDDDK)的激活肽。氨基酸序列比对结果显示,三者具备胰蛋白酶原的保守结构特征,如含有催化三联体氨基酸(His-57、Asp-102和Ser-195),12个半胱氨酸,位于底物结合口袋底部Asp-189和口袋开口处的Gly-216、Gly-226等。进化树结果显示,斑马鱼zftry1a和zftry1b属于group I,为阴离子胰蛋白酶原;斑马鱼zftry2属于group II,为阳离子型胰蛋白酶原。RT-PCR结果显示,三者组织分布模式类似,且在肠中有最高表达量。这些结果为研究鱼类胰蛋白酶原的基因进化和功能以及进一步探讨鱼类消化生理的分子机制奠定了基础。     

斑马鱼SAA基因克隆及表达分析

利用巢式PCR(nest PCR)的方法克隆斑马鱼血清淀粉样蛋白A基因,并进行生物信息学分析.实时荧光定量PCR结果显示:SAA在斑马鱼胚胎发育时期的表达量呈现明显的“增长—稳定—增长”趋势.成鱼组织分布中,SAA在11个斑马鱼组织中均能检测到,在心脏和肝脏中相对高表达.     

虎纹蛙促性腺激素及其释放激素含量的日变化

利用具有高度特异性的放射免疫测定法,研究了10月份虎纹蛙成蛙脑和脑垂体GnRH、以及脑垂体和血浆GtH含量的日变化,结果表明：雌蛙脑和脑垂体mGnRH含量、以及脑垂体cGnRH-Ⅱ含量都存在有明显的日变化;雄蛙脑垂体和血浆LH水平,以及雌、雄蛙血浆FSH水平也都存在明显的日变化;对各种激素日变化产生的原因进行了探讨.     

固相合成促性腺激素释放激素GhRH及其类似物

采用Merrifield多肽固相合成法 ,合成了促性腺激素释放激素GhRH ,即PGlu·His·Try·Ser·Tyr·Gly·Leu·Arg·Pro·Gly·NH2 以及类似物 [D -Ala6][去Gly·NH102 ]GhRH乙基酰胺 ,即PGlu·His·Try·Ser·Tyr·D -Ala·Leu·Arg·Pro·NH C2 H5和 [Arg2 ]GhRH ,即PGlu·Arg·Try·Ser·Tyr·Gly·Leu·Arg·Pro·Gly·NH2 ,并得到纯品     

粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)几丁质酶基因克隆的筛选及序列分析

用改进方法提取粘质沙雷氏菌染色体DNA.通过PCR扩增,得到几丁质酶(chiA)基因,利用pUC19质粒构建了含有chiA基因的克隆载体 ,并转化E.coli DH5α.经测序分析,证明克隆片段与文献报道基本相同,仅在第437位碱基由C变为T.     

中国人神经珠蛋白(NGB)基因克隆与序列分析

应用RT-PCR方法从中国人胎脑组织中扩增出神经珠蛋白(NGB)特异性编码基因片段,并将其克隆到pMD18-TVector中,构建了pMD18-T-hNGB克隆质粒,然后进行测序分析并与国外报道的NGB序列相比较.结果表明,本文获得的中国人NGB编码基因序列与国外序列的同源性为98%.     

人促性腺激素释放激素及转运肽的表达及生物活性测定

为研究重组人促性腺激素释放激素(GnRH)表达产物及其生物活性,将人促性腺激素释放激素及转运肽基因重组到表达载体PTYB2上,测序结果表明序列正确,未改变读码框架,然后转入大肠杆菌BL21(DE3)PlysS中进行诱导表达,纯化后的表达产物经Tricine-SDS-PAGE电泳分析,以其抑制肿瘤前列腺癌细胞增生作用验证其生物学活性。     

斑马鱼GnRH-Ⅱ基因的生物信息学分析

从斑马鱼脑组织提取总RNA,应用RT-PCR方法克隆GnRH-ⅡcDNA,其长度为589bp,编码的GnRH-Ⅱ前体为86个氨基酸残基。利用生物信息学方法对克隆得到的斑马鱼GnRH-Ⅱ基因序列、编码蛋白及其理化性质进行分析,并预测其编码蛋白的结构与功能,构建其同源基因的系统进化树。     

斑马鱼母源凝集素基因zfol的克隆和表达分析

为验证凝集素Zfol是否为母源蛋白及其具体表达模式,揭示凝集素这类来源于母体的免疫物质在鱼类胚胎发育早期的免疫保护作用并提供理论依据,克隆Zfol的基因全长进行了生物信息学分析.利用RT-PCR和Western blot分析了zfol mRNA和Zfol蛋白的时空表达.结果表明:zfol mRNA及Zfol蛋白在斑马鱼胚胎发育过程中的表达均呈动态变化.zfol mRNA在成鱼的卵巢、心脏、肝脏、肾脏、脑中表达,在精巢中未检测到表达.Zfol蛋白在精巢、心脏、脑、肝脏等组织中检测不到表达,而在肾脏中有低含量表达,在卵巢中有高含量表达.     

大熊猫IL-2基因的克隆与序列分析

本实验应用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术，从ConA诱导培养的大熊猫外周血淋巴细胞总RNA中扩增得到大熊猫IL-2基因，并将其克隆到PGEM-T载体中．经菌落PER鉴定、序列测定及序列分析，结果表明，经克隆得到的IL-2基因开放阅读框由465个核苷酸组成，编码一个由155个氮基酸组成的多肽，包括编码20个氨基酸的信号肽和135个氨基酸的成熟肽，该基因（已在Genbank中登录，序列号为：DQ852339）与已知的其他哺乳动物如犬、猫、人、猪、牛、羊、马、兔、鼠等的IL-2核苷酸同源性在66.5％（鼠）～91．5％（犬）之间；IL-2编码氨基酸同源性在54．8％（鼠）-85．2％（犬）之间；进化树构建结果表明大熊猫与犬亲缘关系最近．     

无脊椎动物促性腺激素释放激素研究进展

促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,_GnRH)是下丘脑-垂体-性腺(hypothalamic-pituitary-go-nad,_HPG)轴的关键信息分子,在脊椎动物的性腺发育、性成熟和繁殖功能的维持中起着重要作用。用免疫组织化学、酶联免疫吸附测定以及高效液相色谱等方法在多种无脊椎动物中也检测到了其存在,主要分布于中枢神经以及生殖系统。可见,GnRH在无脊椎动物中具有普遍存在性。目前已至少发现28种类型的GnRH,15种来自脊椎动物,13种来自无脊椎动物。目前,无脊椎动物中除被囊动物外,仅有真蛸、海兔和商乌贼已经获得了GnRH的mRNA序列,其肽链分子结构与脊椎动物的类似。GnRH在无脊椎动物中具有广阔的研究空间,将为无脊椎动物的生殖调控的研究提供参考。     

广西巴马小型猪促生长激素释放激素成熟肽的克隆及序列分析

目的扩增广西巴马小型猪促生长激素释放激素(GHRH),分析其序列结构特点。方法以广西巴马小型猪基因组DNA为模板,用特异性引物扩增GHRH外显子3,再用引物延伸悬挂PCR法扩增GHRH成熟肽,纯化后,连接、转化到大肠杆菌,筛选阳性克隆,测序。结果经测序证实广西巴马小型猪GHRH外显子3及其成熟肽的基因序列与相关文献报道一致。克隆得到的广西巴马小型猪GHRH序列全长为132 bp,其中外显子3基因序列长105bp。同源性比较发现,广西巴马小型猪GHRH外显子3基因序列与GenBank(NCBI)中报到的猪GHRH外显子3相比,同源性为97.14%,有3处发生碱基变化。结论本实验成功克隆了广西巴马小型猪GHRH成熟肽序列。     

重组促性腺激素释放激素基因原核表达的影响因素

为得到较多的GST-GnRH/TRS融合蛋白,深入研究其性质,对工程菌内GST-GnRH/TRS基因表达的条件进行了研究。结果表明,诱导GST-GnRH/TRS基因原核表达的最佳IPTG浓度为0.2mmol/L;在30℃诱导培养,能够获得较高的蛋白表达量;最佳诱导培养时间2h;最佳诱导培养的初始pH值为7.0;在振荡转速为135r/m1n、诱导培养时间为2h时,增大接种量,有利于原核基因的表达;在培养基因中添加适量的葡萄糖,能够提高GST-GnRH/TRS基因的原核表达,但葡萄糖含量较高时也不利于GST-GnRH/TRS基因原核表达;K 、Mg2 、Ca2 、Fe3 抑制GST-GnRH/TRS基因的原核表达,其中K 抑制作用最为强烈;添加少量的NH4 有利于提高GST-GnRH/TRS基因原核表达的量,但NH4 含量过高也不利于GST-GnRH/TRS基因原核表达。     

蓖麻PsbO基因的克隆与序列分析

用实验室栽培的蓖麻新鲜叶片为材料,Trizol法提取总RNA,参照GenBank公布的植物PsbO氨基酸序列,进行序列比对找出氨基酸序列保守区设计简并引物,通过RT-PCR扩增目的片段,纯化后克隆到T-Vector中测序,获得蓖麻的PsbO基因,对其基因序列进行分析。了解到其长度为1081bp,5＇非编码区为10bp,3＇非编码区为273bp,编码区长798bp,编码266个氨基酸。序列分析结果表明,蓖麻PsbO基因编码的氨基酸序列与已公布的其他植物中克隆到的PsbO氨基酸序列有较高的同源性。     

五指山猪生长激素基因全序列克隆及序列分析

通过筛选一对引物，PCR扩增五指山小型猪GH基因全序列，并进行克隆测序分析、序列分析及氨基酸分析．结果表明，有98个位点不同，同源性为95．026％，外显子有2个碱基发生了突变，其中外显子2有1个位点的碱基突变导致了氨基酸异义取代。