文蛤蛋白水解制备抗氧化活性肽的研究

以文蛤蛋白为原料,通过蛋白酶水解制备抗氧化活性肽.利用体外清除DPPH活性评价酶解产物的抗氧化活性,采用超滤、葡聚糖凝胶柱层析和HPLC对相应的活性肽进行分离纯化,通过HPLC-MS进行结构鉴定.结果表明:木瓜蛋白酶水解产物的DPPH清除活性明显高于碱性蛋白酶、风味蛋白酶、中性蛋白酶和复合蛋白酶,产物质量浓度为1 mg·mL-1时,DPPH清除率为55.74%;以DPPH清除率为筛选指标,对木瓜蛋白酶酶解产物进行逐级分离,得到4个具有抗氧化活性的目的肽段,氨基酸序列分别为LNFNLEKSR(1120.3 u)、SWLRPR(814.4 u)、RIGNIISQY(1063.3 u)和LNFNLEK(877.2 u).     

腐乳毛霉醇提物不同极性部位抗氧化活性及细胞保护作用研究

目的:观察腐乳毛霉醇提物不同极性部位抗氧化活性及对L-O2细胞保护作用.方法:分别将腐乳毛霉醇提物萃取后的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇及水部位进行体外抗氧化活性和对CCl_4致LO2细胞损伤的保护实验.结果:腐乳毛霉醇提物均具有较强的抗氧化、清除DPPH和ABTS自由基及FRAP能力,对CCl_4引起L-O2细胞的氧化损伤具有显著的保护作用,可降低细胞内ROS及培养液中MDA含量和LDH活性,升高SOD、GSH-Px和CAT活性,从而减轻CCl_4对L-O2细胞氧化损伤,其作用效果由高到低依次是乙酸乙酯、正丁醇、水和石油醚部位.结论:腐乳毛霉醇提物不同极性部位对CCl_4引起L-O2细胞的氧化损伤具有显著的保护作用,其作用机制可能与抗氧化作用有关.     

柿叶提取物对CCl4致小鼠急性肝损伤保护作用的研究

探讨了柿叶醇提物的乙酸乙酯萃取制剂(EAF)对小鼠急性肝损伤的保护作用.腹腔注射四氯化碳(CCl4)致小鼠急性肝损伤模型,测定不同剂量的EAF对血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和碱性磷酸酶(AKP)活性,肝超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)含量的影响,同时对肝组织进行病理学检查.结果表明,EAF具有剂量依赖性地降低血清中ALT、AST、AKP值,增强肝中SOD、GPx、CAT的活性,降低肝组织匀浆中MDA的含量,减轻CCl4对肝脏细胞的病理损伤.100mg/kg是EAF对肝损伤的合适保护剂量.适量的EAF对CCl4所致小鼠急性肝损伤有较好的保护作用.     

短讯

一种大蒜蛋白酶解物系列产品及其制备方法和用途江苏大学的“一种大蒜蛋白酶解物系列产品及其制备方法和用途”被授予发明专利.该发明涉及植物蛋白的开发利用领域,以大蒜脱除大蒜油或大蒜素之后得到的包含大蒜蛋白质的残余物为原料,通过加蛋白酶采用酶法水解,制成富含活性肽的蛋白酶解物.采用单酶水解和双酶水解的方法,可以在温和的条件下,将大蒜残余物如干渣粉中蛋白质酶解成2~10肽的活性多肽和氨基酸类物质.该酶解液的制备方法包括:大蒜干渣粉碎→酶解→灭酶→离心→过滤→超滤→酶解物.酶解物通过后续加工可以制成不同的液剂和粉剂制品.…     

大豆蛋白酶解物抗氧化及促进微生物生长研究

研究Alcalase蛋白酶对大豆蛋白的水解作用,通过正交设计确定酶解最佳条件,探讨最佳水解条件下不同酶解时间酶解物的抗氧化性和促进微生物生长的作用.结果表明,酶解最佳条件为:pH 9.0、温度65℃、底物酶量比100 g/mL;酶解90 min的酶解物清除自由基能力最强,酶解30 min的酶解物对酵母菌生长有促进作用,酶解60 min酶解物对酵母菌的代谢作用显著;酶解60、90 min的酶解物对黑曲霉的生长均有较好的促进作用.可见,酶解时间不同,酶解物的抗氧化活性与促进微生物生长作用有差别.     

河蚬软体部分营养成分分析及评价

通过对河蚬软体部分营养成分分析,综合评定其营养价值.结果表明:河蚬软体部干样中,粗蛋白、粗脂肪、灰分含量分别为63.33%、10.91%、6.29%;必需氨基酸占氨基酸总量的39.10%,各必需氨基酸中平均氨基酸分为88.9,第一限制氨基酸为Leu(1973年FAO/WHO标准);并富含钙、钠、钾、铁等无机元素.认为河蚬是一种营养价值较高的贝类.     

血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽的酶法制备

以扇贝裙边的酶解产物——蛋白多肽对ACE活性的抑制率作为控制水解程度的指标,确定制备ACE活性抑制肽的最佳酶种及酶解工艺技术条件.通过胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、复合风味酶、枯草杆菌蛋白酶5种酶酶解扇贝裙边得到的蛋白多肽对ACE抑制能力的比较发现,5种酶在不同酶解时间所得到的酶解蛋白多肽都具有一定的ACE抑制能力,其中胃蛋白酶酶解蛋白多肽的ACE抑制率最高,为91.33%;再经L9(3)4正交实验对胃蛋白酶酶解工艺条件进行优化,确定酶解反应最佳条件是酶量400 U.g-底1物,pH 2.5,温度32℃,底物浓度(原料∶水)1∶2,酶解时间3 h;试验结果还表明,单酶(胃蛋白酶)的酶解蛋白多肽比复合酶(复合风味酶)和双酶(胃蛋白酶 木瓜蛋白酶)的酶解蛋白多肽对ACE活性的抑制能力都强.     

罗非鱼鱼鳞胶原多肽的优化制备及其生物活性研究

以罗非鱼鱼鳞为原料,采用碱性蛋白酶和胰蛋白酶复合水解,在单因素试验的基础上,采用响应面法优化酶解工艺,制备鱼鳞胶原多肽.测定胶原多肽的抗氧化活性、细菌低温保护活性、氨基酸组成及相对分子质量分布.结果显示,最适酶解条件为:底物质量浓度30.6 mg·m L-1、胰蛋白酶和碱性蛋白的加酶量分别为1.44和0.70 mg·m L-1、酶解温度50℃、pH值8.5、酶解时间6.35 h.酶解胶原多肽对DPPH自由基和羟基自由基的半数清除质量浓度(IC50)分别为2.89和3.54 mg·m L-1.经过细菌低温保护试验,当胶原多肽质量浓度为1 mg·m L-1时,嗜热链球菌的存活率达到75.6%.鱼鳞胶原肽相对分子质量分布显示,78%多肽片段的相对分子质量分布于180~2 000 u之间.氨基酸组成分析显示鱼鳞多肽富含甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸及天冬氨酸等,这些特定的氨基酸与胶原多肽的抗氧化活性、细菌低温保护活性相关.     

河蚬[Corbicula fluminea(Müller)]和江蚬[Corbicula cf fluminalis(Müller)]耐旱能力的实验观察

本文报导了河蚬[Corbicula fluminea(Müller)]与江蚬[Cobicula of fluminalis(Müller)]的耐旱能力及有关的实验结果.两种蚬在空气中暴露一定时间后,小个体的死亡较高.江蚬离水两天后再放回水中,50-80%可恢复正常生活,时间延长则恢复率显著下降。氨,二甲苯,福尔马林和乙醇等几种挥发性化学物质对江蚬的作用不同,氨的致死作用最快。     

海参内脏酶解制备海参肽工艺

以蛋白水解度和酶解液中海参肽相对分子质量的分布作为指标,考察不同蛋白酶的酶解效果,筛选水解海参内脏的最适合蛋白酶,并通过单因素实验和正交实验优化酶解工艺.实验结果表明:胰蛋白酶的水解效果最佳,可用于水解海参内脏制备海参肽;在底物质量分数为1.0%,加酶量为0.375 1 mkat·g^-1,pH值为8.0,酶解温度为37 ℃,水解时间为5 h的最优酶解条件下,海参内脏的水解度可达到48.90%,酶解液中的多肽(2 000~5 000 u)质量分数为52.68%,寡肽(含氨基酸)(≤2 000 u)质量分数为47.25%.     

双酚A对河蚬呼吸代谢和抗氧化酶的毒性研究

采用静态染毒法,研究了双酚A(bisphenol A,BPA)对河蚬(Corbicula fluminea)的急性毒性和BPA在1/2 LC50, 1/4 LC50, 1/8 LC50, 1/10 LC50亚急性浓度胁迫下耗氧率和排氨率以及抗氧化酶系统中 SOD、CAT活性的变化,以探究河蚬在BPA胁迫下的生物学响应.结果显示:BPA对河蚬96 h-LC50为6.34 mg·L-1;亚急性毒性指标耗氧率、排氨率以及超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）对BPA比较敏感,在本试验浓度范围内（0.63 ～3.17 mg·L-1）河蚬耗氧率、排氨率以及两种酶活性变化均呈现先下降后上升再下降的趋势,且有较好的一致性和规律性.结果表明,BPA对河蚬产生了氧化损伤,具有一定的毒性作用.     

蚕蛹抗氧化肽的制备及其体外抗氧化活性评价

为更客观地评价蚕蛹抗氧化肽的抗氧化能力, 以人工胃肠模拟液对不同蛋白酶酶解物的抗氧化能力进行评价, 优选获得最佳的制备用酶——碱性蛋白酶. 在此基础上,以蚕蛹抗氧化肽总还原能力为指标, 利用响应曲面法(response surface method, RSM)优化碱性蛋白酶制备蚕蛹抗氧化肽的最佳酶解工艺. 结果表明: 碱性蛋白酶的最佳酶解条件为pH=8.30, 加酶量为15.34 μL(1 902 U), 温度为50.47 ℃, 时间为2.45 h; 在此条件下优化预测得到的2 mg 蚕蛹蛋白/mL 酶解液的总还原能力为0.434, 蚕蛹抗氧化肽对·OH 和DPPH· 自由基的半数清除率IC50 分别为4.51 与4.24 mg/mL.     

河蚬乙酸乙酯提取物的抗氧化活性及其对人胆管癌细胞的抑制作用

作为传统中药的河蚬具有退热、治疗肝病和解酒等功效.以新鲜河蚬 (Corbicula fluminea)肉为原料,经甲醇抽提,乙酸乙酯萃取等方法得到河蚬乙酸乙酯提取物.运用DPPH法检测其清除自由基的能力,通过MTT法和倒置显微镜观察其对人胆管癌细胞QBC939生长的影响,并通过流式细胞术分析其对QBC939细胞周期的影响.结果显示:河蚬乙酸乙酯提取物对DPPH自由基具有一定的清除作用,在较低的浓度下有较高的清除效果,IC50值为0.6 mg/mL,且随其浓度的增加而不断增强;河蚬乙酸乙酯提取物对QBC939细胞有显著的抑制作用,处理48 h,IC50值为250 μg/mL,细胞形态发生明显变化;处理后的QBC939细胞出现明显的凋亡峰.研究表明:河蚬乙酸乙酯提取物不但具有抗氧化活性,且对体外培养的QBC939细胞具有明显的增殖抑制作用,能够改变QBC939细胞周期分布,并诱导QBC939细胞发生凋亡.说明河蚬乙酸乙酯提取物可能具有天然药物开发的潜力,同时也为胆管癌的防治提供新的思路和方法.     

超高压对蓝蛤酶解液风味及其蛋白质结构的影响

以蓝蛤为原料,研究了经超高压处理后蓝蛤酶解液中游离氨基酸、核苷酸和有机酸等含量的变化,同时分析了挥发性风味物质、蛋白质结构和外源添加酶活性的变化。结果表明:超高压处理对风味蛋白酶和复合风味蛋白酶有激活作用,且对风味蛋白酶激活作用更强;超高压处理蓝蛤酶解液中游离氨基酸、琥珀酸及味精当量高于常压处理的酶解液;超高压处理酶解液鲜味及整体滋味更好,主要挥发性物质种类和含量增加,不良风味物质种类和含量减少,改变了其挥发性物质的组成,从而达到增香的作用。超高压能破坏蛋白质结构,促进了呈味氨基酸的释放,改善了酶解液的风味,提高了蛋白质利用率。超高压处理是通过提高蛋白酶活性特别是风味蛋白酶活性,破坏蛋白质结构,从而增加了蛋白质水解度,促进了呈味氨基酸、核苷酸、有机酸等的释放,改善了酶解液的风味。     

鲭鱼罐头蒸煮液蛋白酶解产物的生物活性分析

以鲭鱼罐头蒸煮液为原料,采用生物酶解方法制备活性肽,以实现鱼罐头加工废弃液的高值化利用.研究结果表明,采用复合酶(碱性蛋白酶和胰蛋白酶)分段酶解,得到相对分子质量MW1 ku的组分占50%,高于碱性蛋白酶(30%)和胰蛋白酶(28%)单酶水解效果.进一步采用超滤方法分离酶解产物,得到不同相对分子质量范围的3个组分,其中MW1 ku的P1组分的抗氧化活性和ACE抑制效果最好.     

一种大蒜蛋白酶解物系列产品及其制备方法和用途

江苏大学的“一种大蒜蛋白酶解物系列产品及其制备方法和用途”被授予发明专利．该发明涉及植物蛋白的开发利用领域，以大蒜脱除大蒜油或大蒜素之后得到的包含大蒜蛋白质的残余物为原料，通过加蛋白酶采用酶法水解，制成富含活性肽的蛋白酶解物．采用单酶水解和双酶水解的方法，可以在温和的条件下，将大蒜残余物如干渣粉中蛋白质酶解成2—10肽的活性多肽和氨基酸类物质．该酶解液的制备方法包括：大蒜干渣粉碎→酶解→灭酶→离心→过滤→超滤→酶解物．酶解物通过后续加工可以制成不同的液剂和粉剂制品．该酶解物可以通过对血管紧张素Ⅰ转化酶（ACE）的抑制作用用于降低高血压患者的血压，同时具有提高免疫、调节血脂以及抗衰老的功能．     

杜仲叶提取物对乙醇导致的小鼠小脑和大脑皮层DNA损伤的保护作用

选取176只雄性昆明种小鼠,随机分为空白组、模型组、阳性组、杜仲叶不同提取物的高(400 mg/kg)、低(100 mg/kg)剂量组,彗星实验每组4只,生化指标测试实验每组28只.采用彗星实验筛选杜仲叶(Eucommia folium)95%醇提物、50%醇提物和水提物对乙醇所致小鼠小脑和大脑皮层DNA损伤的保护作用,确定最佳提取物;通过酶联免疫方法和比色法检测杜仲叶最佳提取物对乙醇引起小鼠小脑、大脑皮层组织氧化损伤相关生理指标的影响,如一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)、8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)和醌氧化还原酶1(NQO1)的含量,以及总超氧化歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-P_X)和胆碱乙酰转移酶(ChAT)的活力.采用改良福林酚(FC)比色法,测定杜仲叶最佳提取物中总多酚的含量.结果显示,杜仲叶50%醇提物可显著改善乙醇引起的急性脑神经DNA损伤,保护作用强于杜仲叶95%醇提物和水提物.50%醇提物显著降低小鼠小脑和大脑皮层组织中MDA、NO、8-OHdG和NQO1的水平,提高GSH-P_X、T-SOD和ChAT的活性.采用FC比色法测定杜仲叶50%醇提物中总多酚的含量为62.7%.以上结果表明:杜仲叶50%醇提物可能通过提高脑组织抗氧化的能力,达到保护脑神经DNA的作用;在保护脑神经DNA和抗氧化作用中,总多酚类成分发挥了极其重要的作用.     

酪蛋白糖巨肽酶解物的二肽基肽酶-4抑制作用

为探讨酪蛋白糖巨肽(GMP)酶解物的二肽基肽酶-4(DPP-4)抑制作用,选择木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶分别酶解GMP获得糖巨肽酶解物,选择甘氨酰脯氨酸对硝基苯胺为底物的发色底物法检测DPP-4活性.结果表明,GMP酶解物的DPP-4抑制效果优于GMP本身,并且随酶解时间的延长酶解物DPP-4抑制作用逐渐增加,其中GMP木瓜蛋白酶解物对DPP-4抑制效果最好,GMP木瓜蛋白酶酶解物作为DPP-4抑制剂具有潜在应用价值.     

γ-射线辐照预处理对酶解魔芋葡甘聚糖体内外抗肿瘤活性的影响

为研究60Coγ-射线辐照预处理对酶解魔芋葡甘聚糖片段体内、外抗肿瘤活性的影响,将魔芋精粉经60Coγ-射线辐照后加β-甘露聚糖酶酶解(KF2),与未辐照预处理的酶解物(KF1)通过体内、外抑瘤实验,研究KF1、KF2对Hela细胞体外生长的抑制作用及对EAC腹水癌小鼠的体内抑瘤率、存活期、脾脏指数、胸腺指数、腹腔巨噬细胞活性的影响.结果表明:γ-射线辐照预处理使KGM酶解更彻底;随着KF1、KF2浓度及培养时间的增加,He-la细胞存活率逐渐降低,且KF2作用高于KF1;KF1、KF2对EAC腹水癌小鼠脏器指数及腹腔吞噬细胞活性均有不同程度的增强作用,移植性实体瘤抑瘤率增大、且60Coγ射线辐照预处理过的KF2各项指标均高于KF1,表明60Coγ射线辐照预处理增强了KGM酶解产物的抗肿瘤活性.     

镉、铜污染对河蚬过氧化氢酶活性的影响

采用静态染毒法,设置50、100、150 μg/L 3个浓度组,研究镉、铜以及镉 铜的联合作用24 h、48 h对河蚬过氧化氢酶(Catalase, (CAT))活性的影响,探讨以河蚬过氧化氢酶活性作为重金属镉、铜污染生物标记的可能性.结果显示:CAT活性的变化灵敏,且与污染物质浓度存在剂量-效应的相关关系,50～150 μg/L的单独Cd、Cu作用24 h、48 h使河蚬过氧化氢酶的活性产生了从上升到显著下降的效应,而Cd Cu的联合处理则是在50～100 μg/L浓度间使过氧化氢酶的活性下降,且150 μg/L浓度组对CAT活性产生了极显著的抑制.结果表明, CAT活性的变化可以作为监测金属镉、铜污染的有效生物标记.