血红蛋白交联条件优化及其携氧性能

纯化牛血获得的高纯度血红蛋白,在不同条件下进行戊二醛交联反应得到聚合牛血红蛋白,应用SDS-PAGE对其分子量分布进行分析比较。利用葡萄糖-葡萄糖氧化酶系统和黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶系统,研究氧化应激状态下过氧化氢和超氧化物对血红蛋白携氧性能的影响。结果表明,戊二醛交联血红蛋白反应的最佳条件为:溶液总体系5 m L、血红蛋白质量浓度82 g/L、磷酸钾缓冲液(p H=7.4)的浓度为0.1 mol/L、0.47 mol/L的赖氨酸0.2 m L、0.25 mol/L的冷戊二醛1.2 m L及在4℃下150 r/min摇荡24 h;葡萄糖-葡萄糖氧化酶和黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶的存在会使血红蛋白被氧化,体系中存在抗氧化剂超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT),会有效减弱血红蛋白氧化程度,提高其携氧性能。     

新型定性-定量测定血红蛋白氧载体的检测系统III.建立抗人源性氧载体类兴奋剂检测系统的初探

目的构建一种高通量蛋白芯片检测人血清中血红蛋白氧载体类兴奋剂的方法。方法用自制SEC微柱快速地将人血清中血红蛋白聚合体（氧载体）和血红蛋白单体（另外加入的内标）分离,逐滴收集洗脱液作为探针,点样结合在蛋白质基片上,与其相对应的荧光标记的多克隆抗体进行杂交,扫描芯片荧光强度检测人血红蛋白氧载体。结果自制SEC微柱能够将戊二醛聚合的人血红蛋白聚合体和单体有效分离,在蛋白芯片的检测中能较好地检测出人血清中1．5％的聚合体人血红蛋白氧载体。结论以SEC技术和蛋白芯片相结合是一种高通量、灵敏、重现性好的检测人血清中的以人血红蛋白为基质氧载体类兴奋剂新方法。     

新型定性-定量测定血红蛋白氧载体的检测系统Ⅲ.建立抗人源性氧载体类兴奋剂检测系统的初探

目的 构建一种高通量蛋白芯片检测人血清中血红蛋白氧栽体类兴奋剂的方法.方法 用自制SEC微柱快速地将人血清中血红蛋白聚合体(氧栽体)和血红蛋白单体(另外加入的内标)分离,逐滴收集洗脱液作为探针,点样结合在蛋白质基片上,与其相对应的荧光标记的多克隆抗体进行杂交,扫描芯片荧光强度检测人血红蛋白氧栽体.结果 自制SEC微柱能够将戊二醛聚合的人血红蛋白聚合体和单体有效分离,在蛋白芯片的检测中能较好地检测出人血清中1.5%的聚合体人血红蛋白氧栽体.结论 以SEC技术和蛋白芯片相结合是一种高通量、灵敏、重现性好的检测人血清中的以人血红蛋白为基质氧栽体类兴奋剂新方法.     

戊二醛聚合猪血红蛋白免疫学特性分析

目的 阐明加弗氏佐荆条件下,戊二醛聚合猪血红蛋白(glutaradehyde polymerized porcine hemoglobin,pPolyHb)对不同种类动物的免疫原性,初步探讨pPolyHb与人、牛血红蛋白的抗原决定簇的异同.方法 在加弗氏佐剂的条件下,pPolyHb多次皮下免疫小鼠、大鼠和兔子.间接ELISA法检测抗血清IgG滴度;免疫印迹法分别检测小鼠、大鼠和兔子抗pPolyHb抗体与猪、牛、人、小鼠、大鼠、兔子、pPolyHb和戊二醛聚合牛血红蛋白之间的交叉反应.结果 在加弗氏佐剂的条件下,pPolyHb能够刺激动物产生较高滴度的IgG,不同种类的动物产生IgG滴度不同;小鼠、大鼠和兔子抗pPolyHb抗体与不同来源的血红蛋白之间的交叉反应有明显的差异.结论 在有弗氏佐剂的条件下,pPolyHb有较强的免疫原性.但是,对不同种类动物免疫刺激的强弱不同;对不同种类的动物,pPolyHb刺激抗体产生的抗原决定簇可能大部分相同,但也有部分不同,由此产生的抗体也不同;pPolyHb与人和牛血红蛋白均有一些相似的抗原决定簇,但也有一些相互独立的抗原决定簇.     

脐血血红蛋白体外氧化还原研究

研究无基质脐血血红蛋白体外条件下的氧化和还原反应,在血红蛋白溶液中加入一定量的氧化剂和还原剂,测定氧饱和度和高铁血红蛋白含量随时间的变化。结果表明:自氧化时,4 h内高铁血红蛋白含量由5%升高至35%;叠氮钠催化氧化时,4 h内高铁血红蛋白含量由5%升高至65%;加入VC后,3 h内高铁血红蛋白含量由45%降至5%左右。无基质血红蛋白在体外条件极易被氧化;VC的加入能够有效抑制高铁血红蛋白含量,且其对血红蛋白溶液的还原顺序为:先清除溶解氧,再清除结合氧,最后还原高铁血红蛋白;同时加入氮氧自由基,并不能加速VC对高铁血红蛋白的还原,但明显缩短了还原时间。     

壳聚糖-海藻酸钠包被猪血红蛋白微囊的制备

采用乳化凝胶法研制壳聚糖-海藻酸钠包被的猪血红蛋白微囊.结果表明:壳聚糖-海藻酸钠-血红蛋白微囊具有较佳的形态和较小的粒径,平均粒径1μm,且具有相对较窄的高斯分布;血红蛋白在微囊中包埋率超过90%,从微囊中持续释放时间达1个月以上.壳聚糖-海藻酸钠-血红蛋白微囊有望成为可供静脉注射用的具有缓释作用的人工携氧治疗剂.     

广东省异常血红蛋白研究Ⅺ 三例Hb G Honolulu的一级结构与功能研究

用快原子轰击抽谱技术测定3例Hb G Honolulu(α_2~(30Gly→Gln)β_2)的一级结构。经氧平衡曲线测定,发现此异常血红蛋白氧亲和力与Hb A的相同,2,3-DPG对它的效应亦正常。     

α—猪去氧胆酸薄层取样方法的改进

α-去氧胆酸是中药原料猪胆膏中含量最高的主要有效成份,为猪胆膏质控的主要指标。我们用薄层—紫外分光光度法作为质控方法测定其有效成分的含量。但在实践中发现用经典方法进行薄层取样存在取样不完全的缺点,为此,我们进行了改进,取得了满意效果。现报道如下: 一、仪器和试剂 1.仪器:采用UV—754分光光度计(上海第三分析仪器厂)。 2.试剂:α-猪去氧胆酸标准品(北京药检所)、硅胶G(青岛海洋化工厂),所用试剂溶剂均分析纯。     

利用脉冲激光技术研究哺乳动物碳氧血红蛋白光解量子产率

本文利用脉冲光解法测量了哺乳动物碳氧血红蛋白的光解反应的量子产率.脉冲光解法是利用一束波长为532 nm、脉冲宽度为8 ns、重复频率为10 Hz的脉冲激光照射碳氧血红蛋白溶液,使其发生光解反应.考虑到碳氧血红蛋白溶液和其光解产物脱氧血红蛋白的光吸收系数不同,可利用另一束波长为432 nm的连续激光检测溶液在光解前、后...     

猪胆汁酸组份的药理作用研究(Ⅰ)——猪胆汁酸的抑菌作用

本文报导了从猪胆汁中分离出的猪胆酸、猪去氧胆酸及其组合物对部分革兰氏阳性菌具有明显的抑制作用,为开拓猪胆汁酸的应用提出了依据。     

不同品种猪生长激素基因的PCR-RFLP分析

采用PCR-RFLPs技术,对临高猪、玉山黑猪、蓝塘猪及国外猪种的生长激素基因-119～＋486区域共605 bp片段的扩增产物用Apa I限制性内切酶检测酶切位点的多态性.结果显示：Apa I酶切时,四个品种的猪都出现了3种基因型（AA、BB和AB）,等位基因B的频率以蓝塘猪最高,等位基因A的频率以玉山黑猪最高,四个猪种间基因型频率、等位基因频率的差异不显著（P＆gt;0.05）.     

咪唑-血红蛋白显色体系的研究及应用

建立了一种非氰化物测定血红蛋白的新方法。该方法用季铵盐型表面活性剂破坏红细胞膜，释放出血红蛋白，该血红蛋白与咪唑结合，形成的血红蛋白衍生物在535nm波长处有最在吸收，且在4h内稳定，可用于血红蛋白的测定。研究确定了该方法测定血红蛋白的条件，初步探讨了反应机理。通过对临床新鲜血样中血红蛋白的检测，并与氰化法所测结果对比，两者结果无显著性差异。采用该方法进行血红蛋白的测定，简便实用、结果准确、无毒无污染，具有广阔的应用前景。     

一种高灵敏度测定血红蛋白的化学发光分析方法

研究了在碱性介质和阳离子表面活性剂CTMAB存在下,牛血红蛋白催化鲁米诺-铁氰化钾的化学发光行为和化学发光反应的条件,提出一种流动注射-化学发光法测定牛血红蛋白的新方法.该方法测定牛血红蛋白的线性范围为5.18×10-10~1.29×10-6mol/L,r2=0.998 5;检出限(RSN=3)为1.2×10-10mol/L;回收率为(100±10)%;dRSD≤5%(n=6).     

拉曼光谱对血红蛋白浓度的定量分析

研究探讨了生物样品-血红蛋白的拉曼光谱定量测定方法,分别探讨了血红蛋白的4个特征谱峰,1 356 cm-1、1 471 cm-1、1 546 cm-1、1 608 cm-1用于定量分析的可行性和定量结果的精确性,提出了在确保血红蛋白完全处于去氧态或氧合态时选取ν4谱线如1 356 cm-1谱带做定量分析的精确度最高,其相对误差仅为0.058 7,从而使对生物样品进行快速、准确、无损的定量测定成为可能,拓展了拉曼光谱的应用领域.     

血红蛋白A1C的基本特性研究

研究HbA1C形成过程,结果表明该过程遵守化学热动力学一般规律:pH影响第一步反应,最适pH为8.0;温度、反应时间影响第二步反应,最适温度为40℃,饱和反应时间是100 h左右;体外诱导HbA1C形成,葡萄糖浓度可达5%,同时对某些有机物对HbA1C形成的影响也进行了讨论.研究发现HbA1C氧解离曲线左移及"S"形弧度变小.制定了诱导提高及纯化HbA1C的方案,纯化的HbA1C相对Hb回收率是22%,跟体内自然形成的HbA1C有相同的免疫原性.     

Analysis of porcine MHC expression profile

The porcine major histocompatibility complex (MHC, also named swine leukocyte antigen, SLA) is associated not only with immune responsibility and disease susceptibility, but also with some reproductive and productive traits such as growth rate and carcass composition. As yet systematical research on SLA expression profile is not reported. In order to illustrate SLA expression comprehensively and deepen our understanding of its function, we outlined the expression profile of SLA in 51 tissues of Landrace by analyzing a large amount of ESTs produced by ““Sino-Danish Porcine Genome Project““. In addition, we also compared the expression profile of SLA in several tissues from different development stages and from another breed (Erhualian). The result shows: (i) classical SLA genes are highly expressed in immune tissues and middle part of intestine; (ii) although SLA-3 is an SLA la gene, its expression abundance and pattern are quite different from those of the other two SLA la genes. The same phenomenon is seen in HLA-C expression, suggesting that the two genes may function similarly and undergo convergent evolution; (iii) except in jejunum, the antigen presenting genes are more highly expressed in breed Erhualian than in Landrace. The difference might associate with the higher resistance to bad conditions (including pathogens) of Erhualian and higher growth rates of Landrace.     

动物血红蛋白结构与功能的研究进展

动物Hb除运输和储存氧气外还具有调节pH值、控制一氧化氮水平、参与免疫反应、结合并运输硫化物等多种生物学功能,是研究呼吸蛋白多重生物学功能的理想分子,已经引起了学者们的浓厚兴趣。结合研究成果并综合本领域的大量学术文献,对动物Hb的分子结构、生物学功能及其研究进展进行综述。