基于DNA探针和FISH技术对两种有害浮游植物的检测研究

针对两种典型的有害浮游植物微小原甲藻和Takayama pulchellum(T.pulchellum)各设计了4条特异性探针,并采用基于PCR管载体的荧光原位杂交检测方法检测了这些探针的标记效果。实验结果表明,针对微小原甲藻和T.pulchellum核糖体大、小亚基DNA(LSU和SSU rDNA)的序列信息所设计的8条荧光标记探针均能够特异性地识别这些目标藻。各探针的标记效果有一定差异,经过标记的目标藻细胞在单种和自然水样混合样品中均可以通过荧光显微镜进行识别和区分。针对微小原甲藻和T.pulchellum的荧光原位杂交检测方法的建立将有助于对样品中这些目标藻进行快速准确地检测和监测。     

抗人PD-1高亲和力抗血清的制备及其在PD-1免疫印迹分析中的应用

利用纯化的可溶性人PD-1胞外域(sPD-1)蛋白为免疫原免疫小鼠,获得抗血清.免疫印迹显示该抗血清与原核表达的sPD-1有特异性反应,但与某些菌体蛋白存在交叉反应.经菌体蛋白吸附法处理后,交叉反应明显减弱.以商业化抗人PD-1抗体和小鼠sPD-1抗血清分析经亲和层析富集的活化的Jurkat T细胞表达的PD-1,只有自制的抗血清鉴定到特异反应条带,其表观分子质量为49 ku.     

烟草悬浮细胞细胞核及核骨架中存在有肌动蛋白和肌球蛋白的证据

自烟草悬浮培养细胞中分离出细胞核,提取核总蛋白后,用DNase Ⅰ消化去除核酸和2M NaCl抽提后制备成细胞核骨架.以抗β-actin的抗体作一抗,辣根过氧化物酶标记(HRP)的羊抗兔抗体作二抗进行免疫印迹.结果证实,在细胞质、细胞核与核骨架中均存在与肌动蛋白抗体呈阳性反应的抗原.以抗myosin Ⅰβ抗体作一抗,辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗兔抗体作二抗进行免疫印迹.也证实了细胞核中存在与肌球蛋白抗体呈阳性反应的抗原.上述结果证明,肌动蛋白和肌球蛋白是烟草悬浮细胞细胞核及核骨架的组成成分.来源于老鼠纤维原细胞细胞核中的肌球蛋白Ⅰ存在于烟草细胞核中也表明细胞核中的肌动蛋白和肌球蛋白在生物进化过程中是相当保守的.     

甲肝病毒单克隆抗体的研制与应用

本研究成功制备了抗甲肝病毒 (HAV)McAb ,为甲肝研究和诊断提供了大量高效价标准化抗体 .用细胞培养的NJ 3株HAV免疫Balb/c小鼠 ,经细胞融合技术、IFA筛选和有限稀释克隆 ,建立了 5株能稳定分泌抗HAVMcAb的杂交瘤细胞 .经鉴定 ,其上清和腹水的抗体效价分别为 0 5× 10 2 ～ 1× 10 3及 1× 10 3～ 2× 10 5.用免疫印迹法和间接ELISA分析 ,这 5株抗体分别能与HAV的 3个抗原位点结合 .在HAAg检测中 ,McAb的应用简化了操作步骤     

兔抗Myosin Ⅹ多克隆抗体的制备及初步应用

为制备兔抗肌球蛋白Ⅹ(myosinⅩ,MyoⅩ)多克隆抗体,合成了含有MyoⅩN端1 000～1 021个氨基酸的多肽,将纯化后的多肽与钥孔戚血蓝蛋白(keyhole limpethemocyanin,KLH)进行交联;通过背部皮下免疫新西兰大白兔获得免疫血清,并通过ELISA、免疫印迹、免疫荧光等分析对免疫血清进行了初步的验证.结果表明:经过4次免疫后可获得免疫血清,ELISA检测表明抗体终效价达到1∶51 200,抗原吸附实验进一步证明了此多克隆抗体的特异性.利用获得的多克隆抗体检测了多种组织中MyoⅩ的表达,发现兔抗MyoⅩ多克隆抗体可特异性识别多种组织中的MyoⅩ.免疫荧光染色表明该抗体可以显示MyoⅩ在COS-7细胞、NLT细胞和神经元中的分布.     

兔抗人多发性骨髓瘤细胞多克隆抗体的制备与鉴定

制备人多发性骨髓瘤全细胞兔多克隆抗体。用人多发性骨髓瘤细胞系ARH-77全细胞和福氏完全佐剂通过背部皮内多点注射首次免疫新西兰大白兔,第14 d用ARH-77全细胞和福氏不完全佐剂同样剂量加强免疫,第28 d和38 d时再次免疫。第45 d颈动脉采血80 mL,4℃静置过夜,收集血清。然后采用亲和层析系统纯化血清中的多克隆抗体。用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测纯化多克隆抗体的效价;免疫印迹法和荧光免疫细胞化学检测纯化多克隆抗体的特异性。结果:ELISA检测多克隆抗体滴度为1∶20 000,免疫印迹检测结果显示该抗体具有较高特异性,荧光免疫细胞化学检测多克隆抗体能够有效的结合细胞表面抗原。实验获得了高效价的特异性的兔抗人骨髓瘤细胞多克隆抗体,为进一步研究多发性骨髓瘤诊断和治疗奠定了基础。     

三硫二苄基通过抑制JAK/STAT3信号通路抑制A549细胞的增殖和转移

目的 探讨三硫二苄基(DTS)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系A549细胞增殖、转移和侵袭的抑制作用及其机制。方法 克隆形成和CCK-8检测DTS对A549细胞增殖的影响;Annexin V-FITC/PI双染色法与免疫印迹检测DTS对A549细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bax, Bcl-2表达的影响;划痕实验和Transwell侵袭实验检测DTS对A549细胞迁移和侵袭的影响;免疫印迹检测DTS对A549细胞上皮间质转化(EMT)和JAK/STAT3信号通路相关蛋白表达的影响;利用IL-6可以激活STAT3信号通路,利用划痕实验,Transwell侵袭实验和Western blot免疫印迹分析验证DTS对A549细胞增殖和转移的作用依赖JAK/STAT3信号通路。结果 我们的结果显示DTS能抑制A549细胞增殖、迁移、侵袭并诱导其凋亡;DTS诱导促凋亡基因Bax的表达,降低抗凋亡基因Bcl-2的表达;DTS减弱EMT转化,且与JAK和STAT3磷酸化相关;IL-6通过激活STAT3信号通路可以挽救A549细胞的迁移能力。结论 DTS具有干预JAK/STAT3信号通路,从而抑制A549细胞...     

肝抗原自身抗体的检测在自身免疫性肝炎诊断中的临床意义

目的 检测自身免疫性肝炎(AIH)患者血清中抗可溶性肝抗原/肝胰抗原(SLA/LP)、抗平滑肌抗体(SMA)、抗肝肾微粒体(LKM-1)、抗肝细胞溶质抗原(LC-1)及抗线粒体抗体(AMA-M2),并对其阳性率进行比较,为临床诊断AIH筛选和确立相应的实验辅助诊断指标.方法 采用免疫荧光法检测抗SMA,免疫印迹法检测抗SLA/LC、抗AMA-M2、抗LKM-1及抗LC-1.结果 自身免疫性肝炎(AIH)组:抗SLA/LP抗体阳性率为42.9%,抗SMA阳性率为14.3%,抗LKM-1、抗LC-1及AMA-M2均为阴性.原发性胆汁性肝硬化(PBC)组:抗线粒体抗体(AMA-M2)阳性率100%,其他各项检测均阴性.对照组全部阴性.结论 抗SLA/LP抗体在AIH相关抗体中有较高的诊断价值,可作为AIH新的血清学指标.     

解锁细胞免疫,点燃抗癌曙光——2018年度诺贝尔生理学或医学奖成果简析

 免疫检查点是指能调节机体免疫细胞活化和免疫耐受的共刺激和共抑制信号分子，其中共抑制信号分子会降低T细胞的抗肿瘤活性，造成肿瘤的免疫逃逸。美国科学家JamesP.Allison和日本科学家Tasuku Honjo分别发现了两个重要的共抑制信号分子--CTLA-4和PD-1，验证了针对二者的抑制剂抗体产生的抗肿瘤活性，为癌症治疗提供了新思路、新手段，并因此获得2018年的诺贝尔生理学或医学奖。介绍了获奖者及其研究经历，解读了肿瘤与T细胞免疫的机理，分析了免疫检查点药物发展的现状，展望了免疫检查点研究的方向。     

拟穴青蟹GnRH-R的免疫识别

促性腺激素释放激素(GnRH)及其受体(GnRH-R)对生殖具有重要的调控作用.迄今无脊椎动物GnRH及GnRH-R的研究尚少.本研究采用兔抗人GnRH-R、兔抗果蝇GnRH-R和兔抗海鞘GnRH-R的抗体,应用免疫印迹和免疫共沉淀技术对拟穴青蟹(Scyllaparamamosain)GnRH-R进行了免疫识别,所得结果如下:1)经免疫印迹检测,拟穴青蟹脑、胸神经团、视神经节和精巢中共有的免疫阳性条带分子质量为45~55 ku.脑和胸神经团中另有一条36 ku条带;在精巢中,兔抗人GnRH-R和兔抗果蝇GnRH-R抗体只有一条28 ku条带,而兔抗海鞘GnRH-R抗体显示有28,36和30 ku的条带.2)利用免疫共沉淀技术,分离出与GnRH-R抗体相结合的两种物质,分子质量分别为38.1和54.0 ku,分别与哺乳动物和非哺乳动物GnRH-R的分子质量接近.该发现提示拟穴青蟹体内存在GnRH-R,为深入了解甲壳动物生殖调控机理提供了理论依据.     

关于农业区划地图集中的统一协调问题

图集的统一协调,对图集质量有很大影响。本文是作者在编制北京市农业区划地图集的实践基础上,根据地图信息传输论的观点,对农业区划地图集的统一协调的内容及方法进行了探讨。试图总结编制这类图集的统一协调模式,以供读者编图时参考。     

民间法正义观的转型

研究了国家法的抽象正义观与民间法的情理正义观,认为西方国家法的抽象正义观与东方民间法的情理正义观存在实质的不同,原因在于思维方式、超验与经验传统、政治结构的差别。在现代法治理念下,传统民间法所代表的正义观将向混合正义观转型,西方法治所代表的国家法抽象正义观是其骨架。     

关于一维非自治时滞系统点态退化一例

给出了一维非自治时滞系统点态退化的一个例子,拓宽了该领域的研究。     

十二烷基苯硝化选择性的测定

利用对位异构体的对称性由核磁共振氢谱测定了工业十二烷基苯在硝硫混酸中的硝化选择性，发现一硝化产物中对位异构体的比例为７５％￣８０％。以月桂酸和苯为原料，经氯化、酰化和还原合成了正十二烷基苯。在同样条件下研究了正十二烷基苯的硝化，由核磁共振氢谱和气相色谱分析，发现一硝化产物中对位异构体的比例仅为６０％。根据空间位阻效应，对结果进行了讨论，并与甲苯，乙苯，异丙苯等短链烷基苯的硝化结果进行了比较。     

YBCO掺杂效应研究

介绍了YBCO掺杂的基础知识,总结了YBCO各个位置采用典型元素掺杂而导致的超导电性和结构的变化,阐述了掺杂对YBCO的重要影响,并简介了当前YBCO掺杂效应研究中的几个热点问题.     

A_5的一类12阶子群的构造

由于有限群的Lagrange定理的逆不成立,因此,n较大时要确定n次交代群An的所有子群或对An阶数的每一个正因数,确定是否存在这个阶数的子群是较困难的问题.文章通过对5-循环置换各次方幂的计算及其研究,构造出了A5的5个12阶子集,并证明了每一个子集都是A5的12阶子群,最后对A5的部分阶的子群做了总结.     

“真空的真空”的存在性问题

许多科学家包括诺贝尔奖获得者李政道教授都预言,真空是未来物理学的一个重要研究对象.十七世纪的伽利略时代人们曾讨论过"真空"是否存在的问题.当时的学术界分成两派,一派以帕斯卡为代表,认为真空存在,另一派以笛卡尔为代表,认为真空不存在,最后实验证明"真空存在派"正确.现代研究表明,真空并非一无所有,这样就产生了一个新的问题"排除了真空物质后的空间",即"真空的真空"是否存在.本文探讨了与"真真空"有关的问题,提出了一些观测实验方法,这些方法可以帮助我们最终解答"真真空"的存在性问题.     

高频机组基础振动检测分析

为了找出诱发高频机组基础不良振动的原因，从基础计算模型方面对基础激励与响应进行了分析，以两个高频机组基础为动测实例，经模态分析得出钢筋混凝土构架式基础竖向1阶振动与电机产生共振；应用功率谱法对动力机组及基础平台进行动测，得出平台异常响应频率66Hz为水泵工作频率，调整机器的工作频率可避开不良振源影响，达到明显的减振效果。由此而知，动力机器基础出现不良振动时，不可盲目改变结构的动力特性，应在机器不同工况比如：停机、起机及正常转速下，对机器及基础进行动测并对振动信号进行比较分析，以制定出行之有效的减振方法。     

圈幂补图的树宽

基于“前沿分支”的观点研究了圈幂补图的树宽，首先确定了它的树宽下界，又给出了达到此下界的标号，从而得到了它的树宽表达式。