Cu~(2+)、前体对红豆杉细胞生长及产生10-Deacetyl Baccatin的影响

目的:研究前体和Cu2+诱导子对云南红豆杉细胞生长和产生10-去乙酰巴卡亭Ⅲ的影响.方法:在培养12d后分别向培养基中添加不同浓度的乙酸钠、苯甲酸钠两种前体和CuSO4诱导子,经过培养对云南红豆杉细胞生长情况进行统计,用HPLC测定细胞中10-去乙酰巴卡亭Ⅲ的含量.结果:培养基中添加0.1mmol/L乙酸钠和0.1nunol/L苯钾酸钠,10-去乙酰巴卡亭Ⅲ含量是不添加时的1.8倍和2.8倍,含量分别为0.079 88%、0.08291%;B5培养基中添加0.1mg/L硫酸铜时,10-去乙酰巴卡亭Ⅲ含量是B5培养基标准含量的2.2倍.结论:确定了云南红豆杉细胞悬浮培养过程中B5培养基添加乙酸钠、苯甲酸钠和硫酸铜的最佳浓度,表明适宜浓度前体和Cu2+诱导子对10-去乙酰巴卡亭Ⅲ合成与释放有显著影响.     

高效液相色谱法测定云南红豆杉细胞培养物中10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ的含量

目的：建立云南红豆杉细胞培养物中10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ含量的测定方法。方法：样品经干燥研细后采用甲醇浸提、乙酸乙酯萃取,测定同一批细胞培养物中10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ含量,采用Spherisorb C185μm柱,流动相甲醇-乙腈-水（42∶13∶45）,流速1.0ml/min,检测波长为234nm。结果：云南红豆杉细胞培养物中10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ含量10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ含量为0.023 47%,平均回收率为100.6%,变异系数（RSD）为2.2%。结论：该方法能准确、快速测定云南红豆杉细胞培养物中10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ含量,为探讨10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ在细胞培养物中的代谢研究提供测定方法。     

生化诱导子对红法夫酵母生长和类胡萝卜素合成的影响

以贝壳状革耳菌(Panus conchatus)、杂色云芝(Coriolus Versicolor)制备真菌诱导子和硝酸铈、氯化镉制备化学诱导子,研究了其对红法夫酵母生长和类胡萝卜素合成的影响.结果表明:真菌诱导子对红法夫酵母菌体生长、总类胡萝卜素和虾青素合成有显著促进作用,对虾青素含量的影响并不显著,化学诱导子对生长略有抑制但能 促进类胡萝卜素尤其虾青素的大量合成.P.conchatus和C.Versicolor诱导子在添加量分别为30 mg/L和10 mg/L时生物量最高,分别比对照提高了69.81%和68.87%,P.conchatus、C.Versicolor、硝酸铈和氯化锅诱导子在添加量分别为30、10、0.16和0.12 mg/L时总类胡萝卜素产量最高,分别比对照提高了47.3%、26.2%和44.9%、52.3%.在最佳浓度(30 mg/L和10 mg/L)下P.conchatus和C.Versicolor诱导子使得虾青素产量分别比对照提高了67.9%和50.1%.对虾青素含量增加并不显著.在最佳浓度(0.16 mg/L和0.12 mg/L)下硝酸铈和氯化镉诱导子使得虾青素产量和含量分别比对照提高了73.8%、60.1%和77.4%、60.6%.     

稀土元素铈对大蒜幼苗生理活性及根尖细胞有丝分裂的影响

为了研究稀土元素铈对大蒜生长的影响,采用不同浓度的硝酸铈铵溶液作用于大蒜幼苗,观察和测量其根长、叶绿素和丙二醛含量以及根尖分生区细胞的有丝分裂情况.结果表明:1mg/L和10mg/L的硝酸铈铵溶液可以促进大蒜根的生长和叶绿素含量的增加,MDA的含量保持在较低水平;30 mg/L和50 mg/L的硝酸铈铵溶液会抑制大蒜根的生长和叶绿素含量的增加,MDA的含量也显著增加.高浓度硝酸铈铵溶液处理下,大蒜根尖细胞有丝分裂指数下降,畸变率升高,50 mg/L的硝酸铈铵会导致细胞有丝分裂中期和后期出现染色体粘连或断裂现象.由此可见,铈对于大蒜的生长存在低促高抑现象.     

从云南红豆杉细胞培养物中分离鉴定10-去乙酰巴卡亭Ⅲ

目的：从云南红豆杉（Taxus yunnanensis）细胞培养物中提取、分离和纯化10-去乙酰巴卡亭Ⅲ（10-deacetylbaccatinm,10-DABⅢ）。方法：采用固液分离、有机溶剂萃取、硅胶柱层析、重结晶等方法从细胞培养物中提取分离得到10-DABⅢ,并用波谱解析（1HNMR,13CNMR）对其结构进行了鉴定。结果：建立了从红豆杉细胞培养物中提取、分离和纯化10-DABⅢ的方法,证明与从天然红豆杉植物中得到的10—DABⅢ为同一化合物。结论：本方法简便、成本低,可用于红豆杉细胞培养物中10-DABⅢ的提取、分离。     

红豆杉细胞聚集体悬浮培养生产紫杉醇

建立了中国红豆杉(Taxuschinensis)细胞聚集体两步法悬浮培养生产紫杉醇的培养体系.红豆杉细胞于含LH1g/L,NAA0.1mg/L,2,4-D0.5mg/L及6-BA0.8mg/L的细胞聚集体形成的培养基中生长并形成聚集体,10d后转入生产培养,较大细胞聚集体的生物量比和紫杉醇产量分别较对照组提高了53.7%和82.1%;提高细胞聚集体的生物量比能显著增加紫杉醇产量.四种基本培养基中B5最适合诱导细胞聚集体的形成.生长培养12d后细胞悬浮培养物按1∶1(体积比)直接转入生产培养对细胞生长、细胞聚集体和紫杉醇形成最有利.在100μmol/L茉莉酸甲酯作为诱导子下本体系紫杉醇产量较对照组提高了一倍.     

稀土元素铈对豌豆种子萌发和根尖细胞有丝分裂的影响

为了寻求稀土元素铈对豌豆种子萌发的最佳作用浓度,采用不同质量浓度的硝酸铈铵溶液(0、1、10、25、50 mg/L)对豌豆种子进行浸种处理,测定种子发芽势、发芽率、发芽指数、活力指数、淀粉酶活性、相对电导率、丙二醛含量等,并对根尖进行切片,观察其染色体形态的变化.结果表明:1mg/L和10 mg/L的硝酸铈铵处理组中,豌豆种子的发芽势、发芽率、发芽指数、活力指数、淀粉酶活性和有丝分裂指数与对照组相比均有显著增加,种子相对电导率和丙二醛含量均少于对照组,10 mg/L的硝酸铈铵对豌豆种子萌发的促进作用最显著,同对照组的差异具有统计学意义(P0.05);而25 mg/L和50 mg/L的硝酸铈铵则抑制豌豆种子萌发,并导致根尖细胞染色体出现严重畸变.由此可见,铈对豌豆种子萌发和根尖细胞有丝分裂的影响为低浓度促进、高浓度抑制,10mg/L的硝酸铈铵对种子生长促进作用最明显.     

利用大肠杆菌工程菌生产2,3-二磷酸甘油酸的研究

通过基因工程的方法,将表达人源BPGM(bisphosphoglycerate mutase二磷酸甘油酸变位酶,E.C.2.7.5.4.)的质粒转化入大肠杆菌内,并进行培养条件的优化摸索,通过向培养基内加入葡萄糖使大肠杆菌大量发酵生产2,3-BPG(2,3-bisphosphoglycerate,2,3-二磷酸甘油酸).结果表明,当培养基中葡萄糖质量浓度为10 g/L,诱导时间为4 h,大肠杆菌工程菌表达的2,3-BPG含量最高.如果诱导后加入终质量分数为0.5%的Tween 80可以有效促进2,3-BPG分泌到培养基中.诱导后4 h添加新培养基,补加葡萄糖可以使2,3-BPG的产量提高1倍,达到7.5 mmol/L.     

两种红豆杉植物的愈伤组织培养及褐化抑制

在DPS系统均匀设计的基础上,对曼地亚红豆杉(Taxus m edia)和南方红豆杉(Taxus chinensisvar.mairei)的茎和叶进行愈伤组织培养,并探讨愈伤组织褐化的抑制.结果表明:两种植物茎形成愈伤组织能力均强于叶;同一种红豆杉植物愈伤组织诱导率与其直径存在一元线性回归关系;B5培养基添加0.3 mg/L 6-BA和2.9mg/L NAA(曼地亚红豆杉)、0.1 mg/L 6-BA和1.7 mg/L NAA(南方红豆杉)为最适合愈伤组织诱导和生长的培养基;南方红豆杉茎和叶产生愈伤组织平均时间分别少于曼地亚红豆杉茎和叶,其茎和叶愈伤组织平均直径显著大于曼地亚红豆杉;培养基添加0.01~0.2 mg/L抗坏血酸(Vc)能较为有效抑制愈伤组织褐化.     

稀土和氮源对南方红豆杉细胞生长及紫杉醇积累的影响

研究稀土和氮源在 B5培养基上对南方红豆杉细胞悬浮培养时的影响 .结果表明 :在所研究的 3种稀土元素中 ,1× 1 0 - 5mmol/L的 Yb Cl3,最利于细胞生长和紫杉醇的积累 ,紫杉醇含量达1 .3 46mg/L.氮源总浓度 (包括 NH4 +和 NO3- )为 2 7mmol/L,NH4 +和 NO3-比例为 2 /2 5 ,有利于南方红豆杉细胞生长和紫杉醇的合成 .     

曼地亚红豆杉愈伤组织诱导和继代培养研究

以曼地亚红豆杉(Taxusmedia var.hickss)嫩茎和嫩叶为外植体,进行愈伤组织诱导和继代培养研究。愈伤组织诱导以MS为基本培养基,继代培养以MS和B5为基本培养基,分别添加不同浓度和组合的细胞分裂素(6-BA、TDZ、KT、2-ip)、生长素类激素(NAA、2,4-D),和水解乳蛋白、活性碳等抗褐化试剂,考察其对愈伤组织诱导和继代培养的影响。结果表明,曼地亚红豆杉嫩茎有很强的分生能力,比嫩叶更易于诱导愈伤;在培养基MS TDZ0.002mg/L NAA1.0mg/L、MS TDZ0.002mg/L 2,4-D1.0mg/L、MS TDZ0.002mg/L NAA1.0mg/L 2,4-D1.0mg/L和MS KT1.0mg/L 2,4-D1.0mg/L NAA1.0mg/L上,嫩茎愈伤的诱导率达100%,生长迅速,品质良好,利于继代培养;培养基B5 KT1.0mg/L 2,4-D2.0mg/L NAA1.0mg/L适用于愈伤继代,每30d增殖倍数5.2倍;培养基中添加活性碳500mg/L、维生素C 1000mg/L或水解乳蛋白1000mg/L对抑制材料褐化有一定的效果。     

响应面法优化南方红豆杉中10-DAB提取工艺及其含量测定

为探究南方红豆杉（Taxus wallichiana var.mairei）中10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ（10-DAB）的最佳提取工艺,本研究以南方红豆杉中10-DAB含量为指标,以料液比、提取时间及超声温度为考察因素,采用单因素试验结合响应面法优化10-DAB的提取工艺,并采用超高效液相色谱（UPLC）法检测不同采摘部位、不同生长年限及不同采收时节的10-DAB含量差异。结果表明,南方红豆杉中10-DAB的最佳提取工艺条件为料液比1∶15（g/mL）、提取时间23 min、超声温度40℃,该工艺条件下10-DAB的含量为1.18%,与理论值相对偏差为0.42%。UPLC检测结果表明,南方红豆杉叶的10-DAB含量显著高于枝和树皮,且10-DAB全年累积含量受季节影响明显,10月份达到最高值。该研究可为南方红豆杉中10-DAB的提取利用提供参考依据。     

红豆杉中紫杉烷类化合物制备10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ

红豆杉是我国珍稀植物,含有多种紫杉烷类化合物．以紫杉醇提取过程中的废料作为原料,首次将含7-木糖基．10-去乙酰基紫杉醇、7-木糖基-10去乙酰基三尖杉宁碱和7-木糖基．10-去乙酰基紫杉醇C三种化合物的混合物通过氧化、水解反应脱去紫杉烷类化合物C-7位上的木糖基,然后进行肼解反应脱去C-13位上的侧链,最后利用重结晶纯化,得到10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ(10-DABⅢ)．实验过程中用液质联用(LC/MS/MS)鉴定反应产物,通过核磁共振确认得到10-DABⅢ．结果表明,含10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ母环结构的紫杉烷类化合物——尤其是含木糖基的紫杉烷类化合物是能够转化为10-DABⅢ的．由于10-DABⅢ是半合成紫杉醇的原料,这对于提高紫杉醇的产量,缓解紫杉醇资源短缺的现状有着积极的作用．     

cAMP在红曲霉蓝光诱导途径中的作用

蓝光可以调控红曲霉次生代谢以及孢子生殖,但具体调控机理还未知.为研究腺苷-3',5'-环化一磷酸(cAMP)在蓝光调控红曲霉产孢及桔霉素代谢的作用,在接种红曲霉MX1的YES发酵培养基中添加可诱导红曲霉细胞内cAMP生成的氨茶碱,观察桔霉素产量及红曲霉产孢变化.结果表明,当培养基中氨茶碱浓度为10 mmol/L时,桔霉素产量和分生孢子数分别提高了1.90倍和2.97倍.培养基中氨茶碱浓度为15 mmol/L时,红曲霉子囊孢子数提高了2.84倍,这与蓝光对红曲霉次生代谢及孢子产生调控结果一致.推测蓝光可能是通过cAMP信号途径对红曲霉的产孢及桔霉素进行代谢调控的.     

白芨愈伤组织诱导研究

目的:以白芨假鳞茎为培养材料,进行愈伤组织诱导和抗褐化研究.方法:使用兰科常用培养基MS,B5,KC分别作为基础培养基,应用正交试验方法设计生长调节剂配比.结果:当基础培养基为MS培养基时,并且6-BA1.5mg/L+2,4-D3.0mg/L时,愈伤组织诱导率最高,达73.3%.另外,添加活性炭可防止外植体褐化:活性炭含量为1.5g/L时,褐化率为44%,愈伤组织诱导效果最好;活性炭含量为3.0g/L时,褐化率最低为11%,愈伤组织诱导效果不好.结论:白芨愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+6-BA1.5 mg/L+2,4-D3.0mg/L+AC2 g/L.     

两种红豆杉离体细胞中紫杉醇含量的调节

以矮壮素、水杨酸和甘露醇为诱发子,研究了短叶红豆杉(Taxus brevifolia)和墨西哥红豆杉(Taxus globosa)离体细胞中紫杉醇含量的变化.实验结果表明:矮壮素、水杨酸和甘露醇不同程度地提高离体细胞中紫杉醇含量.短叶红豆杉的紫杉醇含量比墨西哥红豆杉的高,但诱发子诱导墨西哥红豆杉紫杉醇相对增加量大.0.5 mg*L-1水杨酸和0.5 mg·L-1矮壮素分别使短叶红豆杉和墨西哥红豆杉细胞中紫杉醇含量达到最高,分别是对照的1.8和15倍.还讨论了紫杉醇含量与愈伤组织生长的关系.     

酵母诱导子对肉苁蓉细胞悬浮培养影响的研究

目的:以酵母诱导子对肉苁蓉细胞悬浮培养及其抗氧化活性成分苯乙醇苷的合成动力学的影响进行研究.方法:从肉苁蓉种子诱导出愈伤组织,在MS培养基上进行细胞悬浮培养.首先考察肉苁蓉细胞生长和苯乙醇苷合成的动力学,在此基础上就酵母诱导子对细胞生长和苯乙醇苷合成的影响进行研究.结果:肉苁蓉悬浮细胞培养经过三天的延滞期后进入对数生长期,21天后细胞生长进入稳定期,最大生物量和苯乙醇苷产量分别达到8.03g DW/L和97 mg/L.在对数生长期后期,即培养的第18天加入0.8 mL/瓶浓度的酵母诱导子,诱导三天的效果最好,苯乙醇苷的最高产量为237.7 mg/L,为对照的239%.结论:合适浓度的酵母诱导子不但能够有效提高肉苁蓉细胞悬浮培养液中的苯乙醇苷含量,同时对细胞生长也具有促进作用.     

黄腐酸高产菌株的培养条件优化研究

对发酵蔗渣产黄腐酸(FA)的高产菌株-枯草芽孢杆菌的培养基配方及培养条件进行优化研究.获得的优化培养基配方为:可溶性淀粉、蛋白胨、磷酸氢二钾和硫酸镁的添加量分别为12.50、12.50、0.25、0.50 g·L~(-1);优化的培养条件为:pH 7.0、温度37℃、装液量20 m L/250 m L、转速130 r·min~(-1)、接种量5%(体积分数).在该优化的培养基及培养条件下,枯草芽孢杆菌培养12 h后的细胞生物量达2.280×10~9cfu·m L~(-1),较优化前提高了77.9倍.采用优化前后的条件培养菌种进行发酵产黄腐酸实验,结果优化后的发酵产品中FA含量为26.36%(质量分数),细胞生物量为1.09×10~9cfu·g~(-1),比优化前分别提高了13.9%和2.3倍.     

红豆杉中巴卡亭类化合物的ESI/MS及APCI/MS比较研究

采用分析型反相高效液相色谱和两种大气压电离质谱联用技术(LC／API／MS)：电喷雾电离质谱(ESI／MS)和大气压化学电离质谱(APCI/MS),研究了红豆杉中含有的10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ、巴卡亭Ⅳ、1-去羟基巴卡亭Ⅳ、1-去羟基巴卡亭Ⅵ等巴卡亭类化合物的质谱特征．这些化合物在APCI正离子全范围扫描中主要形成[M H3O]^ ,在ESI正离子全范围扫描中主要形成[M Na]^ 离子,同时都会产生与结构相关的碎片离子．另外还研究了这些化合物相对质谱信号强度和相对色谱保留时间之间的关系,发现在ESI中,两者之间有很好的线性关系,而在APCI有相同的变化趋势．     

Ca2+和K+对西施舌幼虫附着变态的诱导

对Ca2 和K 诱导西施舌(Coelomactra antiquata)幼虫附着变态的效果进行了研究.结果表明:Ca2 添加浓度为20 mmol/L时诱导效果较为理想,变态率、附着率分别为42.8%、86.1%;K 添加浓度为10 mmol/L时,幼虫变态率、附着率分别为33.5%、83.7%.Ca2 诱导西施舌幼虫附着变态的效果优于K .