小鼠早期胚胎的全胚原位杂交技术

目的:探索一种适合于早期胚胎基因表达型检测的全胚原位杂交技术.方法:收集小鼠囊胚、固定;制备VASP、IL1R2基因特异性地高辛标记的cRNA探针;对囊胚进行杂交前处理、全胚原位杂交、抗体处理、显色以及显色后处理与镜检.结果:VASP、IL1R2特异性表达在囊胚的内细胞团细胞和滋养层细胞中.结论:小鼠早期胚胎全胚原位杂交技术适用于早期胚胎基因时空表达型的检测.     

地高辛标记cRNA探针原位杂交检测大鼠脑NMDAR—L mRNA

采用地高辛（Ｄｉｇｏｘｉｎ Ｄｉｇ）标记神经递质受体ＮＭＤＡＲ－Ｌ ｃＲＮＡ探针技术进行原位杂交，研究了Ｗｉｓｔａｒ新生大鼠脑神经细胞ＮＭＤＡＲ－Ｌ的基因表达。光学显微镜观察结果显示，大脑皮层、海马等区有明显的ＮＭＤＡＲ－Ｌ ｍＲＮＡ表达，胞浆着蓝色，胞核不着色，背景浅谈，反差显著。实验结果表明地高辛标记ｃＲＮＡ探针能快速、准确地检测出ＮＭＤＡＲ－Ｌ ｍＲＮＡ，为进一步研究这一拟受体在脑中表达和分     

桂枝浸出物对小鼠巨噬细胞内α-TNF基因表达的影响

目的：检测小鼠应用桂枝浸出物后腹腔巨噬细胞内TNFα-mRNA含量的变化。方法：雌雄小鼠随机分组，口服给药后制备巨噬细胞涂片。克隆人TNF－DNA的PGEM-1质料转化EcoliJM103，选择培养扩增。随机引物法制备地高辛标记的探针，利用原位杂交技术检测巨噬细胞内TNFα-mRNA的表达。结果：抗肿瘤中草药桂枝等浸出物可增强小鼠腹腔巨噬细胞内TNFα－mRAN－mRAN表达。结论：分子生物学的方法与手段可用于揭示抗肿瘤中草药的作用机理。     

用双探针原位杂交法检测常见肝病组织中输液传染性病毒DNA

目的：建立肝组织输液传染性病毒DNA(TTVDNA)的原位杂交检测技术，探讨TTVDNA在肝组织中的分布。方法：采用PCR扩增法，分别合成地高辛标记的Gla、G2b两种亚型的双链TTVDNA探针。同时应用两型探针对22例血清学检查无甲-庚型肝炎病毒感染的肝病患者肝组织TTVDNA进行原位杂交检测，并将检测结果与巢式PCR法检测配对血清TTVDNA的结果进行比较。结果：原位杂交阳性信号主要定位于肝细胞核，少数位于胞浆。22例肝病患者肝组织标本中TTVDNA原位杂交阳性率68.2％（15/22），其中慢性肝炎、肝硬化、肝细胞癌患者中原位杂交阳性率83.3％（15/18），4例肝破裂、肝良性肿瘤患者TTVDNA原位杂交检测皆为阴性。配对血清TTVDNA阳性率63.6％（14/22）。血清与肝组织TTVDNA检测符合率86.4％（19/22）。结论：双探针原位杂交检测具有较高的特异性和灵敏性，有助于肝病病因的分析。TTVDNA在慢性肝炎、肝硬化、肝细胞癌的肝组织中检出率较高，提示TTV可能与这些肝病有关。     

地高辛标记物及其应用

本文介绍了一种新型化合物—地高辛配基-11dUTP的化学合成及其应用。这种通过地高辛配基标记的脱氧尿嘧啶核苷三磷酸(Dig-dUTP),随机引物插入结合而使DNA被标记,然后用免疫酶化学检测等新技术,测定靶DNA,其灵敏度可以和同位素标记探针媲美,因此,有广阔的应用前景。     

用原位PCR方法检测培养细胞中的单拷贝SRY基因

以原位ＰＣＲ方法在培养的ＨＩＣＭＡ细胞中进行了Ｙ染色体上单拷贝ＳＲＹ基因的原位扩谱，并使用ＰＣＲ方法制备的地高辛标记探针原位检测了所扩增的片段，比较研究表明，原位ＰＣＲ法较之直接的原位杂交法，其灵敏度提高５倍以上。     

小麦抗病种质贵农775的细胞学分析

利用基因组原位杂交和C-带分析,对抗病种质贵农775进行细胞学观察.以地高辛(Digoxigenin-11-dUTP)标记的簇毛麦基因组DNA为探针的基因组原位杂交结果表明:贵农775的1对染色体短臂带有来自簇毛麦的遗传物质;C-带分析可知带有簇毛麦遗传物质的染色体为6VS/6AL的易位染色体.该研究首次报道了簇毛麦是贵农775形成过程中的原始亲本之一,贵农775的抗白粉病性与这对易位染色体有关.     

p21基因在小鼠胚胎发育过程中的表达

以E9日龄至E14日龄昆明种正常小鼠胚胎为材料,利用质粒扩增的、地高辛标记的基因探针在组织切片上进行DNA-mRNA分子原位杂交,研究了p21基因在小鼠胚胎发育过程中的表达.结果表明:p21基因从E10日开始参与小鼠胚胎发育,其表达特异性随着胚胎发育进程逐渐增强,与它在细胞周期中的负调控作用相一致.p21基因表达强度较稳定,与其mRNA稳定有关.     

LA-PCR法制备赤麂Y2涂染探针与原位杂交

应用显微切割技术获得赤麂的Y2单条染色体,经LA-PCR（linker-adaptor PCR）扩增后用DIG标记制备探针,然后用Southern blot杂交法对所制备的探针进行验证并对毛冠鹿的中期核型进行原位杂交.结果表明：用该法制备的涂染探针是成功的,原位杂交也获得了阳性结果,可以初步验证毛冠鹿中的Y染色体.     

地高辛标记cDNA探针检测植物谷胱甘肽过氧化物酶基因表达及方法研究

本文利用RT-PCR和PCR技术制备地高辛标记的谷胱甘肽过氧化物酶(ATGPX3)cDNA探针,分别进行DNA和RNA斑点和印迹杂交分析.通过调整杂交液组分的浓度和增加10%硫酸葡聚糖的方法,改进杂交反应.实验结果表明,改良的方法不仅提高了杂交效率,而且明显检测到RNA杂交印迹反应.另外,利用地高辛标记cDNA探针技术也检测到了植物激素ABA诱导的ATGPX3基因的表达,同时证明了该方法可以用来检测植物基因的表达.     

P16基因在小鼠胚胎发育过程中的表达

以E9 d龄至E14 d龄昆明种正常小鼠胚胎为材料，利用质粒扩增的、地高辛标记的基因探针在组织切片上进行DNA-mRNA分子原位杂交，研究了p16基因在小鼠胚胎发育过程中的表达.结果表明：p16基因不参与E9和E10 d胚胎发育中的器官原基形成，参与器官的进一步分化成熟过程，这些器官主要有眼、脑、心、肺、脊柱和面颌骨，肝组织的发育与其无关；不同的器官有不同的细胞周期调控机制.     

细胞程序性死亡检测试剂盒的研制及其应用

该研究建立的细胞凋亡检测试剂盒,以地高辛-dUTP和未端脱氧转移酶原位标记DNA断裂来检测凋亡细胞,在样品固定、标记反应体系和信号检测步骤等方面有一定的特色.应用试剂盒对缺氧缺血脑损伤引起的细胞凋亡以及抗氧化剂的保护作用进行了探讨,取得了较有价值的结果.     

绵羊皮肤mRNA差异显示结果的Northern印记初步分析

利用Northern印记技术,对绵羊不同部位皮肤mRNA差异显示结果进行分析.所选取的两条差异条带以地高辛标记,与绵羊不同部位皮肤总RNA进行杂交,结果有1条为阳性差异条带.     

荧光原位杂交技术研究现状

本文阐述了荧光原位杂交技术的基本原理和程序,并对20多年来荧光原位杂交技术的发展做了介绍。总结了原位杂交显带技术,染色体涂染技术等五种FISH衍生技术的特点和应用,并对今后荧光原位杂交技术的发展和作用做了展望。     

p53基因在小鼠胚胎发育过程中的表达

以E9日龄至E14日龄昆明种正常小鼠胚胎为材料,利用质粒扩增的、地高辛标记的基因探针在组织切片上进行DNA-mRNA 分子原位杂交,研究了p53基因在小鼠胚胎发育过程中的表达.结果表明, p53基因不参与E9和E10日胚胎发育中的器官原基形成,参与器官的进一步分化成熟过程.这些器官主要有眼、脑、心、肺、脊柱和面颌骨,肝组织的发育与其无关; p53基因一方面参与胚胎发育中的细胞周期调控,另一方面也参与了某些与细胞周期无关的过程;不同的器官有不同的细胞周期调控机制.     

原位杂交技术在两栖类基因定位中的应用

原位杂交技术在哺乳类及鱼类基因定位研究中有应用。作者在此基础上进行改进,报告了使用染色体原位杂交技术进行两栖类基因定位的方法。本文还对该方法的意义、应用前景及存在问题进行了讨论。     

一种改进的重复多色荧光原位杂交技术

多色荧光原位杂交技术是在常规荧光原位杂交技术基础上建立的一种染色体分析手段,已广泛应用于肿瘤遗传学的研究,尤其是用于染色体隐匿性重排及复杂核型分析。本研究旨在利用现有实验条件,建立一种可靠的人类全染色体分析方法——重复多色荧光原位杂交技术（repetitive multicolour fluorescence in situ hybridization,RM-FISH）。采用特异的全染色体涂染探针,分别用C3、Cy5、FITC3种荧光素直接标记,组合制备4组六色的探针池。对同一染色体片先后进行4次杂交,通过装备了4组滤镜的荧光显微镜捕获信号。RM-FISH技术结合反相DAPI显带对1例原发性食管鳞癌进行核型分析,获得了全部染色体的特异信号。本研究建立的RM-FISH简便、易行,是光谱核型分析的一种较理想的替代技术。     

前列腺特异性膜抗原RNA探针的制备

从前列腺癌细胞系LNCaP中提取总RNA，经RT－PCR扩增前列腺特异性膜抗原（PSM）靶序列，将其定向插入带T7RNA聚合酶启动子的pSPORT1质粒，转入大肠杆菌DH5α，经蓝白斑筛选获得重组质粒，以此重组质粒线性化DNA为模板，以地高辛标记的rUTP及其他三种rNTP为底物，经T7RNA聚合酶体外转录，成功地制备了地高辛标记的PSM特异性RNA探针，为研究以PSM为分子生物学指标的前列腺癌分期诊断奠定了基础。     

应用地高辛标记的PCR-ELISA技术快速检测转基因水稻

应用地高辛标记的PcR—ELISA(Dig-PcR—ELISA)技术进行转基因水稻检测研究。针对转基因水稻中普遍存在的花椰菜花叶病毒(CaMV)35S启动子(p35S)、胭脂碱合成酶(NOS)终止子(Thos)，筛选标记潮霉素磷酸转移酶基因(hpt,hph)、β—葡萄糖苷酸酶基因(gus)、抗草丁膦除草剂基因(bar)，建立Dig—PcR—ELISA检测方法；能进行半定量检测，敏感性试验表明，Dig—ELISA检测比常规电泳检测可提高敏感性达1000倍，可检测含量达0．1％的GM0样品。全过程可在24h内完成。     

海洋微型浮游植物分子生态学研究进展

简述海洋微型浮游植物分子生态学领域研究进展,综述分子生物学技术在海洋微型浮游植物物种鉴定、系统发生学、群落组成、生态适应与生态功能等方面的应用成果.分子标记和核酸序列为海洋微型浮游植物鉴定与系统发生树的构建提供了更为细致的指标;不依赖纯化培养技术的原位分子方法能较为全面地描述浮游植物群落的多样性组成结构,荧光原位杂交等定量分析技术实现了对种群时空分布和动态的监测;通过功能基因与基因组序列分析等遗传基础分析方法,探讨浮游植物对环境适应的分子机制,研究其生态适应与生态功能.