硅藻土强化吸附壳聚糖固定化青霉素酰化酶

文中针对壳聚糖颗粒机械强度不够和比表面积不大的缺点,用无机多孔材料硅藻土(celite)在低压下强化吸附壳聚糖,再用戊二醛使其活化,以此为载体通过共价结合固定化青霉素酰化酶。以酶活和回收率为指标,讨论了活化、固定化及酶反应的不同条件对固定化青霉素酰化酶的酶活和回收率的影响。当戊二醛溶液质量分数为5%、pH值为8.5;酶固定化温度为27℃,固定化pH值为7.6,固定化时间为12～18h时,为最佳固定化条件。固定化酶的酶活可达10000mol/s左右,回收率约为40%。固定化酶的储存稳定性和热稳定性好,载体有良好的强度。     

用大孔吸附树脂固定化青霉素酰化酶的研究

用四种大孔吸附树脂制备固定化青霉素酰化酶。结果表明,AB—8型和0.01CC型树脂固定化酶活力回收较高,分别为14.2％和12.4％,其它两种型号的树脂固定化酶活力回收均小于10％。同时研究了温度、pH、戊二醛对AB—8型和0.01CC型树脂固定化酶活力的影响以及这两种固定化酶的操作稳定性。     

固定化青霉素酰化酶的新载体

通过X射线粉末衍射、红外光谱等手段考察了α-磷酸锆层柱材料作为载体固定青霉素酰化酶及其对载体结构影响.结果表明无论是否加入戊二醛固定化酶后,层柱材料的结晶度都下降.酶活性和回收率较高,分别为139.5 nmol/s和28.9%.间歇操作稳定性较好,连续操作10次,酶活性下降24%.     

GMA-NVP-MBAA三元聚合物载体固定化青霉素酰化酶性能的研究

利用反相悬浮聚合技术合成了珠状甲基丙烯酸缩水甘油酯—N—乙烯砒咯烷酮—N，N’—亚甲基双丙烯酰(GMA—NVP—MBAA)三元GNM共聚物．研究表明，GMA与NVP质量比为1：10，MBAA为单体总量50％合成的GNM(50)固定青霉素酰化酶，固定化酶水解青霉素G钾盐活性达491U／g．固定化酶经4次使用后活性达到稳定值为444U／g，再经14次使用，活性几乎不变．同时，考察了水解反应温度、pH值对固定化酶活性的影响．     

戊二醛交联壳聚糖固定化青霉素G酰化酶及其性质研究

以戊二醛为交联剂,壳聚糖为载体固定化粪产碱杆菌来源的青霉素G酰化酶.通过单因素和正交试验优化确定固定化最佳条件:0.1 g载体,2.5%戊二醛,酶量160 U,0.6mol/L NaCl,0.2 mol/L磷酸缓冲液9.5 mL,37℃,pH 8.0,固定化38 h.固定化酶最高比活为48.7 U/g湿载体.固定化酶性...     

青霉素酰化酶工程菌的褐藻胶固定化

本文报告以褐藻胶(海藻酸钠)固定化青霉素酰化酶工程菌的方法。本方法对大肠杆菌的包埋量可达30～40％(W/W),酶活回收率为88％。本文对6-APA测定的PDAB法进行了改进;对固定化细胞酶活的测定提出一种新方法。     

固定化粪产碱杆菌青霉素G酰化酶的制备

粪产碱杆菌来源的青霉素G酰化酶通过共价结合在环氧型载体EupergitC上,通过对酶质量浓度、固定化反应时间、pH 值以及反应温度等条件的考察,确定了最优固定化条件：375mg比活力5000U/g的重组粪产碱杆菌青霉素G酰化酶蛋白对应1g载体,最适pH8.0,反应温度30 ℃.反应120h后制得固定化青霉素G酰化酶活力达到220U/g,固定化酶效率为10.7%.该固定化酶可在含饱和乙酸丁酯磷酸缓冲液中彻底水解青霉素G钾盐.经过15批连续水解反应,固定化酶仍保持95%的活力,展现出良好的稳定性.     

大孔GAM珠状聚合物固定化青霉素酰化酶催化性能的研究

应用反相悬浮技术合成了大孔甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)-丙烯酰胺(AM)-N,N′-亚甲基双丙烯酰胺(MBAA)珠状三元聚合物GAM,并用于制备固定化青霉素酰化酶.在37℃时,用固定化酶PA/GAM(粒径0.10~0.13 mm)水解青霉素G制备6-氨基青霉烷酸(6-APA),其表观活性为569 IU/g,表观米氏常数k′m为1.7×10-2mol/L,最大反应速度vmax为6.1×10-4mol/min,水解反应最适温度为50℃,最适pH值为8.0.固定化酶在pH值为4.0~9.0,且温度低于40℃时活性稳定,经20次间歇操作使用后,催化活性没有明显衰减,有良好的应用前景.     

青霉素酰化酶研究——Ⅱ.酶的修饰和修饰酶的性质

本文介绍用β-硫酸酯乙砜基苯胺(SESA)活化右旋糖酐T2000以修饰大肠杆菌5852青霉素酰化酶。活化时500mg右旋糖酐需SESA 20mg。制备对氨基苯磺酰乙基葡聚糖(ABSE)-右旋糖酐的反应温度为80℃,与500mg活化右旋糖酐偶联的酰化酶酶量为100u,修饰率达88.3%。用琼脂糖(Sepharose 4B)或交联葡聚糖(Sephadex G150)柱层析分离得高分子量的修饰酶。修饰酶对热和pH的稳定性均优于自由酶,最适温度提高,但最适pH和高浓度青霉素G底物抑制现象没有改变。     

固定化青霉素酰化酶在双水相体系中催化合成氨苄西林

通过研究氨苄西林、6-氨基青霉烷酸（6-APA）和D-苯甘氨酸甲酯（D-PGME）在聚乙二醇（PEG）和不同盐组成的双水相体系（ATPS）中的分配行为,建立了一个由PEG-4000（w=20％）和硫酸铵（w=15％）组成的双水相体系．在此体系中,氨苄西林的分配系数为5．0,6-APA和D—PGME的分配系数分别为1.7和1．4．以环氧基功能化介孔分子筛SBA-15为载体固定青霉素酰化酶（Penicillin G Acylase,PGA）,并在双水相体系中催化合成氨苄西林,产率为80％,经过4批次的连续合成,产率提高到98％,而在水相体系中酶促合成氨苄西林的产率仅为27％．     

聚甲基丙烯酸缩水甘油酯固定化青霉素酰化酶性质的研究

应用反相悬浮技术合成了珠状甲基丙烯酸缩水甘油酯 - N ,N′-亚甲基双 (丙烯酰胺 )共聚物 ,并将巨大芽孢杆菌 ( Bacillus megaterium)青霉素酰化酶共价偶联到甲基丙烯酸缩水甘油酯共聚物载体上 ,制成固定化青霉素酰化酶 ,其表观活性为 3 71 U/g(干重 ) ,水解青霉素 G钾盐的最适温度为 47°C,最适 p H为 8.5 ,在 p H4.5～ 9.0 ,温度 40°C以下时酶的活性稳定 ,表观米氏常数 Km为 1 .3 3× 1 0 -2 mol/L ,最大反应速度 vmax为 1 .2 7× 1 0 -5mol/min,固定化酶在 4°C冰箱保存 3 5 d,再水解 w=0 .0 2的青霉素 G钾盐溶液 ,重复使用 3 0次 ,保留酶活性 88.1 %。     

青霉素酰化酶的喹啉红测定法——NIPAB改良法

本文对ANB A的偶合呈色反应进行了探讨,据此对青霉素酸化酶测定提出一种新方法——喹啉红法。本方法是NIPAB法的一种改良法,反应特异性高,操作简便,检测灵敏度较原方法高约四倍。喹啉红于550nm的克分子消光系数为3.5×10~4 L·mole~(-1)·cm~(-1)。     

青霉素G酰化酶在磁性复合载体上的固定化及其酶学性质

利用凝胶-溶胶方法对磁性Fe3O4微粒表面进行功能化修饰,制备了表面含氨丙基的磁性复合载体,并通过戊二醛交联制备固定化青霉素G酰化酶(PGA).结果表明,在37℃时,固定化酶水解青霉素G钾盐,制备6-氨基青霉烷酸的表观活性为1 886 IU/g,表观米氏常数K'm＝140 mmol/L,最大反应速度Vmax＝0.45 ...     

用渗透压冲击法提取青霉素酰化酶

采用渗透压冲击法提取青霉素酰化酶 ,粗酶液比活达8.20×10-8 mol/(s·mg) ,比超声波法高10倍以上 ,酶活总收率达93.3 %。     

巨大芽孢杆菌产青霉素酰化酶发酵条件的研究

该文对一株巨大芽孢杆菌产胞外青霉素酰化酶的发酵条件下进行了初步研究。不同的氮源及装液量和发酵时间产酶均有影响。该菌株在２７－２８℃１８０ｒ／ｍｉｎ，初始ＰＨ８．０，苯乙酸浓度０．６％的最佳发酵条件下发酵６０ｈ左右，青霉素酰化酶活力可达５００－７００Ｕ／１００ｍｌ。     

青霉素G酰化酶调节基因定点诱变的研究

构建了大肠杆菌中青霉素G酰化酶（PAC）的调节基因（pacR）翻译起始密码定点突变株。对突变后PAC的表达调控特征进行了研究，结果表明：突变株的pac基因表达后能正常加工成24ku、65ku的α亚基和β亚基；突变后，虽然PAC表达仍需要苯乙酸诱导，但是，可诱导性提高，形成低组成型表达，无葡萄糖有分解代谢物阻遏效应，因而pacR对PAC表达水平存在着影响，pacR基因是葡萄糖以及它的分解代谢物在分子水平上影响PAC表达的另一作用因素。采用突变株进行发酵生产中，PAC产量较亲株提高3倍，而且可以采用葡萄糖作为碳源，有利于改善PAC的生产。     

固定化青霉素酰化酶在光敏感可再生两水相体系中催化青霉素G为6-APA

在一种光敏感可再生高聚物(PNBC 300000)与葡聚糖20000(Dextran 20000)形成的两水相体系中进行固定化青霉素酰化酶的相转移催化青霉素G产生6-APA的反应。在这个两水相体系中,当pH为7.8,底物浓度为62 mmol/L,反应温度为20℃,在50 mmol/L KCl存在下,6-APA的分配系数可达8.4。催化动力学显示,达到平衡的时间近6 h,PG(Na)转化率约82.6%。3批半连续反应转化率为60%~70%,较相近条件下的单水相反应得率提高近20%。在两水相中,底物及产物主要分配在上相,固定化酶分配在下相,底物青霉素G进入下相经酶催化产生的6-APA及苯乙酸又转入上相,从而解除了青霉素酰化酶催化反应的底物及产物抑制作用,达到提高产物得率的效果。形成两水相的高聚物通过488 nm的激光照射可实现循环利用,高聚物的光照回收率在95%~98%。     

Co-MCM-48和Co-MCM-41介孔分子筛对青霉素酰化酶的固定化作用

制备了含钴MCM-48和MCM-41的介孔分子筛,用作酶生物催化剂固定化的载体．采用XRD、低温N2吸附及FT-IR等方法研究了介孔载体的结构特征、表面酸性和对青霉素酰化酶（Penicillin G Acylase,PGA）的固定化作用．结果表明,Co-MCM-48与Co-MCM-41介孔分子筛表面存在着弱酸性高浓度的自由羟基,为酶的固定化提供了功能性基团和适宜的微环境．固定化酶PGA／Co-MCM-48水解青霉素G的表现活性为1682IU／g,约是PGA／Co-MCM-41水解青霉素G表现活性的2．4倍．经6次连续操作使用,PGA／Co-MCM-48的水解活性降至1375IU／g,保持其初始活性的81％,而PGA／Co-MCM-41保持其初始活性的42％．Co-MCM-48固定化青霉素酰化酶的活性和操作稳定性显著好于Co-MCM-41固定化酶。     

渗透休克法提取重组青霉素G酰化酶及酶学性质研究

为简化后期提取工艺,采用渗透休克法提取基因工程菌重组青霉素G酰化酶,回收率92.4%的酶蛋白释放到胞外,纯度达80%,比酶活26.4 U/m g.酶学性质研究表明,K cPGA的最适作用pH和温度分别为pH 7~9和50℃,在pH 5.0~8.0和低于40℃的范围较稳定.     

层状材料水滑石固定青霉素酰化酶的研究

以层状材料水滑石(LDH)为载体,采用不同酸性氨基酸插层,通过直接吸附和戊二醛交联的方法进行青霉素酰化酶(PGA)的固定.考察了各个因素对固定化酶酶活性的影响,优化了反应条件.制得的固定化酶的表观酶活性达9.67×10-6mol/s,酶活性回收率56.6%.对固定化酶的操作稳定性作了初步探讨.