降低聚腺苷二磷酸核糖聚合酶活性对外源癌基因诱导的NIH…

用ＰＡＲＰ酶抑制剂苯甲酰胺（ＢＡ）处理经ｃ－Ｈａ－Ｔ２４－ｒａｓ活化癌基因转染的ＮＩＨ３Ｔ３细胞得到转化细胞系，结果表明，经苯甲酰胺处理的细胞系，其细胞凝集，血清依赖性，形态特征等均发生了改变呈出现正常细胞的特征，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交结果表明，已整合到细胞基因组中的外源Ｔ２４－ｒａｓ基因发生了丢失。     

杂交捕获抑制聚腺苷二磷酸核糖聚合酶基因的体外翻译

体外转录载体ｐＳＰ７２—Ｃ１２和ｐＳＰ７２—Ｃ１．４分别经ＸｂａⅠ和ＸｈｏⅠ酶切线性化后，用ＳＰ６ＲＮＡ聚合酶与Ｔ７ＲＮＡ聚合酶进行体外转录得到编码人聚腺苷二磷酸核糖聚合酶基因的ｍＲＮＡ全序列（３．７ｋｂ）及与其５’端编码区的起始密码子ＡＵＧ上游区域互补的反义ＲＮＡ片段（１．４ｋｂ）。等摩尔数的正、反义ＲＮＡ通过酚相乳浊杂交技术进行分子杂交。在网织红细胞裂解物体外翻译系统中，正义ＲＮＡ能正常地翻译出蛋白质；而反义ＲＮＡ与正义ＲＮＡ杂交可阻断翻译的进行。     

降低PARP酶活性对培养细胞SCE及微核效应的影响

聚腺苷二磷酸核糖基化作用是细胞内的一种重要的核蛋白转译后加工修饰，它参与细胞内很多重要的生物事件．催化该反应的酶是聚腺苷二磷酸核糖合酶（ＰＡＲＰ），底物为ＮＡＤ．本文使用ＰＡＲＰ酶的抑制剂苯甲酰胺处理培养细胞，研究了降低ＰＡＲＰ酶活性对培养细胞姐妹染色单体交换及微核效应的影响，为全面评价ＰＡＲＰ酶抑制剂在细胞内的功效打下基础．     

环腺苷二磷酸核糖（cADPR）类似物的合成与诱导钙释放活性的研究

Ca²⁺信号传导通路是生物体内重要的胞内信号传导途径之一。局部钙信号主要来源于细胞内钙库释放,而这些钙信号受到各种第二信使的控制和Ca²⁺通道蛋白的调节。环腺苷二磷酸核糖（cADPR）作为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD⁺）的代谢物,发现于1987年,是一种信号传导分子,它广泛存在于各种生物系统中,通过介导兰诺定( RyR) 受体调节钙动员活性。研究cADPR以及具有不同生物活性的类似物之间的构效关系是探究分子内钙释放机制的主要手段,另外,一些结构新颖的拮抗剂和激动剂可以作为研究细胞系统复杂机制的研究工具。作者概括性地介绍了cADPR结构类似物——N¹-乙氧基甲基-环肌苷-5'-二磷酸核糖（cIDPRE）和N¹-[(磷酰基-O-乙氧基)-甲基-N⁹-[(磷酰基-O-乙氧基)-甲基-次黄嘌呤-环磷酸焦酯（cIDPDE）的合成与性质。这两种类似物cIDPDE和cIDPRE可作为研究完整细胞钙信号系统的膜透性激动剂。     

腺苷二磷酸诱导斑马鱼血小板聚集的初步研究

腺苷二磷酸（adenosine diphosphate,ADP）是有效的血小板激活剂。本文研究了腺苷二磷酸对斑马鱼存活率、血小板聚集和血栓相关基因血管性血友病因子（Von Willebrand Factor,vWF）的影响。结果显示,30μmol／L-1 mmol/L ADP对Sdpr（days post fertilization）斑马鱼存活率的抑制作用呈剂量和时间依赖性。利用血小板标记荧光的转基因斑马鱼,我们发现ADP也能诱导斑马鱼血小板聚集。反转录PCR（RT-PCR）结果显示vWF在斑马鱼血小板聚集过程中表达上调。说明ADP是研究斑马鱼血小板聚集机制的有利工具。     

NIH3T3细胞与其癌变细胞的PARP酶被抑制后DNA损伤修复的差异研究

PARP酶 (聚ADP核糖基聚合酶Poly ADP ribosepolymerase ,PARP)对于DNA损伤修复具有重要功能 ,正常细胞及其癌变细胞的该酶对抑制剂的敏感程度可能会有差异 .为此 ,通过姐妹染色体交换频率 ,带报告基因的质粒转化频率 ,以及彗星测定等方法 ,对DNA的损伤修复进行初步的检测 .实验结果表明 ,正常细胞和癌变细胞PARP酶在抑制剂作用下酶活性都会降低 ,但是癌变细胞的PARP酶对抑制剂更为敏感 .     

研究聚ADP核糖基化作用与细胞恶变关系的双基因真核表达重…

本文将聚ＡＤＰ核糖聚合酶基因１．４ｋｂ部分序列反向插入真核表达载体ｐＭＡＭｎｅｏ和ｐＳＭＧ中，同时１２位密码子突变的活化ｒａｓ癌基因也一同克隆到上述载体中，从而获得具有不同真核基因筛选标记的双基因真核表达重组ｐＭＡＭｎｅｏ－Ｃｌ．４－Ｔ２４，ｐＭＡＭｎｅｏ－Ｃｌ．４－ａｒＴ２４，及ｐＳＭＧ－Ｃｌ．４－Ｔ２４，上述质粒的构建成功为研究聚ＡＤＰ核糖基化作用与细胞恶变的关系提供了一种新的分子模型。     

研究聚ADP核糖基化作用与细胞恶变关系的双基因真核表达重组体的构建

本文将聚ADP核糖聚合酶基因1．4kb部分序列反向插入真核表达载体pMAMneo和pSMG中，同时12位密码子突变的活化ras癌基因也一同克隆到上述载体中，从而获得具有不同真核基因筛选标记的双基因真核表达重组体pMAMneo－Cl．4－T24，pMAMneo－Cl.4－arT24，及pSMG－Cl．4-T24，上述质粒的构建成功为研究聚ADP核糖基化作用与细胞恶变的关系提供了一种新的分子模型．     

点突变ras癌基因全cDNA真核表达重组体的构建及诱导NIH3T3细胞转化的研究

将活化癌基因Ｔ２４－ｒａｓ的全ｃＤＮＡ序列正向插入真核载体ｐＭＡＭｎｅｏ，构建成重组质粒ｐＭＡＭｎｅｏ－Ｔ２４－ｒａｓ．将该质粒转染ＮＩＨ３Ｔ３细胞，通过药物筛选，建成细胞系３Ｔ３（Ｔ２４）．Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交证明外源Ｔ２４－ｒａｓ基因已整合于受体细胞染色体中．３Ｔ３（Ｔ２４）细胞表现出形态学方面的明显变化：具失去接触抑制能力，且在裸鼠体内致瘤等恶性行为．本文构建的Ｔ２４－ｒａｓ基因真核表达重组体和建立的转化细胞系可用于肿瘤的诊断、预防、治疗及抗肿瘤药物的筛选、评估等研究．     

NKC－1中草药合剂对T24－ras活化癌基因转化细胞的选择性杀伤及抗肿瘤作用的研究

根据我国传统中医药理论及现代分子生物学知识，设计并配制了具有抗肿瘤效应的复方中草药合剂ＮＫＣ－１．体外实验表明：ＮＫＣ－１能够选择性杀死ｒａｓ癌基因诱导的转化细胞，在较低浓度条件下对转化细胞的恶性行为有一定的抑制和逆转作用。急性毒性实验结果显示：当注射剂量为０．８ｍｌ／只昆明鼠时，仍无严重毒性。裸鼠体内实验表明：ＮＫＣ－１具有良好的抑制肿瘤效应。     

聚ADP核糖基聚合酶的抑制剂苯甲酰胺在肺癌细胞PG凋亡中的作用

研究了聚ADP核糖基聚合酶（PARP）抑制剂苯甲酰胺（BA）在DNA损伤所造成的肺癌细胞（PG）凋亡过程中的作用,分别用MNNG（N－甲基－N－亚硝基氮亚硝基胍）和BA,以及同时用MNNG和BA处理PG细胞,然后用非放射性细胞增殖测定试剂盒和流式细胞仪测定PG细胞的增殖活性和细胞凋亡的变化,并用免疫组化法检测细胞中Bcl-2蛋白表达的变化,结果表明,在MNNG的作用下细胞的增殖活性受到明显抑制,细胞凋亡显著,Bcl-2蛋白低表达,单独用BA处理PG细胞时,细胞的增殖活性,细胞凋亡数及Bcl-2的表达与空白对照组相似,用BA和MNNG共同处理PG细胞时,细胞的增殖活性,细胞凋亡数及Bcl-2的表达,与对照细胞和BA单独处理的细胞相比均无明显差异,这说明PARP对诱导细胞凋亡起重要作用,而且这种作用可被PARP抑制剂BA所抑制。     

逆转录病毒载体介导的Anti-ras核酶对T24ras转化3T3细胞的抑制作用

突变ｒａｓ基因存在于多种人类肿瘤细胞中,本文将可特异性切割１２位点突变ｒａｓ（Ｔ２４ｒａｓ）之核酶Ｒ８通过逆转录病毒载体导入Ｔ２４ｒａｓ转化的ＮＩＨ３Ｔ３细胞,以期检测核酶在细胞内对其靶基因的作用．结果表明Ｒ８可特异性地切割突变ｒａｓｍＲＮＡ,导致转化细胞生物学特性如细胞形态、生长速度等在一定程度上发生逆转     

高强高模耐高温的聚对苯酰胺纤维

本文叙述了高分子量聚对苯酰胺(PBA)的直接合成法。由对氨基苯甲酸合成出具有对数比浓粘度(?)达2.3的PBA,经湿纺成形的纤维具有抗张强度达3.4～3.6GPa,伸长率为1.7～1.8％,模量达188～197GPa和密度为1.45g/cm~3。     

拟南芥多聚ADP-核糖化修饰蛋白的富集和鉴定

多聚ADP-核糖化修饰[poly(ADP-ribosyl)ation,PARylation]是一种可逆的蛋白质翻译后修饰,该修饰由多聚ADP-核糖聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]催化.多聚ADP-核糖化修饰蛋白主要在动物中发现,在植物中少有报道.微生物来源的蛋白质AF1521具有一个能结合多聚ADP-核糖[poly(ADP-ribose),PAR]的macro结构域(macro domain),其突变蛋白AF1521-G42E失去了结合PAR的活性.我们利用AF1521蛋白对PAR的亲和作用来富集拟南芥中的PARylation蛋白质底物并进行质谱分析,同时用AF1521-G42E作为富集过程的负对照.通过这种方法,我们得到多个ADP-核糖化修饰相关蛋白,并对其中一个蛋白GRP7进行了验证.     

离子聚合物surlyn的成核效应(Ⅰ)——surlyn与聚对苯二甲酸乙二酯的反应

研究了聚对苯二甲酸乙二酯(PET)/离子聚合物surlyn体系的反应.由该体系的熔融行为、分子量的测定及红外光谱分析证实:surlyn的侧基—COONa在高温下与PET的酯键反应,会引起PET断链,并生成PET—COONa和PET—R.在更高的温度下,PET—COONa之间的离子端基可相互反应,生成对苯二甲酸钠,并使PET分子链重新连接起来.