一种采用微波炉加热快速提取细菌DNA用于PCR扩增的方法

利用微波加热原理,探索一种快速、简单、高效提取细菌DNA用于常规PCR快速检测的方法.在微波炉额定功率800 W条件下分别对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特氏菌、副溶血弧菌、沙门氏菌以及志贺氏菌6种常见食源性病原菌进行微波处理,离心取上清,获取细菌DNA,将样本DNA进行PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳进行验证.并进一步采用微波加热方法针对6种病原菌最低检出浓度和混合提取6种病原菌DNA的PCR检测进行分析.6种病原菌在微波炉中加热40-130 s的上清DNA样本均能用于常规PCR扩增.针对检出浓度的分析表明,副溶血弧菌的最低检出浓度为103cfu/ml,金黄色葡萄球菌为104cfu/ml,肠出血性大肠杆菌为105cfu/ml,肠炎沙门氏菌和福氏志贺氏菌的最低检出浓度为106cfu/ml,针对单核细胞增生李斯特氏杆菌的的最低检出浓度为107cfu/ml.进行6种混合菌微波共提取时,其中5种病原菌的特异性基因都能扩出,并且条带很亮.该微波提取方法具有快速,简单,高效的特点,能满足大部分食源性病原菌的常规PCR检测需求,大大节约了时间和成本,具有广泛的适用性,为细菌快速分子检测提供了简便手段.     

一种直接用于PCR分析的风沙土微生物总DNA提取方法

以风沙土为材料,直接提取土壤微生物DNA.采用SDS—溶菌酶—CTAB—蛋白酶K和液氮反复冻融法裂解细胞得到DNA粗提液,以PEG对其纯化.结果表明,SDS—溶菌酶—CTAB—蛋白酶K和液氮反复冻融法裂解细胞可获得大片段的DNA,提高DNA产率.每克干土的DNA提取量为0.586～1.311μg.所提DNA片段在23Kb以上.PEG可有助于去除DNA中腐植酸,DNA不作回收纯化即可作为模板进行16SrDNAPCR扩增.SDS—溶菌酶—CTAB—蛋白酶K和液氮反复冻融裂解细胞、PEG纯化DNA的方法组合是一种简便的适合风沙土微生物总DNA的提取方法.     

利用微波炉和煮沸法快速制备大肠杆菌基因组DNA PCR模板

利用微波炉和煮沸法可以简单、快速、有效地制备大肠杆菌基因组DNA PCR模板.用该模板做PCR具有很高的效率和良好的特异性.     

固定标本的DNA提取及PCR扩增

报道富尔马林、酒精固定的日本绒螯蟹标本的ＤＮＡ提取及ＰＣＲ扩增，并与冷冻、煮沸标本进行了比较。结果表明，福尔马林固定标本与酒精固定标本一样可以撮加入的蛋白酶Ｋ量越多，ＤＮＡ的回收率越高。以提取的ＤＮＡ为模板，进行了线粒体ＤＮＡ１２ＳrＲＮＡ和Ｄ－１ooＰ基因片段的ＰＣＲ扩增，经琼脂糖产电泳ＰＣＲ扩增产物后均得到了与期待的碱基长度相一致的清晰谱带。     

一种冰川微生物总DNA的提取方法

利用SDS高盐法对冰川微生物总DNA进行了提取,实验结果表明这种方法对不同区域的冰川都可以提取到长度大于15kb的DNA片段,所得DNA应用细菌16S rRNA基因的引物进行PCR扩增,均能获得目的片段。因此,SDS高盐法是一种高效、简单的从小量冰川样品中直接提取DNA的理想方法。     

一种简单,快速植物RAPD分析DNA提取方法

随机引物扩增多态性ＤＮＡ(ＲＡＰＤ)分析实验中的植物总ＤＮＡ提取方法已有很多文献进行过详细阐述和讨论[1～ 5] ,同时 ,邹喻萍等[6] 对于濒危植物ＲＡＰＤ分析 ,尤其是植物ＤＮＡ难于提取的种类如银杉、矮壮丹、南川剑麻的总ＤＮＡ提取鉴定进行了较理想的改进 .但以往的ＤＮＡ提取一般费时较长、工序繁琐 .本实验采用普遍使用的ＣＴＡＢ法提取曼陀罗ＤＮＡ ,根据在实验中的摸索 ,对植物总ＤＮＡ的提取条件作了较大改进 .用此方法提取的ＤＮＡ能直接用于ＲＡＰＤ ,ＰＣＲ ,ＲＦＬＰ等分子生物学实验 .1　材料与方法1 .1　材料　曼陀罗 (Ｄ…     

杨树人工林土壤细菌DNA的提取与扩增

土壤微生物多样性反映土壤生态系统健康程度,对土壤养分循环发挥决定作用,并在很大程度上影响林地生产力.为研究人工林长期经营对土壤微生物多样性的影响,本研究以杨树人工林为研究对象,取连作林地根际和非根际土壤,采用MOBIO PowerSoil DNA Isolation kit试剂盒提取土壤中微生物基因组DNA,并进行16S rDNA V3区扩增.结果表明:6种杨树人工林土壤中均能提取出微生物基因组DNA,基因组DNA片段大于2 000 bp,且DNA带型清晰完整,无明显降解,为后续土壤细菌的PCR扩增提供了良好模板;6种土壤基因组DNA在电泳图中的亮度不一,其中Ⅰ代林根际土壤(B3)微生物DNA条带最亮,Ⅲ代林非根际土壤(FB18)微生物DNA条带亮度最弱,经检测,B3样品DNA含量约为6.9 ng·cm-3,而FB18仅有2.0 ng·cm-3左右;选用27F/1492R和F338-GC/R518两对引物,采用巢式PCR策略,成功扩增出杨树人工林土壤细菌16S rDNA V3区DNA,片段大小为220 bp左右.     

一种简便高效提取细菌总DNA和RNA的方法

本科实验教学中,细菌总DNA和RNA的提取是一个基础实验.但该实验中经常出现DNA提取不出来、产量低、条带不清晰、RNA降解、蛋白残留多等问题,影响了学生对细菌DNA和RNA的直观认识,降低了实验教学效果.将常规提取方法进行精简优化,摸索出一种简便、稳定、高效、成功率高的DNA和RNA同时提取的方法.所获样品电泳条带清晰,无降解,蛋白残留少;且实验步骤少,基本每个学生都能获得理想结果,明显改善了教学实验效果,值得在本科生物化学实验教学中推广.     

细菌基因组DNA提取方法简化的研究

DNA提取是生物学领域最基础的操作,是科研和生产中常用的方法。但是液氮的使用、操作过程的繁琐限制了该技术乃至其他生命科学技术的推广和发展。本文研究了不同方法提取细菌DNA的效果,简少了DNA提取步骤,为核酸提取方法的简化提供了思路。     

一种简便实用的植物总DNA提取方法

对近年来发展起来的植物基因组ＤＮＡ提取方法进行了改良,提出一种简便,实用的ＤＮＡ提取方法,所得ＤＮＡ的产量和纯度能够满足基因工程操作的要求。     

用于转基因植株检测的DNA快速微量提取方法

摘要建立了一个用于转基因小苗检测的DNA快速微量方法.每20mg新鲜叶片可提出约10μgDNA，且DNA有较好的完整性，A260/280值在1.7～1.9范围内，并适合于点杂交和PCR分析.     

浓香型白酒窖泥中总DNA提取方法的研究

本研究针对5种白酒窖泥总DNA提取方法(预处理+DNA提取液+SDS法,改进的化学裂解法,CTAB+SDS+反复冻融,SDS细胞裂解法,玻璃珠+CTAB+溶菌酶法),探索适合微生物多样性研究的细菌16SrDNA和真菌ITS-5.8SrDNA的PCR扩增的窖泥总DNA提取方法.结果表明,采用玻璃珠+CTAB+溶菌酶法和化学裂解法提取DNA无明显降解、重复性好,可用于后续细菌16SrDNA和真菌ITS-5.8SrDNA的PCR扩增.     

石油微生物16SrRNA基因PCR扩增研究

掌握石油微生物的16SrRNA基因保守区的扩增方法是先进分子水平鉴定微生物种类一种有效的实验方法。通过研究利用分子生物技术提高对石油微生物的了解,进行未来对石油的开采,摸索出石油微生物的DNA提取方法,16SrRNA基因的PCR扩增反应条件的研究进而初步鉴定菌种类型。本文是以大庆采油三厂分离纯化的石油微生物为实验材料,摸索合适的石油微生物基因组DNA的提取方法及合适的PCR扩增条件和反应体系,在本实验室后续开展石油微生物在分子水平方面的实践指导中有重要意义。     

一种简单、快捷植物RAPD分析DNA提取方法

随机引物扩增多态性DNA(RAPD)分析实验中的植物总DNA提取方法已有很多文献进行过详细阐述和讨论[1～5],同时,邹喻萍等[6]对于濒危植物RAPD分析,尤其是植物DNA难于提取的种类如银杉、矮壮丹、南川剑麻的总DNA提取鉴定进行了较理想的改进.但以往的DNA提取一般费时较长、工序繁琐.本实验采用普遍使用的CTAB法提取曼陀罗DNA,根据在实验中的摸索,对植物总DNA的提取条件作了较大改进.用此方法提取的DNA能直接用于R APD,PCR,RFLP等分子生物学实验.     

从土壤中快速提取纯化DNA方法的建立

比较了从土壤中提取及纯化DNA的不同方法,确立了TENS-乙酸铵提取方法和PVPP柱层析的纯化方法.结果显示:TENS-乙酸铵提取方法对不同土壤均有较好的提取效果,DNA片段长度在23.1 kb以上,且无明显降解;PVPP柱层析的纯化方法比胶回收纯化方法的DNA回收效率高、质量好,可用于PCR扩增.     

植物细胞DNA提取与PCR实验的设计及其关键参数的优选

以草本类型的蓼科5种植物为实验材料,研究了DNA提取方法。探讨了nrDNA ITS片段的PCR扩增方法,通过正交试验法,对该实验的关键步骤中PCR体系主要成分的最适含量进行了优化。为植物细胞DNA提取和PCR扩增这一现代生物学必不可少的实验教学和相关科学研究提供方法借鉴。     

三种罗布麻干燥叶片基因组DNA的提取方法

采用Qiagen的植物基因组DNA提取试剂盒并加以改进,首次从不同季节采收、不同干燥方法保存的三种罗布麻(罗布红麻、大叶白麻和白麻)干燥叶片中提取出基因组DNA.提取的基因组TE溶解液的OD260/OD280 值多在1.7～1.9范围内,电泳呈现单条带,核基因组的ITS片段、叶绿体基因组的trnL内含子和trnL-F非编码区片段的PCR扩增条带清晰并能进行DNA测序,这表明基因组DNA质量较好,可以满足后续分子生物学实验的要求.本研究为罗布麻等中药材的进一步分子生物学研究提供了必要的技术基础.     

4种提取水稻基因级DNA方法的比较

对于含有大量硅质及多糖如酚、酯、萜等其它次生代谢产物的水稻,要从其组织中提取高质量的基因组DNA,一般比较困难,作者以水稻叶片为材料,分别采取了简易提取法,CTAB法,QIAGEN公司Dneasy Plant Mini Kits法,Shanghai Sangon公司Genomic DNA Isolation Kits法4种方法提取水稻基因组DNA;并通过质量分数为0．8％琼脂糖凝胶电泳和PCR扩增的方法所提取的DNA样品进行检测,将它们在DNA的产量、质量和耗费等方面进行简要比较,并根据分子生物学研究工作的实际特点,确定了CTAB沉淀法为最佳方法。     

三种血液基因组 DNA 提取方法的比较研究

摘要: 目的 比较采用 3 种不同 DNA 提取方法提取豚鼠血液基因组 DNA 之间的差异。方法 分别用新鲜抗凝血 NaI 手提法、血凝块手提法和试剂盒 DNA 提取法提取 20 只豚鼠血液基因组 DNA,用分光光度计测定、琼脂糖凝胶 电泳、PCR 扩增等方法对提取的 DNA 片段的完整性、浓度、纯度和用于 PCR 扩增的效果等方面进行比较研究。结 果 新鲜抗凝血 NaI 手提法提取的 DNA 完整性、浓度和纯度均为最高; 血凝块法提取的 DNA 浓度和抗凝血提取的 DNA 浓度接近但纯度最低,有一定程度的断裂和降解; 试剂盒法提取的 DNA 浓度最低,纯度和完整性处于中间,但 三种方法提取的 DNA 都可用于 PCR 扩增反应。结论 3 种方法都可以提取基因组 DNA 并且所提取的 DNA 均能 满足后续 PCR 扩增实验的要求,但每种方法各有利弊,可根据具体的条件选择适宜的方法。