驱油枯草芽孢杆菌产芽孢条件优化

试验研究了采油微生物枯草芽孢杆菌的芽孢形成及萌发过程。结果表明,最适产芽孢培养基为(g/L):氯化钠5,牛肉膏5,酵母膏2,可溶性淀粉20。最适中间调控pH为9.0,最适中间调控温度为45℃。活菌总数达到1.6×10~9CFU/mL,芽孢数达到2.2×10~8CFU/mL,芽孢率为13.8%。对枯草芽孢杆菌进行3 L发酵罐研究,确定了芽孢形成的最佳搅拌转速为140 r/min,同时确定了芽孢在低转速下也可以萌发。     

枯草芽孢杆菌B29菌株对黄瓜植株的诱导抗性

对枯草芽孢杆菌B29菌株诱导黄瓜根系相关防御反应酶活性的变化趋势进行了研究,结果表明该菌株接种能够诱导黄瓜根系苯丙氨酸解胺酶（PAL）、多酚氧化酶（PPO）和过氧化物酶（POD）活性有不同程度的提高,尤其在挑战接种病原菌后,3种防御反应酶活性上升的幅度比单独接种要高,说明挑战接种有利于诱导抗性的表达。结合枯草芽孢杆菌B29菌株对黄瓜枯萎病的田间防效试验,可以说明诱导抗性是其生防作用机制之一。     

苏云金芽孢杆菌aiiA基因在枯草芽孢杆菌中的表达

根据NCBI上已公布的枯草芽孢杆菌BS168菌株的β-1,4-glucanase(eglS)基因以及苏云金芽孢杆菌的aiiA基因序列,设计引物并扩增得到eglS基因的启动子、信号肽序列和aiiA基因.构建重组表达载体Ps4-eaiiA,转化枯草芽孢杆菌BS168,得到枯草芽孢杆菌工程菌BS168/Ps4-eaiiA.该工程菌诱导发酵后经SDS-PAGE和Western blotting分析表明:aiiA基因实现了在枯草芽孢杆菌中的表达.对胡萝卜软腐欧文氏菌进行马铃薯的抗病性实验,结果表明aiiA基因在枯草芽孢杆菌中表达的AiiA蛋白对胡萝卜欧文氏杆菌表现出一定的抗病性.     

短小芽孢杆菌碱性蛋白酶基因在枯草芽孢杆菌WB600中的表达

将来源于枯草芽孢杆菌WB600的启动子PyxiE与碱性蛋白酶基因进行融合,将融合片段插入到大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体pSUGV4中,构建了表达质粒pSUPyAp. 将该质粒转入枯草芽孢杆菌WB600中,得到转化子pSUPyAp/WB600,它在启动子PyxiE驱动下,能够在牛奶平板上产生透明的水解圈,其发酵上清液中的碱性蛋白酶活性最高为518.5 U/mL,其酶活分别是在启动子Bp53和P43驱动下的3.01倍和1.22倍.     

短小芽孢杆菌碱性蛋白酶基因在枯草芽孢杆菌WB600中的表达

将来源于枯草芽孢杆菌WB600的启动子PyxiE与碱性蛋白酶基因进行融合,将融合片段插入到大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体pSUGV4中,构建了表达质粒pSUPyAp. 将该质粒转入枯草芽孢杆菌WB600中,得到转化子pSUPyAp/WB600,它在启动子PyxiE驱动下,能够在牛奶平板上产生透明的水解圈,其发酵上清液中的碱性蛋白酶活性最高为518.5 U/mL,其酶活分别是在启动子Bp53和P43驱动下的3.01倍和1.22倍.     

枯草芽孢杆菌防治作物病害的研究进展

随着生命科学的兴起,人们对枯草芽孢杆菌的认识也会更加深刻。作为拮抗微生物,枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)已在1998年即作为农药登记,被用于防治几种作物病害。文章则主要介绍枯草芽孢杆菌在防治作物病害的应用和发展。     

枯草芽孢杆菌8-32拮抗菌株的紫外诱变选育

为了获得更高拮抗活性的菌株,以对大豆根腐病病原菌具有较强拮抗作用的Bacillus subtilis8-32为实验材料,采用紫外线诱变方法选育具有更高拮抗活性菌株.紫外诱变条件为30 W紫外线,15 cm辐射距离,诱变时间4 min.结果表明,经初筛和复筛,从诱变后菌落形态差异显著的100个菌株中,筛选得到3株(YB-1,YB-2和YB-3)拮抗活性明显增强的菌株,其拮抗活性与对照相比分别提高了50％,55％和50％,并且传代培养10次后其活性保持不变,说明诱变菌株YB-1,YB-2和YB-3遗传性状稳定.     

枯草芽孢杆菌TH2菌株抗菌物质产生的技术研究

通过正交试验,结果表明枯草芽孢生防菌TH2高产抗菌物质培养基的最佳配方为豆饼粉1.5%,玉米粉为0.5%,麦麸0.5%,大米粉0.5%,最佳的培养条件为通气量25ml装瓶量、pH为7.5、温度为28±1℃,这样产生的抗菌物质最多.枯草芽孢生防菌株TH2培养过程中,pH从培养初始的7.0,经下降又逐步上升到48小时的7.8.OD650从培养初始的0.56,逐步上升到36小时的1.10,而后逐渐下降,84小时降到0.85.孢子生成从12小时开始,孢子数达(108cfu/ml),而后逐渐增加,48小时达到高峰,孢子数达58.2(108cfu/ml),随后孢子数逐渐下降,抑菌圈值随着发酵时间增加逐渐增大.     

枯草芽孢杆菌表达系统及其启动子的研究进展

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是工业应用中一种重要的模式菌株,具有非致病性、遗传背景清晰、分泌蛋白能力强、容易分离培养等特性,是异源蛋白表达和分泌的理想宿主。高效可控的启动子是实现外源蛋白高效表达的关键因素之一。根据诱导机制,启动子可分为组成型启动子、诱导型启动子、自诱导启动子和时期特异性启动子。本文介绍了枯草芽孢杆菌表达系统、芽孢杆菌σ因子类型及枯草芽孢杆菌启动子的结构,比较了常用启动子的优缺点,总结了新启动子克隆和改造及生物信息学预测启动子的方法,并对枯草芽孢杆菌启动子未来的研究方向进行展望,为进一步研究启动子的结构和功能及工业生产外源蛋白奠定基础。     

ERIC-PCR方法鉴定单核细胞增生性李斯特氏菌研究

本研究工作共收集食物样品6种62份，从中分离单核细胞增生性李斯特氏菌可疑菌落，用ERIC PCR方法进行鉴定。并用国际生化方法验证，结果表明，两种鉴定方法结论完全一致，证明使用ERIC－PCR技术鉴定单核细胞增生性李斯特氏菌是可行的，并且耗时短，操作简单。     

腐乳发酵过程中微生物群落结构的ERIC-PCR指纹图谱分析

为了建立一种不依赖纯培养、可以在腐乳发酵工业现场使用的监测微生物群落结构变化的分子技术,以腐乳发酵过程的4个阶段(前发酵、盐胚、盐水胚和后发酵阶段)的微生物群落为研究对象,获得了腐乳发酵物总DNA的肠杆菌基因间共有重复序列-聚合酶链式反应(ERIC-PCR)指纹图谱.图谱分析表明:同一批次不同发酵阶段的样品在500、750 bp处均存在特征性条带,说明在整个腐乳发酵过程中某些微生物种群始终发挥着作用;不同发酵阶段具有各自特有的特征条带;对于连续4周取的不同批次的样品,其对应的各个发酵阶段的ERIC-PCR指纹图谱具有较好的相似性,Sorenson配对相似性系数(Cs值)在59%~100%之间.     

制药废水处理系统微生物群落动态变化的ERIC-PCR指纹图谱分析

用ERIC-PCR指纹图谱监测制药综合废水活性污泥生态系统,结合活性污泥性质测定和理化指标监测结果,综合评价处理系统运行状态.4个时间点的监测中,受高盐影响污泥沉降比和污泥指数略微偏高,第1监测时间最高分别为68%和282.93 mL/g,第4监测时间最低分别为39%和187.64 mL/g;COD\=Cr去除率在73.23%～86.73%之间;ERIC-PCR指纹图谱的多样性指数稳定在2.24～2.38之间,相似性指数差异较大,最高为95%,最低为19%.表明第1监测时间高负荷冲击会导致系统COD\=Cr去除率下降,第2监测时间短时期缺氧不会影响系统正常运行,第3、4监测时间水质水量稳定活性污泥处理系统微生物种群结构和处理效率稳定.     

腐乳发酵过程中微生物群落结构动态的ERIC-PCR指纹图谱分析(修改稿)

建立一种不依赖纯培养,可以在腐乳发酵工业现场使用的监测微生物群落结构变化的分子技术。以腐乳发酵过程的前期、中期、后期的微生物群落为研究对象,每周采样1次,连续4周。获得腐乳发酵物总DNA的ERIC-PCR指纹图谱。结果表明,在4个采样时期之间,对应的各个采样点的ERIC-PCR指纹图谱差异不大,具有较好的相似性,Cs值在59～100之间;同一采样时期不同采样点指纹图谱之间既有相同的特征条带,又存在差异性条带,显示了在此期间微生物群落的连续动态变化过程。通过对腐乳发酵过程中的微生物群落结构的指纹图谱分析,可开发出对该系统微生物群落结构动态变化进行检测的技术。     

Formation of proinsulin by immobilized Bacillus subtilis

There has been an increasing interest in the use of immobilized cells for the production of pharmaceuticals as well as for products such as high fructose syrup or ethanol. Some of these compounds are now produced on an industrial scale whereby the cells are used in a resting or growing state or in a nonviable form as natural carriers of the enzyme(s) involved in the synthesis. The advantages of immobilized cell technology should also apply to microorganisms modified by recombinant DNA techniques to produce a variety of eukaryotic proteins such as hormones. We describe here the properties of immobilized Bacillus subtilis cells carrying plasmids encoding rat proinsulin. Cell proliferation normally coupled to DNA replication is undesirable in immobilized cell systems as "clogging' of the system occurs due to cells growing outside the beads. Therefore, different ways were investigated to inhibit cell division while allowing continued protein synthesis. We found that the addition of certain antibiotics in the growth medium, such as novobiocin which inhibits DNA replication, fulfills these requirements, allowing proinsulin synthesis and excretion to take place over a period of several days.     

短小芽孢杆菌TY079产抗菌物质的发酵培养基研究

在摇瓶培养条件下,采用单因素与正交试验相结合的方法,对影响短小芽孢杆菌TY079产抗菌物质发酵培养基的主要成分进行优化,得到最佳培养基为：葡萄糖0.5%、玉米粉0.5%、蛋白胨1.5%、豆饼粉0.5%、KH2PO40.75%、MgSO4.7H2O 0.2%,优化后抑菌圈直径是优化前的1.42倍。     

洗毛用枯草芽孢杆菌产蛋白酶发酵条件优化

 用响应面法(Response Surface Methodology,RSM)对枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）液体发酵产蛋白酶的发酵条件进行快速优化。首先运用逐因子试验确定Bacillus subtilis产蛋白酶的最佳碳源和氮源分别为糊精和玉米粉。在此基础上,通过Plackett-Burman设计对影响其产酶相关因素进行评估,并筛选出具有显著效应的3个因素：糊精、玉米粉和酵母膏。在用最陡爬坡试验逼近以上3个因子的最大响应区域后,采用RSM法对以上3个显著因子的最佳水平范围进行研究,通过对二次多项回归方程求解,确定其最优发酵条件为：糊精11.568g/L,玉米粉22.462g/L,酵母膏10.202g/L,NaCl 5g/L。初始pH值为7.0,37℃培养48h。最终优化后的酶活达到3281.79U/mL,比初始酶活2463.95U/mL提高了33.19%,证明RSM法优化洗毛用Bacillus subtilis产蛋白酶发酵工艺是可行的。     

甜菜碱对枯草芽孢杆菌合成利巴韦林的影响

以枯草芽孢杆菌TM903为供试菌株,采用摇瓶分批补料发酵的培养方式,考察了甜菜碱添加量对枯草芽孢杆菌合成利巴韦林及其合成途径中嘌呤核苷磷酸化酶(PNPase)活力的影响.结果表明,初始培养基添加0.7g/L的甜菜碱,发酵36 h后每间隔3 h流加0.1g/L甜菜碱,可显著提高PNPase的相对酶活,并且使利巴韦林的产量达4.21 g/L,比未添加前提高了47.2%.