响应面优化贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)菌株YH-18产芽孢培养基和培养条件

【目的】贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)菌株YH-18是优良的抗病促生微生物,其制成的微生物菌剂具有无害、高效、环保等特点。通过优化菌株YH-18的培养基组分和培养条件,提高发酵液中的有效活菌数,以期增加发酵液中的芽孢数,延长储存时间,降低发酵成本,提高其在工业化生产发酵中的质量效益。【方法】以贝莱斯芽孢杆菌(B.velezensis)菌株YH-18发酵液芽孢数为质量指标,采用单因素分析法对发酵液培养基(碳源、氮源、无机盐及其浓度)和培养条件(温度、转速、初始pH、装液量、接菌量)进行初步筛选。将初筛结果结合响应面试验设计[plackett-burman(PB)、最陡爬坡试验、box-behnken design(BBD)],筛选出对贝莱斯芽孢杆菌菌株YH-18产芽孢影响最为显著的因素进一步验证,建立各显著性因素的二次回归方程模型,完成对菌株YH-18培养基组分和培养条件的系统优化。对比优化前后发酵液产品的去菌体滤液对根癌农杆病菌(Agrobacterium tumefaciens)菌株C58生长的抑制效果。每隔4个月测定优化后发酵液中的活菌数和芽孢数,考察优化...     

黄芪根腐病拮抗菌的筛选及生防机制

由Fusarium oxysporum引起的根腐病是制约黄芪产量和品质的重要因素之一,为了获得环境适应性强且拮抗效果好的黄芪根腐病生防菌,以病原真菌F.oxysporum为指示菌,通过稀释涂布法和平板对峙实验从黄芪根和根际土壤中共分离得到197株细菌,其中20株细菌对病原真菌有拮抗作用,且20株拮抗菌中优势菌为芽孢杆菌.7株拮抗菌对病原真菌生长抑制率超过35%,用这7株细菌进行盆栽试验,结果表明,菌株AS1对黄芪根腐病的防治效果最好,在接种病原菌第20 d时AS1对黄芪根腐病的防效达46.86%.进一步研究发现,菌株AS1基因组中含有伊枯草素、脂肽和杆菌霉素的编码基因,AS1处理后病原真菌孢子萌发率下降了74.4%.接种AS1第8 h后植物的苯丙氨酸解氨酶、几丁质酶、多酚氧化酶、过氧化物酶、脂氧合酶活性和茉莉酸含量较不接种对照分别提高了16.0%,21.5%,10.6%,12.6%,14.2%和97.3%.此外,AS1处理15 d后使黄芪的根长和株高分别增加了37.52%和12.78%.根据生理生化特征和16S rDNA测序发现菌株AS1归属于贝莱斯芽孢杆菌.因此,AS1是一株具有较大...     

产维生素K2贝莱斯芽孢杆菌ND的诱变育种及突变子快速筛选

本研究旨在探索贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)ND诱变育种的最佳条件,确定原生质体的最佳制备条件和融合条件.结果表明,紫外灯下50cm处诱变30s涂布于2.0%LiCl平板的复合诱变,最有利于获得VK2产量提高的突变子.溶菌酶0.1mg/mL于33℃下保温20min,原生质体再生率最高,为41.2%;65℃热处理10min或紫外处理40s,原生质体的灭活率可达到100%;40%PEG-6000在37℃下处理6min原生质体融合频率最高,为9.8%.本研究将分光光度法测定与HPLC法测定提取液中维生素K2(VK2,MK-7)的含量相结合构建了一种可快速筛选产VK2突变体的方法,最终获得一株VK2产量提高31.42%的突变菌株.另外也为贝莱斯芽孢杆菌的诱变育种和原生质体制备提供了研究基础.     

生防芽孢杆菌对半夏根际土壤酶活性及产量的影响

采用大田实验的方法,研究三株对植物枯萎病具有较强抑制作用的Bacillussubtilis B579、Bacillus amyloliquefaciens 9-2、Bacillus subtilis 2-1三株菌对半夏根际土壤关键酶活性的影响.研究结果表明,生防菌的施入能显著提高半夏根际土壤中过氧化氢酶、碱性磷酸酶、脲酶和几丁质酶等4种与土壤肥力相关的酶活性,且施入生防菌处理组的产量相比对照组和空白组明显较高.     

绿色木霉和枯草芽孢杆菌对番茄幼苗促生效应的研究

为深入研究生防菌对植物促生作用的机理,提高作物产量,探究了绿色木霉和枯草芽孢杆菌对番茄幼苗的促生效应,并进一步探讨了两株菌的协同促生作用.采用灌根法共设置6种处理:绿色木霉处理、枯草芽孢杆菌处理、混合菌液处理、PD液体培养基处理、LB液体培养基处理、PD+LB液体培养基处理.通过盆栽实验,对不同处理下番茄幼苗的多种生理...     

一株贝莱斯芽孢杆菌的生长特性及抑菌活性研究

从自然发酵海洋鱼酱油中分离得到了一株具有多种蛋白酶活性与糖酶活性的贝莱斯芽孢杆菌SW5菌株,为探究贝莱斯芽孢杆菌SW5的抑菌特性,研究了SW5菌株的生长及生理生化特性,验证了SW5菌株发酵上清液对食品中多种常见病原菌的抑制能力;并利用液相色谱-质谱联用技术鉴定了其中的抑菌物质。结果表明:菌株SW5在35℃、pH值5时生长最快,对于亚胺培南、头孢曲松等β-内酰胺类抗生素敏感。菌株SW5的发酵上清液具有明显的抑菌活性,上清液经过浓缩后抑菌效果显著增强。TOF-MS分析表明,发酵上清液中含有的抑菌物质为表面活性素、山茱萸苷A、氨基糖苷类抗生素庆大霉素与异帕米星、链霉菌素类抗生素达福普丁。研究结果以期为菌株SW5的进一步开发利用提供一定的理论基础。     

内生芽孢杆菌防治植物病害的应用及作用机制研究进展

植物内生细菌由于其独特的生境,成为植物病害防治中的重要生防因子.芽孢杆菌在植物体内分布具有广泛性和多样性,其在防治病害和促进植物生长发育方面的作用被广泛研究和应用.芽孢杆菌控制植物病害的作用机制主要包括竞争、拮抗、促进植物生长和诱导植物抗病性四个方面.植物诱导抗性作为植物内生细菌防病的主要机制之一,具有非特异性、广谱性和系统性,在植物病害的生物防治中可被广泛应用.     

蚯蚓粪与贝莱斯芽孢杆菌混合改良对土壤微生物群落结构的影响

利用蚯蚓粪和贝莱斯芽孢杆菌对辰山植物园的粉砂质壤土进行了改良,结果显示：与单独施加蚯蚓粪相比,蚯蚓粪与贝莱斯芽孢杆菌的混合处理可以更好地提高土壤酶活性及微生物量. 特别要注意的是：在土壤的微生物群落菌种数量,以及群落的多样性、丰富度、均匀度上,混合处理都优于两者的单独处理,分别提升了5.35%与13.81%,1.02%与2.35%,2.48%与16.68%,25.22%与11.99%. 实验结果也表明：混合改良处理有利于土壤优势菌群的形成,可以对抗相对较弱的病原菌种群,破坏或削弱病原菌,从而减少或避免作物病害. 这些研究结果为进一步探究微生物群落结构的变化对土壤肥力的影响,利用生物方法改良城市绿地土壤提供了借鉴.     

贝莱斯芽孢杆菌BR-01菌株高产抗菌肽培养基的优化及其抗菌肽的鉴定

贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis) BR-01菌株对水稻细菌性条斑病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzicola,Xoc)具有较好的拮抗作用。为了提高该菌株的抗菌肽发酵产量和生防价值,对其产抗菌肽培养基进行了优化,并初步鉴定了其抗菌肽的成分。以B.velezensis BR-01菌株无菌发酵滤液对Xoc的抑菌圈直径为评价指标,从7种常见培养基中筛选出最适培养基,通过单因素试验优化初始培养基各组分含量和发酵条件,再利用Plackett-Burman (PB)试验筛选出影响发酵滤液抑菌活性的显著因素,运用响应面分析法获得最优发酵条件。利用PCR分析B.velezensis BR-01基因组中抗菌肽合成相关基因;使用液相色谱-质谱联用(Liquid Chromatography-Mass Spectrometer, LC-MS)技术鉴定其产生的抗菌肽。结果表明,B.velezensis BR-01菌株最佳抗菌肽培养基配方与发酵条件为麦芽糖11.89 g/L、酵母提取物13.54 g/L、NaCl 5 g/L、KH₂PO     

芽孢杆菌乳酸高产菌株UZ3-15的紫外线诱变选育

为了获得乳酸的高产菌株,以实验室前期筛选获得的产乳酸芽孢杆菌Z-3-1为出发菌株,通过紫外线诱变来选育乳酸高产菌株,紫外线诱变条件为30 W紫外灯,30 cm辐照距离,诱变时间为150 s.采用溶钙圈法对诱变后的菌株进行初步筛选,得到在MRS-CaCO3培养基上产生透明圈直径较大的菌株19株.通过对菌株的发酵液进行乳酸...     

枯草芽孢杆菌水剂对西瓜枯萎病的田间防效研究

本试验通过35亿活芽孢／ml枯草芽孢杆菌水剂以浸种、灌根并用的方式防治西瓜枯萎病，田间试验结果表明：枯草芽孢杆菌水剂250倍液、500倍液对西瓜枯萎病具有明显的防治效果，同时对黄瓜秧苗正常生长无任何不良影响。此外，枯草芽孢杆菌水剂还对西瓜植株具有一定的促进生长作用。     

贝莱斯芽孢杆菌HNU24高效拮抗茄雷尔氏菌和促进植物生长活性的研究

由茄雷尔氏菌(Ralstoniasolanacearum)引起的茄科作物青枯病常有发生,危害严重且较难防治.从海南樱桃番茄种植区的青枯病重病田中,由健康植株的砧木根系分离到一株贝莱斯芽孢杆菌HNU24.HNU24和强致病力茄雷尔氏菌菌株EP1共培养实验表明,HNU24可显著抑制EP1的生长,且HNU24发酵液的乙酸乙酯...     

离子型稀土矿植物根际促生芽孢杆菌的筛选与鉴定

以离子型稀土废弃矿修复植物的根际土壤为研究对象,采用稀释涂布法从土壤样品中筛选出具有植物根际促生作用,以及能够在高浓度稀土离子条件下生长的芽孢杆菌菌株,并对菌株的促生能力和稀土离子耐受性进行测试.试验结果表明,筛选得到的芽孢杆菌菌株中具有产吲哚乙酸(IAA)能力的有14株,其中同时具有产铁载体和NH3能力的共有5株.菌...     

枯草芽孢杆菌与哈茨木霉对黄瓜幼苗生长的协同促进作用

以施加哈茨木霉、施加枯草芽孢杆菌以及施加哈茨木霉和枯草芽孢杆菌混合菌液的黄瓜幼苗为实验材料,以施加PD培养基、LB培养基以及施加PD和LB混合培养基的黄瓜幼苗为对照材料,探究了单一菌液及混合菌液对植株生长的影响.结果表明,施加菌液增加植株地上部、地下部生物量,且施加混合菌液的黄瓜幼苗对比单种菌液组物质积累量效果更好.此...     

烟草黑胫病与青枯病生防芽孢杆菌筛选

烟草黑胫病与青枯病是贵州省黔西南州安龙县烤烟上主要根茎病害。为筛选防治烟草黑胫病与青枯病的芽孢杆菌,从安龙县烟草黑胫病与青枯病混合发生地块采集健康烟株根际土壤,分离到根际芽孢杆菌662株。采用平板对峙法筛选同时拮抗这2种病菌的芽孢杆菌。结果表明,2株芽孢杆菌具明显拮抗烟草黑胫病菌(Phytophthora nicotianae)与青枯病菌(Ralatonia solanacearum)的能力,通过形态学、生理生化测定及分子生物学鉴定,2株芽孢杆菌均为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。本研究为贵州烟草生防制剂的研发打下基础。     

蜡样芽孢杆菌B3-7菌株对小麦全蚀病菌的抑制作用

室内测定蜡样芽孢杆菌(Bacilis cereus)B3-7菌株对小麦全蚀病菌(Gaeumannomyces graminis var tritici)9812菌株的拮抗作用,结果表明B3-7菌株对病菌具有较强的抑制作用,抑制效果为69％,高于化学杀菌剂处理的效果．该菌株可以造成病菌菌丝发生畸变．双抗标记法测定了该拮抗菌株在小麦根系中的定殖情况,结果表明B3-7可以在小麦根系定殖。     

提高苏云金芽孢杆菌制剂杀虫效果的策略

苏云金芽孢杆菌制剂是一种主要的生物杀虫剂 ,本文从培育高效菌株、增加昆虫对 Bt的摄入量、化学杀虫剂促进 Bt的杀虫作用、植物次生物质的增效作用、Bt与其杀虫微生物及其代谢产物的协同作用、简单化合物提高 Bt的毒力以及保护 Bt免受紫外光的损伤等方面提高 Bt制剂的杀虫活性进行了论述。     

生防细菌LM-3的鉴定及其抗菌蛋白的研究

LM-3是一株来自土壤的广谱拮抗细菌.经革兰氏染色、形态特征、培养特征和生理生化特征等分析,LM-3菌株被鉴定为多粘类芽孢杆菌.采用盐析法提取获得了该菌株的抗菌粗蛋白,抑菌活性测定表明抗菌蛋白对辣椒炭疽病菌等多种植物病原真菌有强烈的抑制作用.抗菌蛋白对链霉蛋白酶E和胰蛋白酶不敏感,对蛋白酶K部分敏感;高温(120℃)处理20min后抗菌蛋白仍保留84.71%的活性;酸碱处理发现抗菌蛋白在pH 8.5时最为稳定,而在pH 2.5时80℃处理1h完全失活;25W紫外灯(2400lx)照射8h对其活性没有影响.发酵上清液经硫酸铵盐析、高温(100℃)处理和SDS-PAGE分析,该抗菌蛋白的分子量介于6kDa和14.2kDa之间.     

枯草芽孢杆菌B1-41对小麦全蚀病及其病原的防治和抑制作用

从小麦根际土壤中分离得到枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)B1-41拮抗菌株，室内测定其带菌培养液对小麦全蚀病菌(Gaeumannomyces graminis var．tritici)9826菌株和9812菌株的抑制效果分别为70％和68％，盆栽试验中，其防治效果为63％和59％，高于化学杀菌剂处理的55％和51％的效果．试验表明，该菌株可以造成病菌菌丝发生畸变和菌丝细胞壁瓦解．