深海适冷假交替单孢菌Pseudoaltermonas sp.SM9913产适冷蛋白酶的条件优化

对深海适冷假交替单孢菌Pseudoaltermonas sp．SM9913适冷蛋白酶的发酵产酶条件进行了优化．研究结果表明，在发酵培养基中添加一定量柠檬酸钠有利于提高产酶；较难分解利用的氮源，如豆粕、豆粉，能诱导适冷蛋白酶合成，而较易吸收利用的氮源，如豆粕水解液、蛋白胨、尿素、铵盐等，对产酶有抑制作用；添加表面活性剂吐温80和SDS能促进酶向胞外的分泌；钙、镁离子促进产酶，锌、铜、铁离子对产酶有抑制作用；发酵产酶是好氧过程，装液量较少对产酶比较有利；发酵培养基初始pH7．0～8．0利于产酶．在优化后的发酵条件下，Pseudoaltermonas sp．SM9913产适冷蛋白酶量较原来提高了约65％，为适冷蛋白酶向着工业化生产应用提供了基础数据．     

海藻糖对Pseudoaltermonas sp. SM9913适冷蛋白酶的稳定性保护研究

研究了几种不同的糖类物质———葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、海藻糖对深海适冷假交替单孢菌Pseudoalter monas.sp .SM9913所产适冷蛋白酶粗酶液稳定性的保护情况 ,以海藻糖的保护作用最为突出 .进一步研究了海藻糖在不同温度条件——— 2 0℃、30℃、4 0℃下以及不同浓度的海藻糖对粗酶液的保护情况 ,结果表明 ,不同温度 (2 0～4 0℃ )下 ,海藻糖对粗酶液热稳定性都有很好的保护作用 ,而且温度越高 ,保护作用越显著 .海藻糖最佳保护浓度为10 %～ 15 % .     

培养基成份对链格孢霉胞外蛋白酶的影响

本文研究了培养基成份对链格孢霉（Alternaria atternata)胞外蛋白酶形成的影响，发现，培养基成份对链格孢霉胞外蛋白酶的形成与活性有明显影响。链格孢霉只有在含1%酪素的培养基里才能形成胞外蛋白酶，否则不形成胞外蛋白酶，硫酸镁（MgSO4)对其蛋白酶活力有明显正向影响；磷酸氢二钾（K2HPO4）对其蛋白酶活力有明显负向影响；硝酸钠（NaNo3)对其胞外蛋白酶的形成具有明显负向影响。     

镉离子对红树林底栖硅藻新月筒柱藻胞外多糖的影响

重金属镉在沉积物中普遍存在,易对底栖硅藻造成慢性毒害.研究了不同浓度的镉离子对红树林底栖硅藻新月筒柱藻的细胞生长、蛋白质含量及胞外多糖(extracellular polymeric substances,EPS)的影响.结果表明,与对照组相比,不同浓度的镉离子显著抑制了细胞的生长和蛋白质含量;0.001、0.01和0.1μg/mL实验组均显著抑制了EPS含量(p<0.05),浓度越高,抑制越强.但新月筒柱藻在不同生长阶段分泌附着胞外多糖(attached EPS,AEPS)和胶体胞外多糖(colloidal EPS,CEPS)不一样,在培养的前4d,CEPS含量高于AEPS含量10倍以上,4d后则AEPS含量高于CEPS.与0.001μg/mL的镉离子实验组相比,0.1μg/mL的镉离子促进CEPS的积累,而抑制AEPS的产生,特别是在生长前期.这说明细胞倾向于向培养基中分泌大量的CEPS,而不是在细胞周围形成大量的AEPS来缓解高浓度镉离子的胁迫.研究结果有助于了解镉离子在底栖硅藻集群的时空分布和沉积物的稳定性等方面的作用.     

无色杆菌属孔雀绿脱色菌产脱色酶的条件研究

已分离鉴定的无色杆菌属(Achromobacter sp.)菌株MGT3对孔雀绿染料具有强脱色作用,对其产酶脱色能力进行的初步研究表明,该菌株不需要孔雀绿作为底物即可产脱色酶,即脱色酶的产生不需要底物的诱导;其胞内和胞外都存在脱色能力强的脱色酶.产胞外脱色酶的条件优化结果显示培养基的组成对该菌株产胞外酶的能力有很大影响.采用单因素结合正交试验优化产酶培养基结果表明,培养基的最佳组成成分为0.5%蔗糖、2.5%尿素、0.0025%KH2PO4;盐浓度小于1.0%时能促进该菌株产酶,高于1.0%时抑制产酶作用.该菌株在培养基初始pH为9、温度为35℃时产脱色酶效率高,对孔雀绿脱色率高.     

Cd(Ⅱ)对多环芳烃降解菌Bacillus sp.P1产酶及酶促降解过程影响研究

为研究重金属对多环芳烃降解过程中降解菌产酶及酶促降解过程的影响,本实验以菲和Cd(II)为代表物质,探究了多环芳烃降解菌Bacillus sp.P1降解菲的过程中,不同浓度Cd(II)对Bacillus sp.P1产生的蛋白浓度、组成及降解菲程中的关键开环酶邻苯二酚2,3-双加氧酶酶活以及其对菲酶促降解率的影响.结果表明,Cd(II)对Bacillus sp.P1的产酶过程和酶促降解过程均有抑制作用:当Cd(II)浓度由0mg/L增加到150mg/L时,蛋白分子条带的表达量明显减少,胞外蛋白及胞内蛋白条带总浓度分别由8.37×106,1.54×107降至5.49×106,6.01×106(Gelpro软件分析值);且当体系中Cd(II)浓度由0mg/L增加到300mg/L时,胞外和胞内酶中的邻苯二酚2,3-双加氧酶酶活分别由266.96,886.30U/mg下降至38.93,290.26U/mg;且胞外酶和胞内酶对菲的酶促降解率分别由79.86%,87.96%下降至64.59%,74.83%.以上实验结果共同表明Cd(II)对降解菌Bacillus sp.P1的产酶过程及酶促降解过程的影响是其影响多环芳烃降解菌降解能力的重要机制.     

柴胡皂甙促大鼠胰腺腺泡酶分泌作用的特征及胞外Ca2+对其的影响

利用检测胰腺腺泡蛋白分泌量表征胰酶分泌 ,研究柴胡总皂甙及柴胡皂甙单体 促胰腺腺泡酶分泌的量效特征和时效特征 ,并探讨胞外 Ca2 浓度的影响 .结果表明柴胡总皂甙及柴胡皂甙单体 促酶分泌作用随浓度增加而增强 ,且趋向饱和 .柴胡总皂甙促泌作用动力学呈现早期的高促分泌相和随后的低促分泌相 ;而 1 0 - 5 mol/L柴胡皂甙单体 的促泌动力学则出现了前期的低促分泌相 .胞外 Ca2 浓度为零 ,降低了柴胡总皂甙低促泌相的作用 ,并致使腺泡分泌趋向停止 .     

几种离子对纤维素酶活力的影响

本文主要研究8种离子对绿色木酶9405所产纤维素酶活力的影响。实验结果表明, Mg2+、Zn2+、Fe2+离子浓度在一定范围内,对纤维素酶活有抑制作用,SeO2-3-在实验浓度范围内对酶活无影响;Cu2+、Mn2+、Co2+、I-等离子浓度在一定范围内,对纤维素酶有激活作用,其中Cu2+激活作用显著,酶活提高30％;8种离子同时使用,激活作用明显,酶活提高幅度达4O％。     

Na~+、K~+、Ca~(2+)对柞蚕幼虫在体胸神经节自发放电活动的影响

以柞蚕五龄幼虫为材料 ,运用微电极电生理技术 ,以胞外记录的方法 ,记录了柞蚕幼虫在体胸神经节的自发放电活动 .并观察了胞外Na+、K+、Ca2 +的浓度变化对放电活动的影响 .结果表明 ,柞蚕幼虫胸神经节胞外自发放电有 3种形式 ,即慢节律单个放电、簇状放电及连续放电 ,其离子机制可能既有Na+动作电位 ,又有Ca2 +动作电位     

冠状耳霉碱性蛋白酶的生产及应用

冠状耳霉（Ｃｏｎｉｄｉｏｂｏｌｕｓｃｏｒｏ ｎａｔｕｓ）属接合菌亚门虫霉目 ,是一种常见的昆虫病原真菌 ,可侵染同翅目、鳞翅目、缨翅目、双翅目、鞘翅目昆虫以及蛛形纲的某些成员。该菌在侵染昆虫完成体壁穿透的过程中常分泌多种酶系 ,主要有蛋白酶、几丁质酶、脂酶、Ｄｎａｓｅ等。这些胞外酶系对侵入昆虫血腔、降解组织、破坏昆虫免疫系统起着重要的作用 ,其中对昆虫体壁降解最重要的酶系是胞外蛋白酶。冠状耳霉分泌的胞外蛋白酶均属碱性蛋白酶 ,该酶在ｐＨ值呈碱性的条件下具有最大酶活力 ,主要是在入侵昆虫坚硬的体壁过程中起水解…     

黄鳝蛋白酶的化学修饰

采用NBS，BrAc，IAC，TNBS，PCMB，PMSF，2-ME7种化学修饰剂及Ca^2 ．Mg^2 ，Na^2 ，K^2 ，Cu^2 等9种金属离子和EDTA试剂对黄鳝蛋白酶进行处理，检测酶活性变化，以研究酶分子中氨基酸侧链基团与酶活性中心的关系。及金属离子和EDTA对酶活性的影响．实验结果表明；NBS．BrAe，IAC，TNBS，PMSF对酶的抑制作用很强，而PCMB，2-ME对酶活性影响不大。说明色氨酸残基、组氨酸残基、赖氨酸残基和丝氨酸残基的化学修饰对酶的活性影响很大。为酶活性的必需基团。而巯基、二硫键等与酶活性无直接关系．Cu^2 ，Ba^2 对酶的活性具有激活作用，Mg^2 ，Li 和K 对酶有轻微的抑制作用，而Pb^2 ，Mn^2 和EDTA对酶有很强的抑制作用，Ca^2 ，Na^2 对黄缮蛋白酶既无明显的激活作用，也无明显的抑制作用．     

Gene structure and extracellular secretion of Neisseria gonorrhoeae IgA protease

Several human bacterial pathogens, including the Gram-negative diplococcus Neisseria gonorrhoeae, produce extracellular proteases that are specific for human immunoglobulin IgA1. Immunoglobulin A (IgA) proteases have been studied extensively and the genes of some species cloned in Escherichia coli, but their role in pathogenesis remains unclear. Recently we derived a DNA fragment of 5 kilobases (kb) from N. gonorrhoeae MS11 directing extracellular active enzyme in E. coli. Although the mature enzyme of strain MS11 was shown to have a relative molecular mass of 106,000 (Mr 106K) in gels, the DNA sequence of this cloned fragment reveals a single gene coding for a 169K precursor of IgA protease. The precursor contains three functional domains, the amino-terminal leader which is assumed to initiate the inner membrane transport of the precursor, the protease, and a carboxyl-terminal 'helper' domain apparently required for extracellular secretion (excretion). Based on the structural features of the precursor, we propose a model in which the helper serves as a pore for excretion of the protease domain through the outer membrane. IgA protease acquires an active conformation as its extracellular transport proceeds and is released as a proform from the membrane-bound helper by autoproteolysis. The soluble proform further matures into the 106 K IgA protease and a small stable alpha-protein.     

海洋细菌Pseudomonas sp.7-11产碱性蛋白酶的研究

本文研究了海洋细菌Pseudomonas sp.7-11产碱性蛋白酶的发酵条件及调控机制，并对该蛋白酶进行了分离纯化，实验结果显示，7－11为好氧菌，具有某些嗜低温的特性，而且适宜在偏碱性的条件下生长并产酶；酪蛋白培养基适合该菌株产酶；K^＋对产酶起关键作用；复合氨基酸对产酶有抑制作用，发酵液经盐析和离子交换层析等得到了两个活性峰，其中一个峰达到电泳纯，因此该菌产生蛋白酶不止一种。     

黄鳝肠道蛋白酶的应用研究

将黄鳝内脏混合物提取液作同工酶电泳,得到3条蛋白酶同工酶条带,其中ProteaseⅠ条带与从黄鳝肠道中提取的蛋白酶纯品SDS-PAGE条带重合,表明从黄鳝内脏混合物中可以提取到黄鳝肠道蛋白酶纯品.金属离子Cu2 和Ba2 对酶有激活作用,EDTA、Mn2 、Pb2 对酶有抑制作用,而Ca2 、Mg2 、K 、Na 对酶活性无明显影响.通过酶与化学试剂的配伍试验测得:CO23-、SO32-、硼砂对酶活性无影响,甘露醇、橄榄油、聚乙烯醇对酶活性有轻微抑制作用,SO42-、H2PO4-、BO32-和海藻酸钠对酶有轻微激活作用,而洗涤剂中常用的表面活性剂SDS、LAS、CHAPS和TritonX-100在低浓度时对酶活性无明显影响,酶在0·02%的SDS、0·05%的LAS和0·1%的CHAPS中保持相对稳定,40min酶活保持在50%左右.酶专一底物测试结果表明:黄鳝肠道蛋白酶对弹性蛋白酶的专一底物刚果红弹性蛋白(elastin-CongoRed)有水解活性,而对胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的专一底物N苯甲酰L精氨酸乙酯(BAEE)和N乙酰L酪氨酸乙酯(ATEE)无水解活性,表明黄鳝肠道蛋白酶为弹性蛋白酶.     

地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶的热稳定性研究

本文研究了环境因子对液体碱性蛋白酶２７０９＾＃热稳定性的影响，多种氨基酸、低浓度的各种离子以及羟基化合物等均能提高２７０９＾＃的热稳定性，氨基酸中以丝氨酸效果最好，Ｃａ＾２＋能极大的提高酶热稳定性，多糖类对酶的热稳定性效果不明显，但与适量合用，可显著提高酶的热稳定性。     

The alpha-lytic protease pro-region does not require a physical linkage to activate the protease domain in vivo

alpha-Lytic protease, an extracellular serine protease of Lysobacter enzymogenes 495, is synthesized as a pre-pro-protein. Previously it has been shown that when expressed in Escherichia coli, the protein is autocatalytically processed in the periplasmic space, and that the functional protease domain accumulates extracellularly. Engineered proteins lacking the 166 amino-acid pro-region were enzymatically inactive and remained cell-associated. By independently expressing the pro- and protease domains in vivo, evidence is provided here that direct covalent linkage is not required for production of active protease. We postulate that the pro-region acts as a template to promote the folding of the protease domain into an active configuration. Our results, combined with recent experiments on the evolutionarily unrelated subtilisin E (ref. 3), suggest that the ability of the pro-region of these bacterial proteases to facilitate folding of their protease domains is not a curiosity of a single system, but may reflect a general property of extracellular bacterial serine proteases.     

嗜热菌Lon蛋白酶的功能分析

Lon蛋白酶是一种在各种生物体内广泛分布并且具有多种生物功能的蛋白质.以嗜热栖热菌（Thermus thermophilus HB8）的Lon蛋白酶（TTLon）为研究对象,将TTLon蛋白酶的编码基因克隆至pTrc His载体,并在大肠杆菌中进行了成功表达,采用Ni-NTA亲和层析对其进行分离纯化,并通过一系列实验证明Lon蛋白酶能够与ATP结合,具有依赖ATP的蛋白酶活性和依赖ATP的分子伴侣活性.     

雅致放射毛霉AS3.2778碱性蛋白酶的制备及应用

毛酶蛋白酶对大豆蛋白具有较高的水解效率以及对蛋白水解物良好的脱苦效果,因此在大豆多肽的制备方面显示出很好的应用前景。为了开发这一蛋白酶系,采用离子交换,疏水层析及凝胶层析对其进行了分离纯化,从雅致放射毛霉As3.2778的发酵麸曲中分离纯化出一种蛋白酶,其纯度提高了22.7倍,酶活回收16.1%,最终比酶活可达到6094u/mg。电泳分析发现,该蛋白酶在还原及非还原条件下均显示出单一条带,表明该酶已达到电泳纯,并且是一单体蛋白,其分子量大约在32KDa。酶谱分析表明,纯化的蛋白酶仅为原发酵麸曲中三种蛋白酶组分中的一种。以大豆蛋白为底物,探讨了纯化后的蛋白酶对大豆蛋白的水解效果。结果显示,该蛋白酶在55℃,pH8.0～10.0的条件下对大豆蛋白显示出较强的水解能力。对比实验发现,纯化的毛酶蛋白酶对大豆蛋白的水解效果优于Papain、Alcalase及Protamex,表明该蛋白酶具有更为广泛的肽键选择性,对大豆蛋白亲和力更强,在大豆蛋白肽链上存在相对较多的酶切位点。     

酶法提取烤鳗下脚料水解动物蛋白的研究

以烤鳗下脚料为原料，经蛋白酶水解后，提取水解动物蛋白，使废弃物得到充分利用。通过正交实验，确定了木瓜蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、胃蛋白酶的最佳水解选择，选择了木瓜蛋白酶为最佳水解酶。