等电点计算公式使用条件的探讨

提出了一种新的氨基酸和多肽等电点计算公式推导方法,并讨论了等电点计算公式的使用条件。     

肽的等电点计算方法

肽是两性电解质,肽的等电点和氨基酸一样可根据它各自解离基团的ＰＫ值求得。即肽的等电点为它的两性离子两侧的ＰＫ的平均值。     

文昌鱼碱性磷酸酶的分子量及氨基酸组成的初步研究

经凝胶过滤法测得文昌鱼(Bronchiostoma belcheheri Gray)碱性磷酸酶的分子量为138,000,用等电聚焦电泳法测得其等电点为4.79,用氨基酸自动分析仪测得该酶的氨基酸组成共20种和1117个氨基酸残基。     

氨基酸溶解性规律及离子—屏蔽晶体模型

指出了氨基酸偶极溶剂化互斥模型在解释氨基酸溶解度规律上的不足，并提出了新的离子－屏蔽晶体模型。该模型依据偶极离子的结构特征，从结晶，水化，扩散，溶解等物理化学过程，分析了离子健，范德华键以及它们形成的离子层，疏水屏障和晶体结构，并论证了等电点时溶解最低这一原理。     

氨基酸溶解性规律及离子－屏蔽晶体模型

指出了氨基酸偶极溶剂化互斥模型在解释氨基酸溶解度规律上的不足，并提出了新的离子－屏蔽晶体模型．该模型依据偶极离子的结构特征，从结晶、水化、扩散、溶解等物理化学过程，分析了离子键、范德华键以及它们形成的离子层、疏水屏障和晶体结构，并论证了等电点时溶解度最低这一原理．     

也谈多电离基团氨基酸的等电点计算

文[1]对多电离基团氨基酸的等电点计算公式作了推导。但是,由于文中不恰当地采用了三个电离常数的乘积:     

中国对虾抗菌肽成熟肽的cDNA克隆

利用RT－PCR、嵌套PCR（Nested PCR)和3’－RACE等方法，从中国对虾血细胞中克隆到1种抗菌肽基因片段，称为中国对虾肽（Chp）基因。此基因片段长543bp，开读框共有156个碱基，编码52个氨基酸。该基因所编码的氨基酸序列对应于凡那对虾抗菌肽成熟肽的序列，与其一致性为52－59％，相似性为61－73％，分子量为5652．4Da，理论等电点为9．76，带正点荷的氨基酸（Arg-Lys）为8个，不含带负电荷的氨基酸。上述这些特征（分子量较小，带正点荷）均为抗菌肽的普遍特征。     

用双极性膜电渗析法分离混合氨基酸

为开发新的混合氨基酸分离技术,提出用双极性膜电渗析分离混合氨基酸的方法.在对混合氨基酸溶液中离子成分进行分析的基础上,预测了使用该法的可行性,并通过三室双极性膜电渗析法实验验证了理论计算的结果.对于等电点相差很大的谷氨酸和精氨酸以及等电点相差比较大的谷氨酸和甘氨酸以及精氨酸和甘氨酸两元混合物,可以实现很彻底的分离,得到纯度96%以上的产品,电流密度可以达到5～10 mA·cm-2. 对于等电点相差很小的丝氨酸和脯氨酸,则分离难度较大,电流密度在1 mA·cm-2以下.该法不需使用缓冲溶液,可提高分离过程的效率.     

竹叶青(Trimeresurus stejnegeri)蛇毒五种磷脂酶A2的分离纯化和氨基酸序列分析

用超细Sephadex G-75凝胶色谱和C4反相高效液相色谱从竹叶青（Trimeresurus stejnegeri）蛇毒中分离纯化5种磷脂酶A2，并分别命名为PLA2－I（SWISS－PROT，P82892）、Ⅱ（SWISS-PROT，P82893）、Ⅲ（SWISS－PROT，P82894）、Ⅳ（SWISS－PROT，P82895）、V（SWISS－PROT，P82896）。SDS－PAGE测定它们的分子量分别为14．0、15．8、15．0、14．0和14．0kDa。等电聚焦电泳测得PLA2－I、Ⅱ、Ⅲ呈碱性，等电点大于8．8；PLA2－Ⅳ和V呈酸性，等电点分别为5．2和4．7。PLA2－Ⅳ和V有水解卵磷脂活性。用自动Edman降解法测定了PLA2－V的全部氨基酸序列和PLA2－I、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的N－端部分氨基酸序列。PLA2－V由122个氨基酸残基组成，有14个Cys，并与其它来源的PLA2的氨基酸序列进行了比较。     

中华绒螯蟹卵巢新基因EJ05的全长cDNA克隆和序列分析

利用RACE技术从中华绒螯蟹卵巢获得了新基因EJO5（Eriocheir japonica ovary gene 5,EJO5)的全长rDNA序列(GenBank检索号：AY185921)．该cDNA序列长度为1425hp，开放阅读框为585bp，编码194个氨基酸．根据氨基酸序列计算的相对分子质量和等电点分别为22344和9．5．用生物信息学的方法未能得到对该基因功能预测的信息。     

过渡金属硒酸盐氨基酸配合物的合成

合成了过渡金属Cu,Mn,Ni硒酸盐的甘氨酸,赖氨酸,谷氨酸的配合物,用元素分析,摩尔电导,化学分析,红外光谱和差热－热重分析对其结构和组成进行了研究,分析了硒酸盐溶液PH值,氨基酸等电点对配合物组成的影响。     

抗铜酿酒酵母铜结合蛋白的纯化及性质研究

酿酒酵母Ｃｕ＾２＋抗株ＹＮＤ２１经含一定浓度的氯化铜培养基诱导培养后,收集菌体,破碎细胞,离心后ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０和ＤＥＡＥ－ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ柱层析分离可获得三种铜结合蛋白ＤＥ－１,ＤＥ－２,ＤＥ－３。ＤＥ－１脱盐后（Ｇ－１）经鉴定具有金属硫蛋白的特性：表观分子量约为１８ｋＤ;每分子蛋白含２０个巯基,结合１１个铜原子;氨基酸组成中富含半胱氨酸（１８％）、碱性和酸性氨基酸,而酪氨酸和蛋氨酸含     

蜡质芽孢杆菌酰基高丝氨酸内酯酶基因的克隆及序列分析

利用pMD18-T克隆载体从蜡质芽孢杆菌菌株T—HW3中克隆了酰基高丝氨酸内酯酶基因（AHL—lactonase，aiiA）。测序结果表明，该基因（GenBank登录号为DQ000643）由753个碱基组成，编码含有250个氨基酸残基的蛋白质。该蛋白质的推测的分子量为28kDa，等电点为4．235左右。核苷酸序列的BLAST分析结果表明，与之同源性较高的基因均为蜡质芽孢杆菌组aiiA基因（86％-99％）。     

角毛壳菌丝切蛋白基因的克隆和特性分析

在构建的角毛壳菌(Chaetomium cupreum)菌丝体cDNA文库中获得丝切蛋白(Cofilin)的ESTs序列片段,为研究角毛壳菌的生物特性,提高其生物防治效果,以角毛壳菌总RNA反转录产物为模板进行PCR扩增,成功获得了Cofilin基因cDNA序列.生物信息学分析结果表明,该基因全长468bp,编码155个氨基酸,编码蛋白理论分子量17kD,等电点是4.99,α-螺旋和无规则卷曲是其主要的二级结构,为亲水性蛋白质.该蛋白有6个位点发生Ser磷酸化,4个位点发生Tyr磷酸化,有4个保守区,ClustalX分析说明该蛋白与柄孢霉(Podospora anserina)和球毛壳菌(C.g lobosum)亲缘关系较近.     

钝顶螺旋藻中藻蓝蛋白的分离纯化及特性研究

为发展新型海洋药物,采用ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００凝胶层析和羟基磷灰石柱层析对人工养殖钝顶螺旋藻中的藻蓝蛋白进行了分离和纯化,得到了藻蓝蛋白纯品。测定了藻蓝蛋白的氨基酸组成和含量。藻蓝蛋白的紫外、可见吸收光谱表明其最大特征吸收波长为２７８,３６０,６２０ｎｍ。得到的藻蓝蛋白经等电聚焦显示为一条带,其等电点为ｐＨ＝４．３。还测量了藻蓝蛋白红外吸收光谱。研究所获得的藻蓝蛋白为后续开展临床应用提供了可靠的样品。     

药材甲热激蛋白基因SpHsp60的克隆及温度胁迫下的表达

本研究采用RT-PCR技术克隆了药材甲热激蛋白60(Heat shock protein 60,Hsp60)基因的cDNA全长序列,命名为SpHsp60(GenBank登录号:KX778623).氨基酸序列分析表明SpHsp60具有Hsp60基因家族高度保守的基序,实时定量PCR技术检测了不同温度胁迫后该基因的表达量,结果表明:-5℃和0℃低温处理2h,药材甲成虫体内的SpHsp60的表达量均显著高于对照组,且42℃高温处理2h后的表达量也显著高于对照组.说明SpHSP60与药材甲应对极端温度胁迫相关.     

斑马鱼3种胰蛋白酶原基因的克隆、序列分析及组织表达

 胰蛋白酶是丝氨酸蛋白酶类超家族成员之一,在动物蛋白消化中起着重要作用。为深入研究胰蛋白酶在鱼类中的蛋白结构和生理功能,利用RT-PCR和RACE方法,成功获得了斑马鱼3种胰蛋白酶原cDNA序列(zftry1a、zftry1b和zftry2)。结果表明,zftry1a和zftry1b均有242个氨基酸残基组成,其中包括15个氨基酸的信号肽和5个氨基酸(LDDDK)的激活肽。zftry2由247个氨基酸残基组成,其中包括15个氨基酸的信号肽和9个氨基酸(APLGDDDDK)的激活肽。氨基酸序列比对结果显示,三者具备胰蛋白酶原的保守结构特征,如含有催化三联体氨基酸(His-57、Asp-102和Ser-195),12个半胱氨酸,位于底物结合口袋底部Asp-189和口袋开口处的Gly-216、Gly-226等。进化树结果显示,斑马鱼zftry1a和zftry1b属于group I,为阴离子胰蛋白酶原;斑马鱼zftry2属于group II,为阳离子型胰蛋白酶原。RT-PCR结果显示,三者组织分布模式类似,且在肠中有最高表达量。这些结果为研究鱼类胰蛋白酶原的基因进化和功能以及进一步探讨鱼类消化生理的分子机制奠定了基础。     

人H NRN PA1基因及蛋白质的生物信息学分析

采用生物信息学的方法分析人HNRNPA1基因的启动子情况及蛋白质的理化性质、信号肽及NLS、亲疏水性、跨膜区域、蛋白质结构、相互作用的蛋白质及GO注释.选择合适软件对HNRNPA1相关信息进行分析.结果显示,预测的HNRNPA1基因存在1个启动子;HNRNPA1蛋白质是由372个氨基酸组成的具有NLS、无跨膜结构的亲水不稳定蛋白质,其等电点为9.17;哺乳动物中氨基酸序列高度保守;二级结构以无规卷曲为主,预测的三级结构经拉曼图分析可信度高;HNRNPA1多定位于细胞核,与RNA的选择性剪接及mRNA运输有关.此外,启动子的甲基化对HNRNPA1表达影响明显,其蛋白质具有NLS、无跨膜结构且不稳定,属于亲水蛋白质,分布于细胞核,对mRNA的成熟具有重要作用.     

曲霉型糖化酶等电点的理论计算

该文介绍了一种根据蛋白质的氨基酸组成,应用计算机数据处理技术从理论上计算蛋白质、酶及多肽的等电点的新方法。和传统的生物化学研究方法相比,该法不仅简单、方便,而且结果可信度较高,除对已知其pI的蛋白质或酶的实测值印证外,还可预测蛋白质或酶的等电点。这在蛋白质化学、酶学等研究领域具有一定应用价值。文中计算了8种曲霉型糖化酶的pI,计算结果和文献报道基本吻合。