一种蛙病毒的纯化和酶切分析

从患病虎纹蛙（Rana tigrina rugulosa)蝌蚪中分离得到一种蛙病毒,感染鱼的FHM、CO、EPC细胞,获得大量的病毒原料,分离纯化得到高纯度的病毒粒子,电镜下可见病毒粒子为二十面体,具囊膜,直径平均为125nm。抽提病毒核酸,对其基因组DNA进行酶切分析,病毒基因组为双链DNA分子,表现脊椎动物虹彩病毒基因组的特点即其胞嘧啶5′端高度甲基化。以限制性内切酶XbaⅠ、BanHⅠ、HindⅢ、KpnⅠ和PstⅠ酶切病毒基因组DNA,经电泳分离后,分别得到13、25、6、14、22条清晰的酶切片段,并根据酶切片段算得基因组的大小超过100kb。用PCR方法,得到这个病毒的主衣壳蛋白（MCP）基因保守序列,与FV3相比,同源性达98％。     

芹菜夜蛾核型多角体病毒D克隆株DNA片段的克隆与鉴定

实验提取芹菜夜蛾核型多角体病毒D克隆株DNA，5种限制性内切酶消化，并对Eco RⅠ酶切片段进行分子克隆．结果表明，芹菜夜蛾核型多角体病毒D克隆株分子量为113．78kb；实验成功克隆出10个病毒DNA Eco RⅠ酶切片段．上述结果为芹菜夜蛾核型多角体病毒D克隆株的分子生物学分析提供了基础材料．     

茶毛虫核型多角体病毒DNA性质的研究

本文报道了对茶毛虫核型多角体病毒蒙山株系(EpNPV-M)核酸性质研究的结果。EpNPV-M含双链DNA分子,含量为6.85μgDNA/mgPIB,提纯的DNA具典型的紫外线吸收特性,琼脂糖凝胶电泳证明DNA分子是大小均一的。DNA的(G+C)％为36.6,限制性片段积加法测得该DNA分子量为75.61×10~6道尔顿,109.57Kb,电镜法测得DNA分子长度为35.8μm,相当于分子量为74.1×10~6道尔顿,107.4Kb.电镜观察证实该病毒含有一些超螺旋环状DNA分子。建立了三种限制性内切酶对该DNA的酶切图谱。三种酶的酶解片断数为:EcoRI,27个;BglⅡ,15个;BamHI,9个。     

西昌杂毛虫多角体病毒的分离和形态研究

1981年从罹病的西昌杂毛虫(Cyclophragma xichangensis)幼虫体中,分离到一种包涵体病毒。多角体直径为1.895±0.805μm,病毒束直径为146±37nm。病毒束内有1～10个核衣壳。包埋在多角体内带囊膜的病毒粒子杆状,大小为74±10×275±25nm,经弱减处理而游离的病毒粒子杆状,大小为56.3±3.7×465±34.5nm。游离病毒粒子仅及包埋在多角体蛋白质晶格中病毒粒子的71％,据此认为,观测多角体超薄切片中病毒粒子比观测游离病毒粒子更接近其真实形态大小。西昌杂毛虫多角体病毒,为我国首次发现,国外未见报道。     

四种昆虫病毒基因组DNA限制性内切酶图谱分析

应用限制性内切酶图谱分析,结果ＤＮＡ单分子层和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交方法,对黄地老虎颗粒体病毒,甘兰菜粉蝶颗粒体病毒,三叶草夜蛾颗粒体病毒和荨麻蛱蝶核型多角体病毒等四种杆状病毒提取基因组ＤＮＡ用９处限制性内切酶酶切,得到不同的酶切图谱使其在基因型上进行区分,通过ＤＮＡ单分子展层发现其核酸链都呈闭环和超螺旋构型,用＾３２Ｐ标记ＡｕＮＰＶ与ＧＶ杂交,没有发现与ＧＶ的同源性。     

油桐尺蠖核型和木(木尞)尺蠖核型多角体病毒的限制性内切酶分析

油桐尺蠖核型多角体病毒(BsNPV)、木(木尞)尺蠖核型多角体病毒(CpNPV)和用CpNPV感染油桐尺蠖幼虫面得到的病毒CpNPV-Bs,三者经HaeⅢ酶解后的电泳图谱均一致,经HindⅢ酶解后,均获得11条片段。各病毒DNA的总分子量约为57.5×10~6D。本文初步认为BsNPV和CpNPV为同一种病毒。     

家蚕核型多角体病毒gp64基因的定位及克隆

以苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒ＡｃＭＮＰＶ的膜表面糖蛋白基因ｇｐ６４作为探针，对经不同内切酶酶切的家蚕核型多角体病毒基因组ＤＮＡ进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析，发现ＢａｍＨⅠ酶切产生的４．２ｋｂ和７．６ｋｂ片段呈阳性杂交，经ＤＮＡ片段回收，将４．２ｋｂ片段进行了克隆     

绿尾大蚕蛾核型多角体病毒DNA抽提与鉴定

绿尾大蚕蛾(Actias selene ningPoana Felder)核型多角体病毒DNA(As NPV DNA),用酚-SDS法从病毒粒子中抽提。紫外吸收光谱测定最高和最低吸收值分别在258nm和232nm处。在0.7％琼脂糖凝胶电泳中,NPV DNA呈均一片段,经测定其T_m值为86℃,G C含量为41％。抽提的DNA经注射寄主幼虫,有一定的感染活性,感病虫表现核多角体病的典型症状。     

茶毒蛾核多角体病毒的超微结构

对一株感染力较强的茶毒蛾(Cifuna sp.)核多角体病毒(NPV),曾作过组织切片的观察,本文又进一步作电镜扫描及超薄切片的研究,发现它为大小不整齐而中小形居多的各种形状的多角体,其中病毒粒子为单粒包埋型,多角体外包有厚约17.3nm 的膜。多角体蛋白晶格,明显表现为线型及点型,夹角相交为60°和120°,相邻两晶格中心距约72.8(?)。在多角体切面中可见病毒粒子最多达79粒,最少只2—3粒,均为杆状,有的微弯,而两端钝园,大小约为336.7×79.62nm.由多角体溶解释放出来的病毒粒子,较多角体切面中的稍细长,约379.2×45.5nm.病毒粒子的切面,其DNA 核心为288.2×36.4nm,包有厚约91(?)的外膜及厚约79.8(?)的内膜,两膜之间的空隙为45.5(?)。本文还讨论了多角体膜及蛋白分子的超微结构.     

鹅源腺病毒全基因组DNA酶切片段的克隆

利用1株鹅源腺病Y81G4株,经鹅胚增殖后收获尿囊液,用差速离心法纯化病毒子并提取病毒基因组DNA,病毒DNA经Hind Ⅲ酶切后共产生10个片段,分别回收各酶切片段,与经Hind Ⅲ单酶切的pUC18连续,获得8个不同的重组质粒。对于未克隆到的两末端片段,经碱处理去除末端蛋白后,以平端和HindⅢ粘端与经SmaⅠ和 HindⅢ双酶切的pUC18连接,获得了重组质粒pGAHC和pGAHI。克隆的各酶切片段,通过酶切电泳和Southern blotting结果鉴定,证明已分别克隆到该病毒基因组DNA HindⅢ酶切片段,且各酶切片段大小之和约为32．9kb.     

珠鸡mtDNA的限制性图谱

应用AvaⅠ，BamHⅠ,BglⅠ,DraⅠ,EcoRⅠ,HpaⅠ,PvuⅡ,SacⅠ,SalⅠ,ScaⅠ和StuⅠ共11种限制酶对珠鸡（Acryllium vulturinum)mtDNA进行单酶切分析，结果表明，珠鸡mtDNA的分子量为16.7kb，另以其中除AvaⅠ和StuⅠ外的9种限制酶进行双酶切分析，构建了珠鸡mtDNA的限制性图谱，并与家鸡（Gallus gallus domesticus)比较，二者mtDNA序列歧异值为0.073。     

丹酚酸B-聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒的制备及其体外评价

用乳化聚合法制备丹酚酸B-聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒(Sal B-PBCA NP),以吐温80和PEG 20000制备了Sal B-PBCA NP的两种包衣产物T1P0、T1P1,并考察其体外释药特性。结果表明:Sal B-PBCA NP纳米粒平均粒径99.2 nm,包封率为46.55%,载药量0.792%;Sal B-PBCA NP、T1P0、T1P1在48 h后分别累积释放(76.15±0.69)%、(63.72±1.80)%、(47.09±5.72)%;体外释药结果均符合Weibull方程。与未包衣的Sal B-PBCA NP相比,以吐温80和PEG 20000包衣的T1P1具有明显的缓释作用。     

用加端PCR技术改造h－IGF－1cDNA

用ＤＮＡ合成仪合成了分别带有ＰｓｔＩ位点和ＳａｌＩ位点及终止密码子的２个用于扩增ｈＩＧＦ－１ｃＤＮＡ的ＰＣＲ引物．利用合成的引物，７００ｂｐ长的ｈＩＧＦ－１ｃＤＮＡ模板和Ｔａｑ聚合酶进行ＰＣＲ扩增．扩增产物经电泳鉴定后克隆进Ｍ１３ｍｐ１８载体，进行核苷酸序列分析．结果显示：ＰＣＲ产物含已发表的ｈＩＧＦ－１成熟蛋白的编码序列和５＇端的ＰＳｔＩ位点及３＇端的ＳａｉＩ位点及终止密码ＴＡＧ．用加端ＰＣＲ技术成功地扩增和改造了ｈＩＧＦ－１的编码序列．     

基于PCR-RFLP的西洋参和人参指纹特征鉴定

目的建立西洋参与人参限制性片段长度多态性聚合酶链式反应(polymerase chain reaction restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)的鉴定方法.方法采用改良的CTAB法从西洋参和人参中提取基因组DNA.应用生物信息学软件设计西洋参与人参核糖体DNA ITS序列的特异性引物,利用PCR技术对指定序列进行扩增,并通过RFLP方法酶切后进行指纹图谱的鉴别比较.结果提取西洋参与人参基因组DNA19 kb,并扩增核糖体122 bp大小的基因片段,经酶切后西洋参为80 bp和42 bp长度的两条片段,而人参仍然为122 bp长度的单一片段.结论西洋参与人参DNA具有特异性酶切位点,可作为西洋参与人参鉴定的有效方法,该方法简便快速,结果可靠.     

大黄鱼(Larimichthys crocea)fAFLP方法的建立

以大黄鱼为材料,探索及优化了影响荧光标记AFLP(fAFLP)分析体系的主要因素.结果表明:内切酶EcoRⅠ与MseⅠ各0.35 U,双酶切350 ng大黄鱼基因组DNA,依次反应4 h可得最佳效果;T4DNA连接酶2.5 U,16℃过夜连接3μL酶切产物与接头时效果最佳;以1μL连接产物作底物,EcoRⅠ与MseⅠ预扩引物分别为0.3μmol/L与1.5μmol/L时预扩效果最佳;预扩产物稀释超过100倍作为选择性扩增的模板时致使某些样品的电泳条带缺失.使用该体系分析了一个野生大黄鱼群体的AFLP片段的多态水平,结果证明该方法简便有效,可用于群体遗传多态性分析.     

基于壳聚糖纳米颗粒的基因枪法转化洋葱细胞研究

以交联法制备壳聚糖纳米颗粒,用透射电子显微镜和Zeta电位仪对壳聚糖纳米颗粒进行表征,发现颗粒呈球形,粒径约为50rim,微球表面光滑、球形团整、颗粒比较均匀、分散性好,电位约为11．1mv;琼脂糖凝胶电泳结果显示,壳聚糖纳米颗粒能有效地结合质粒DNA,并能保护所结合的DNA防止DNaseⅠ的酶切;将含GFP基因的壳聚糖纳米颗粒复合物使用基因枪转化洋葱表皮细胞,在倒置荧光显微镜下观察,发现细胞表达了绿色荧光蛋白,表达效率为8％．     

Dissection of SARS Coronavirus Spike Protein into Discrete Folded Fragments

Introduction Severe acute respiratory syndrome coronavirus (SARS-CoV), which is the causative agent of the atypical pneumonia, was first identified in the fall of 2002 to be a previously unknown member of the family of coronaviruses[1]. The rapid transmis…     

籼稻姊妹染色单体粘着蛋白OsRad21-i基因的原核表达载体构建与表达

 以杂交水稻汕优63的根组织cDNA为模板,采用引物设计引入酶切位点和RT-PCR方法,扩增出了籼稻姊妹染色单体粘着基因OsRad21-i (AY318757)开放阅读框（ORF）,命名为Eqfr,两端分别带有BamHⅠ和SalⅠ限制性位点。然后克隆到pGEM-T载体,将重组克隆载体pGEM-T-Eqfr与表达载体pQE30分别同时进行BamHⅠ和SalⅠ双酶切,连接酶切后的Eqfr和pQE30,并转化DH5α感受态细胞,获得了DH5α［pQE30-Eqfr］重组克隆。再以其重组质粒转化M15［pREP-4］感受态细胞,筛选出M15［pQE30-Eqfr, pREP-4］重组克隆。通过诱导表达,检测到了相对分子质量约为116 000的重组蛋白表达,在诱导后的1～3 h里表达量较高,之后表达量开始下降。用实验证实了理论推测ORF的正确性,所获得的表达蛋白及其表达体系为下一步的蛋白质实验奠定了基础。     

A five-fold pig bacterial artificial chromosome library: a resource for positional cloning and physical mapping

A pig BAC library was constructed with genomic DNA from a male Erhualian pig. After partial digestion with Hind III or BamH I the fragments obtained were cloned into the pBeloBAC11 vector. The library consists of 184320 clones which stored in 480 pieces 384-well plates (20 plates per superpool). A two-step 4-dimension PCR screening system was established to screen the positive clones. An average insert size of 128 kb was estimated from 105 randomly isolated clones, which indicates that the library is more than five times of genomic coverage. For the demonstration of the probability to pick out any unique genes or DNA markers from the library, 10 single-copy genes were screened out and the positive clones were yielded between 1 and 8 with an average of 3.6. Positive superpools were obtained for 32 microsatellite markers selected from different regions of pig genome. The number of positive superpools for each marker varies from 1 to 9 with an average of 4.78. This BAC library provides an additional resource for pig physical mapping and gene identification.