蚯蚓纤溶酶研究与应用进展

蚯蚓纤溶酶作为新一代口服溶栓药物已试用于临床。对蚯蚓纤溶酶的生化及药理性质的研究日益深入。概述了蚯蚓纤溶酶的生化特性、药理性质和临床应用研究的最新进展。     

蚯蚓纤溶酶研究进展

蚯蚓纤溶酶是蚯蚓体内含量十分丰富的一种血纤维蛋白水解酶。自1982年日本宫崎医科大学美原恒首先报道蚯蚓体内存在这种酶以来,我国兰州大学:中科院生物物理所、中科院上海生化所、渝州大学、北京大学以及清华大学、山西医学院等单位,相继对蚯蚓纤溶酶的分离纯化工艺、理化性质、生物学活性等方面都进行了广泛的研究。现就研究的进展情况,结合本人的工作介绍如下。     

蚯蚓纤溶酶与“龙心”的比较研究

以北星二号蚯蚓为材料,分离纯化蚯蚓纤溶酶。并对其理化性质、溶纤机理等与“龙心”进行了比较。蚯蚓纤溶酶和“龙心”主要组份的分子量分别为37200和43500。蚯蚓纤溶酶和“龙心”的溶纤比活力(mm~2/mg蛋白)分别为83700和24430蚯蚓纤溶酶既能直接水解血纤维蛋白,又能激活血纤溶酶原。在0—4℃时也能水解血纤维蛋白。蚯蚓纤溶酶经DEAE-Sepharose离子交换柱层析,可分离为9个纤溶活力不同的组分。     

蚯蚓类纤溶酶与“龙心”的比较研究

以人工饲养的北星二号蚯蚓(Esenia foelida)为材料,分离纯化蚯蚓类纤溶酶,并与“龙心”进行了比较,该酶可分离为9个纤溶活力、水解BAEE活力等各不相同的组分,其纤溶性质与“龙心”相似,既能直接水解血纤维蛋白,又能激活血纤溶酶原。     

蚯蚓纤溶酶的提取、性质鉴定和溶介血栓的研究

从不同品种蚯蚓中提纯了两种以上纤溶酶,具有强烈的溶介纤维蛋白的作用.测定了此酶在蚯蚓体内的活性分布、鉴定了它的各种物化性质,如最适 PH、合适操作温度、PH 和温度稳定范卫、分子量、等电点等.测定了它对多种底物的作用,被各种抑制剂抑制的程度,说明此酶很可能是含金属的胰蛋白酶类酶.做了此酶的溶血栓作用、药理毒理试验,证明长期口饲动物是安全无毒的,有希望作为新溶栓药应用于临床.     

蚯蚓纤溶酶热稳定性的研究

在37～65℃范围内对蚯蚓纤溶酶的热稳定性进行了实践研究。表明:蚯蚓纤溶酶的干燥粉末热稳定性好且耐贮藏。据实验预测其有效版为11年。     

蚯蚓纤溶酶同工酶的分析

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）分析了赤子爱胜蚓和秉氏环毛蚓的两个不同部位的纤溶酶同工酶酶谱。表明纤溶酶主要存在于蚯蚓的内容物中,秉氏环毛蚓内容物中的纤溶酶种类多于赤子爱胜蚓。提示用秉氏环毛蚓内容物提取蚯蚓纤溶酶,效果较好。     

壳聚糖固定化蚯蚓纤溶酶及其性质

以壳聚糖为载体,戊二醛为交联荆,用吸附交联法固定蚯蚓纤溶酶,对蚯蚓纤溶酶的固定化条件及固定化酶的各种性质进行了研究,确定了酶固定的最适条件:1 g用pH为6.5的磷酸盐缓冲液浸泡的壳聚糖载体与5 mL体积分数为1%戊二醛在25℃交联8 h,充分洗去戊二醛之后,加入蚯蚓纤溶酶13 U,4℃吸附6 h,充分洗去未交联的游离酶,酶活力回收最高大约为63%,固定化酶的比活为0.082 U/mg.固定化酶,游离酶的最适温度均为50℃,游离酶的最适pH值为8.5,而固定化酶的最适pH值为8.0,固定化酶的热稳定性,pH稳定性均比游离酶有所提高,游离酶、固定化酶都能水解纤维蛋白原和纤维蛋白,固定化酶不再水解BSA.     

磁性蚯蚓纤溶酶脂质体的制备

用超声法将磁流体和蚯蚓纤溶酶同时包入脂质体中,形成一种具有磁导向性能的溶栓药物──磁性蚯蚓纤溶酶脂质体。纤溶酶包封率达80％以上。在磁场作用下该脂质体定向聚集在血栓周围,脂质体破坏后释放出来的纤溶酶可以将血栓完全溶解。还介绍了一种简便、快速制备磁流体的方法。本系统对于制备水溶性药物的磁性脂质体可能有一定通用性。     

大平2号蚯蚓纤溶酶酶活的测定

本文以大平2号蚯蚓为材料,制作了纤溶酶纤维蛋白水解活性测定曲线及纤维蛋白溶酶原浓度选择曲线,确定了酶活的最佳测定范围扣测定条件。测定结果表明:大平2号蚯蚓所产生的纤溶酶具有很强的纤维蛋白水解活性和纤维蛋白溶酶原激活活性,是一种很有希望的溶栓药物。     

蚯蚓纤溶酶的分离纯化工艺研究

以人工饲养的北星二号蚯蚓为材料,通过对14种进口和国产离子交换树脂和 DEAE-纤维素的筛选试验和比较研究,确定了蚯蚓纤溶酶的分离纯化的较佳工艺:组织匀浆或磷酸缓冲液保温提取→Amberlite IRA 904或 DEAE-纤维素离子交换柱层析分离→Sephadex G 100或 Sephadtx G 75凝胶层析纯化→真空冷冻干燥得蚯蚓纤溶酶冻干粉。该工艺所需设备简单,操作方便,适合中,小工厂生产     

以壳聚糖为基质对蚯蚓纤溶酶进行亲和层析

蚯蚓纤溶酶(Earthworm fibrinolytic enzymes)有多种同工酶,分离纯化相对比较困难.我们采用壳聚糖作为基质,大豆胰蛋白酶抑制剂为配体,戊二醛为偶联剂,分别研究了酸性和碱性条件下对蚯蚓纤溶酶的纯化效果.实验表明经壳聚糖为载体所制备的亲和吸附剂对蚓激酶具有较高的分离纯化选择性.并且在酸性条件下提取比在碱性条件下提取所得同工酶要少.     

脉孢菌纤溶酶的纯化和性质初步研究

应用超滤、盐析、凝胶过滤和疏水相互作用层析对脉孢菌产纤溶酶初步纯化后,活性电泳证实获得单一的纤溶活性组分。对该纤溶组分的基本酶学性质作了进一步的研究,结果表明该纤溶酶的最适作用温度和最适pH分别是46℃和7.8,在40℃以下和pH6.2~7.8时稳定,该纤溶酶具有直接和间接的纤溶活性。     

蚯蚓纤溶酶壳聚糖微球的制备及性质

以蚯蚓纤溶酶为生物大分子模式药物,研究壳聚糖载药微球的制备方法及对药物活性和稳定性 的影响.以壳聚糖为原料,采用超声乳化交联法制备壳聚糖微球,分别吸附和包埋蚯蚓纤溶酶.在油水体积比 15/1,搅拌转速800 r/min,1 mL戊二醛作为交联剂,超声处理5 min条件下乳化交联制备微球,包埋法具有 较高的栽药率和...     

蛹虫草纤溶酶酶学性质的初步研究

对蛹虫草纤溶酶的酶学性质进行了研究,结果表明,其纤溶活性随温度(≤45℃)的升高和保温时间的延长,逐渐下降,当温度超过50℃时,则随温度的升高和保温时间的延长急剧下降;蛹虫草纤溶酶的最适pH为7.0,在碱性条件下纤溶活性相对稳定;金属离子Ca2+和Fe2+对蛹虫草纤溶酶的活性有显著激活作用;抑制剂中PMSF对蛹虫草纤溶酶活性的抑制作用较小,而Aprotinin、EDAT和EGTA对其纤溶活性均有较显著的抑制作用,说明蛹虫草纤溶酶可能不同于之前报道的纳豆激酶(丝氨酸蛋白酶),而是一种全新的蛋白酶,但对这一点还需要进一步的研究验证.     

蚓激酶提取条件的优化与酶活性测定

蚯蚓纤溶酶是目前较为理想的溶栓药物之一,具有广泛的临床应用前景。采用盐析法从蚯蚓中提取蚓激酶,通过采用考马斯亮蓝G-250染色法间接地测定蚓激酶活性,优化出最佳的提取条件。结果显示,蚓激酶的提取最佳PH为7.5-8.0,二次盐析硫酸铵饱和度应在80%以上。     

凝血酶在纤溶过程中的动力学作用与影响

在生化实验的基础上，利用数值模拟初步研究了纤维蛋白溶酶在凝血过程中的动力特征作用，并研究了凝血酶与纤溶酶在生化反映中的相互关系，得到了一些新的结论，这些结论将为血液学与临床实践提供有益的启示，同时也显示出数值模拟方法的实用性．     

蚯蚓纤溶酶总RNA的提取及电泳分析

分离提取纯净完整的RNA对于分子克隆实验是很重要的,而且是进行基因表达分析的基础。本实验通过总RNA纯化试剂盒(V-gene Total RNA Purification Kit)从蚯蚓体内提取蚯蚓纤溶酶总RNA,为下一步进行RT-PCR等分子克隆实验打下了基础。     

抗凝血蛋白药物的研究进展

除了血液中的抗凝因子外，自然界中还存在大量具有抗凝活性的生物大分子，如水蛭素、蚯蚓纤溶酶等．基础研究证实这些抗凝刑的作用一般是通过三方面得以实现：一是抑制凝血酶及凝血酶活化因子活性；二是水解血纤维蛋白或纤溶酶原；三是抑制血小板凝聚．由于这些活性物质具有高效的抗凝、溶栓作用，它们极有可能发展成治疗血栓性疾病的药物．     

血栓溶解的分子机理和临床治疗研究进展

由血栓引起的血管栓塞病已成为严重危害人类健康,威胁人类生命的疾病之一。近年来国内外对纤溶酶原激活因子或纤溶酶的溶纤机理和临床应用等方面都进行了大量的研究。现就研究进展情况综述如下。