鹿茸多肽的分离纯化及药理活性

采用凝胶过滤层析、 离子交换层析以及高效液相方法, 从马鹿鲜鹿茸分离得到了一种多肽, 其在SDS-PAGE电泳上显示为一条带, HPLC图谱为单峰, 质谱显示其相对分子量为3　095.1. 氨基酸组成分析结果表明, 此多肽主要含有缬氨酸、 丙氨酸、 赖氨酸和 甘氨酸, 没有半胱氨酸. 经FDNB法测定, 其N-末端氨基酸为缬氨酸. 活性检测表明, 该多肽能够明显促进表皮细胞和BRL肝细胞株的增殖.     

红豆中几丁质酶的纯化与表征

利用硫酸铵沉降、离子交换色谱CM-Sephadex C-50、凝胶过滤色谱Sephadex G-75以及高效液相色谱(HPLC)Poros HS-20,从红豆种子中分离纯化出一种具有抗真菌活性的几丁质酶.SDS-PAGE显示还原与非还原状态下该蛋白分子质量分别为27.7和22.7 kDa,这表明该几丁质酶分子内含有二硫键.该酶比活为14.57 U/mg,最适反应pH为5.4,最适反应温度为50℃.它对棉花枯萎病菌、甜瓜枯萎病菌与瓜果腐霉病菌等真菌有明显的抑制作用.     

蕲蛇毒中抑制ACE活性组分的分离纯化与表征

蕲蛇粗毒流经强阴离子交换色谱POROS 2 0HQ柱 ,经毛细管电泳仪检测 ,5个蛋白峰具有ACE抑制活性 ,对最强的活性峰进行PAGE切割电泳的分离 ,得到 3条带 ,经检测只有第三条带 (AI - 3)具有ACE抑制活性 .该组分的分子量为 2 0 2 0 0 (非还原 ) ,加DTT处理后 ,分子量为 2 590 0 .其IC50 为 0 .10mmol/L .     

苦瓜籽中抗真菌蛋白MAP13的分离纯化与表征

将苦瓜籽粗提液分别经阴离子色谱柱、阳离子色谱柱交换后,得到一个具有抗真菌活性的蛋白MAP13.该蛋白经鉴定达到电泳纯,相对分子量为12.7 kDa.经还原剂处理后,电泳结果表明该蛋白由分子量分别为7和6 kDa的两个亚基组成,亚基之间通过二硫键连接.体外抑菌实验表明该蛋白对苹果轮纹病菌、瓜果腐霉病菌和棉花枯萎病菌具有较强的抑制作用.     

黑曲霉发酵粉中一种β-葡萄糖苷酶的分离纯化与表征

黑曲霉发酵酶粉通过硫酸铵分级沉淀、SephadexG-25脱盐、再通过两步DEAE-TOYOPEARL650M弱阴离子交换色谱,分离得到一个新的电泳纯的β-葡萄糖苷酶.该酶对水杨素的比活力为597.12IU mg,并对其专一,不能水解棉花和羧甲基纤维素钠;DTT处理前后分子量均为117.5kDa;最适pH和温度分别为4 5和70℃;在pH5.0、50℃下对水杨素钠的米氏常数Km为3.73mg mL,最大反应速率Vm为0.088mg葡萄糖 (mL·min).     

动物脑组织中钙调蛋白的分离纯化

本文主要以动物脑组织为材料,经热变性、离心、葡聚糖SephadexG-50分离纯化,通过紫外吸收图谱、二步酶解法检验钙调蛋白的纯度、浓度。结果显示,利用本法可分离纯化得到的钙调蛋白对PDE的激活倍数为83.3,比标准的钙调蛋白(对PDE的激活倍数为67.4)更具生物活性.     

鹿茸中几种醚溶性成分的分离与鉴定

本文是关于从鹿茸(Cornu Cervi)的脂溶性组分分离鉴定得到胆固醇、十八碳酸乙酯和十七碳酸乙酯的报导。 1原料、仪器及层析条件 1.1原料 鹿茸系采用传统水炸风干法加工干燥的花二杠整支干茸(吉林省双阳县第三鹿场提供)。经粉碎,研磨,过60目筛。外观为棕灰色。 1.2仪器 Nicolet-5DX-FT红外光谱仪;FINNIGAN MAT-4510型色谱质谱联用仪(附     

魔芋生物碱的纯化与结构表征

魔芋飞粉通过 95 %工业酒精提取 ,三氯甲烷和正丁醇分别萃取后 ,进行氧化铝干柱层析和高效液相色谱层析纯化获得了纯样品Ⅰ ,Ⅱ .对纯样品Ⅰ进行了傅里叶红外 (IR)、氢核磁共振 (1HNMR)、质谱 (MS)分析 ,并对其图谱进行解析 ,推断样品Ⅰ是一种 5—甲基咪唑的衍生物 .     

混合异养螺旋藻中藻蓝蛋白的分离和纯化

为了从螺旋藻中分离和纯化藻蓝蛋白,研究了一种采用硫铵分步盐析,离子交换层析和凝胶过滤层析的分离纯化方法,在硫酸铵分步盐析中,通过对沉淀物的吸收光谱扫描发现,３００ｇ／Ｌ的硫酸铵溶溶能很好除去杂蛋白,而５００ｇ／Ｌ和６５０ｇ／Ｌ的硫酸铵溶液能较好离ｃ－蓝蓝蛋白和别藻蓝蛋白。     

鹿角盘蛋白的分离纯化与活性研究

通过超微粉碎技术使坚硬的鹿角盘粉碎,再运用生物化学技术,经过浸提、盐析、透析、分子筛层析等生物技术,分离纯化出一种鹿角盘蛋白APPB,然后通过动物实验考察其活性作用.经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,检测其分子质量在20.1～31.0 KD之间,通过动物活性实验证明,分离得到的鹿角盘蛋白有一定的抗炎镇痛作用.     

CAV-1感染MDCK中各IFN及受体分子表达谱的差异

目的 分析犬肾细胞系(MDCK)感染犬腺病毒1型(CAV-1)后各种干扰素(IFN)亚型及其受体分子转录水平的表达情况。方法 建立犬 IFN-β、IFN-β 受体(IFNAR1)、IFN-λ1、IFN-λ1 受体(IFN-λ1R)、IFN-λ3 和 IFN-λ3 受 体(IFN-λ3R)的染料法定量PCR方法,分析了 MDCK在Poly I：C处理和接种CAV-1后细胞内各IFN及受体分子转录水平的相对含量。结果 正常MDCK细胞内存在较高含量的IFN-X3R且含量显著高于其他IFN及受体分子的 转录水平;用Poly I：C处理MDCK细胞24 h后,IFN-X1R、IFN-X3和IFN-X3R的表达量均显著性上调,而IFN-λ1R、IFN-λ3和IFN-λ3R几乎没变化;接种CAV-1后,IFN-α的含量急剧上升至6倍。结论 MDCK细胞存在不同水平浓度的 IFN分子及其受体转录产物,且在Poly I：C刺激和腺病毒感染时受体分子的表达谱不同。     

绿豆几丁质酶的纯化和酶学性质分析

利用亲和色谱Affi-gel和离子交换色谱SP-Toyopearl从绿豆种子中分离纯化出几丁质酶.纯化的蛋白通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定达到电泳纯,分子质量为30.8kDa.还原和非还原状态下的几丁质酶蛋白均显示单一区带,说明该几丁质酶为单倍体蛋白.通过等点聚焦法测得pI为6.3.该酶的最适pH为5.4,最适反应温度为40～50℃.     

人类TBC1D7蛋白的表达纯化及其在mTOR通路中的作用机制研究

mTOR信号通路在真核细胞代谢调控中发挥着关键的调控作用,该通路核心元件mTORC1复合物的活性受其上游TSC复合物负调控,TSC复合物包括TSC1、TSC2、TBC1D7三种蛋白.以TBC1D7蛋白为研究对象,通过氨基酸序列比对显示多物种来源的TBC1D7蛋白具有较高的保守性,且蛋白三维结构分析证实其分子表面存在高度保守区域.随后,构建了人类TBC1D7蛋白原核表达载体并在大肠杆菌中表达得到全长TBC1D7蛋白,经过酶切去除标签和凝胶排阻层析得到了高纯度TBC1D7蛋白.另一方面,通过在HCM细胞中对TBC1D7进行敲降和过表达,证实了TBC1D7的表达会直接升高mTORC1的活性;反之,升高TBC1D7的表达则会抑制mTORC1的活性.本研究表达和纯化了人类TBC1D7蛋白,并探讨了在人类心肌细胞中TBC1D7的表达与其下游mTOR信号通路之间的联系,为人类TBC1D7蛋白和mTOR信号通路的进一步研究打下了良好基础.     

半夏中一种抗癌蛋白的纯化及其抗癌活性研究

经硫酸铵分级沉淀、疏水层析和DEAE离子交换层析3种方法从新鲜半夏块茎中分离纯化出一种具抗肿瘤作用的蛋白,命名为APPT,用MTT法、载瘤小鼠实验和流式细胞术研究其抗肿瘤作用.结果显示:APPT是一种分子量大小为12.09 ku的糖蛋白,其含糖量为3.22％;MTT实验结果表明APPT对Sarcoma 180细胞有一定的细胞毒性,同时载瘤小鼠实验证明APPT能明显抑制载瘤小鼠中肿瘤的生长,当APPT处理剂量为0.85 mg/kg、2.30 mg/kg及3.25 mg/kg体重时,其抑制率分别为15.6％、32.1％、36.2％;流式细胞仪结果显示APPT不能诱导Sarcoma 180细胞凋亡,却能抑制Sarcoma 180细胞DNA的合成起始并将大量细胞同步于G0/G1期.表明APPT是半夏总蛋白中具有抑癌活性的成分之一,APPT通过抑制肿瘤细胞DNA合成的起始进而阻止肿瘤细胞增殖而不是诱导细胞凋亡.     

兔血铜锌超氧化物歧化酶的纯化及其性质

用乙醇－氯仿处理，丙酮分级沉淀，ＤＥＡＥ－纤维层析等方法，从兔血红细胞中纯化出铜锌超氧化物歧化酶，产率为５１％，比活力为１２４３０ｕ／ｍｇ．该酶经冷冻干燥后呈淡蓝色，天然状态，下该酶的分子量约为３００００，由相同的两个亚基组成，紫外扫描表明纯酶在２６５ｎｍ处有最大光吸收值，经聚丙烯酰胺凝胶电泳后，用蛋白染色及ＮＢＴ活性染色均显示出三条带，结果表明用该纯化方法得到的ＳＯＤ为均一性纯酶，氨基酸组成显示     

细胞毒性T细胞抗原4胞外结构域的高效表达与纯化

目的:获得细胞毒性T淋巴细胞相关分子4胞外结构域(exCTLA4)在大肠杆菌中高效表达的条件,并纯化获得高纯度的重组蛋白.方法:构建原核表达质粒pET28a-exCTLA4并转入大肠杆菌Transetta(DE3)中,通过改变诱导物IPTG浓度、细菌培养温度和时间,获得了exCTLA4的最佳表达条件.收集最佳诱导条件下表达exCTLA4的菌体,将菌体超声破碎后,离心分离exCTLA4包涵体,用低浓度尿素(2mol·L~(-1))洗去大部分背景蛋白后,再用高浓度尿素(8mol·L~(-1))溶解包涵体,进一步用镍离子亲和层析方法得到高纯度exCTLA4.结果:构建了表达载体pET28a-exCTLA4,获得了exCTLA4在Transetta(DE3)中的最佳诱导条件,即在1mmol·L~(-1) IPTG、25℃下,诱导6h能得到最佳表达,但重组蛋白以包涵体形式存在.通过纯化exCTLA4包涵体及进一步的镍离子亲和层析获得了高纯度的目的蛋白,Western blot鉴定为CTLA4.结论:获得了exCTLA4重组蛋白在大肠杆菌中的最佳表达条件和纯化方法及步骤,为该蛋白的应用奠定了基础.     

烟草拟核小体组装蛋白cDNA的克隆、表达及其蛋白产物的纯化

从烟草BY2细胞cDNA文库中筛选到核小体组装蛋白1(Nucleosome assembly protein1,NAP1)的cDNA，序列分析发现该NAPI的cDNA编码374个氨基酸，与巳知植物来源的NAP1同源蛋白相比具有80%，以上的同源性，而且一些具有重要功能的结构域是相当保守的，如核定位信号，核输出信号，酸性结构域及异戊烯化修饰位点，重要功能结构域的存在预示了NAP1蛋白潜在多种功能，为了深入研究MAP1的功能，应用大肠杆菌表达体系高效表达了烟草NAP1蛋白，并以表达产物进行了分离纯化。     

Purification and characterization of myosin from wheat mitochondria

Myosin was purified from wheat mitochondria using DE-52 anion exchange chromatography and Sephacryl S-300 gel filtration. The molecular weight of its heavy chain is about 210 ku, similar to that of muscle myosin Ⅱ(205 ku), and it could be recognized by the polyclonal antibodies against human skeletal muscle myosin Ⅱ. The ATPase activity of the mitochondrial myosin stimulated by F-actin from chicken muscle is 202.5 nmoles Pi/min·mg. The mitochondrial myosin could be activated by Ca²⁺ and was not inhibited by Ca²⁺ at high concentration. The results demonstrate that the myosin of wheat mitochondria shares some similarities with the skeletal muscle myosin Ⅱ.