大鼠再生肝中糖元及双核细胞变化的研究

正常大鼠肝细胞中存有大量糖元.肝大部分切除12小时后,肝糖元下降至零或仅少量。手术后24小时,肝糖元开始上升,至2l天呈现正常水平. 再生肝的双核肝细胞减少,由正常的10.6％降至5.6％.大部分肝切除21天后,双核肝细胞的百分率回升到正常水平,同时再生作用也完成.     

茵栀黄注射液对新生大鼠胆红素脑损伤的保护作用

目的:探讨茵栀黄注射液对新生大鼠胆红素脑损伤的保护作用.方法:175只7日龄SD大鼠随机分成正常对照组、脑损伤组、治疗组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ,腹腔注射质量分数为120 mg/kg的胆红素溶液诱发新生大鼠脑损伤,治疗组Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ新生大鼠建模同时每天分别腹腔注射质量分数分别为513.2、265.5和132.8mg/kg的茵栀黄注射液...     

法夫酵母类胡萝卜素提取物对肝损伤的保护作用

为了明确法夫酵母(Phaffia rhodozyma)类胡萝卜素提取物对化学性肝损伤大鼠丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)肝细胞坏死程度的影响,建立CCl_4诱导大鼠化学性肝损伤模型,将60只大鼠随机分成6组,分别是正常组,模型组,联苯双酯组,低、中、高剂量组(受试样剂量分别为0. 187 5、0. 375、0. 75 g/kg),检测大鼠血清中ALT、AST活性,并观察肝脏细胞的病理损伤情况。结果显示,法夫酵母类胡萝卜素高剂量组大鼠血清ALT与模型组比较显著降低(P 0. 05),受试样品不同剂量组大鼠的肝细胞病变均有不同程度的减轻。表明,法夫酵母类胡萝卜素提取物对大鼠化学性肝损伤有辅助保护作用。     

改构型酸性成纤维细胞生长因子对紫杉醇诱导体外大鼠肝细胞损伤保护作用的体外实验研究

目的:探究改构型酸性成纤维细胞生长因子(Ma FGF)对紫杉醇(Taxol)诱导体外培养的大鼠肝细胞损伤的保护作用.方法:选用新生SD大鼠培养原代肝细胞,将原代肝细胞种于96孔培养板:培养7 d后加入各种不同浓度的紫杉醇,作用24 h,采用四唑盐(MTT)比色法检测细胞抑制率;建立紫杉醇损伤肝细胞的模型,与此同时加入系列质量浓度的Ma FGF,观察Ma FGF对肝细胞的保护作用.结果:紫杉醇对体外培养的肝细胞具有一定的抑制作用,并呈质量浓度依赖型;在质量浓度为3.25×10-3~8.20×10-3mg/L范围内,Ma FGF降低了紫杉醇对肝细胞的抑制率,增高了肝细胞的活性;Taxol组与对照组比较,各生化和酶学指标差异均有显著性(P0.05);Taxol+Ma FGF(3.25×10-3~8.20×10-3mg/L)组和Taxol组比较,各生化和酶学指标差异均有统计学意义(P0.01),Taxol+Ma FGF组中超氧化物歧化酶(SOD)活性升高,一氧化氮(NO)、谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)水平降低.结论:Ma FGF对紫杉醇损伤的肝细胞具有一定的保护作用.     

新生期母子分离对大鼠2型糖尿病进程的影响

目的:明确新生期母婴分离是否改变成年期糖代谢及增加高脂饮食导致2型糖尿病的风险.方法:建立大鼠NMS模型,正常(NH)大鼠和NMS大鼠成年后高脂饮食干预2个月,检测大鼠体重、口服葡萄糖耐量和血压.结果:NMS大鼠成年后体重与NH大鼠体重无明显差别,但随着鼠龄的增长,NMS大鼠体重较NH大鼠体重增加;成年后大鼠经高脂饮食干预1个月或2个月,高脂饮食组NH和NMS大鼠分别较正常饮食组NH大鼠和NMS组体重明显增加;成年后NMS大鼠空腹血糖较NH大鼠低,但NMS大鼠口服葡萄糖后30 min的血糖值较NH大鼠高;NMS正常饮食组、NH高脂饮食组和NMS高脂饮食组口服葡萄糖后60、90、120 min的血糖值均比NH正常饮食组高;NMS高脂饮食组口服葡萄糖后90、120 min的血糖值均比NMS正常饮食组高;各组大鼠血压均无明显差异.结论:NMS可能导致大鼠糖耐量减低,体内糖代谢紊乱,可能增加发生2型糖尿病的敏感性.     

糖尿病肾病大鼠肝DNA甲基化酶活性及基因组DNA对DNase敏感性的分析

用 3H标记的 S-腺苷酰 - L -甲硫氨酸 (3H- SAM)作为甲基供体 ,以同位素掺入法测定了正常大鼠、糖尿病肾病大鼠、中药“糖微康”治疗的糖尿病肾病大鼠、西药“开博通”治疗的糖尿病肾病大鼠的肝细胞的 DNA甲基化酶活性 ,并对从以上各组动物肝组织中提取的基因组 DNA分别进行 DNase 敏感性分析 .结果显示 :糖尿病肾病大鼠肝 DNA甲基化酶活性明显低于正常鼠肝 ,其基因组 DNA对 DNase 敏感性比正常大鼠肝增强 ;中药“糖微康”治疗及西药“开博通”治疗的大鼠的肝 DNA甲基化酶活性均有所回升 ,且中药组更接近正常大鼠对 DNase 的敏感性 .     

糖尿病肾病大鼠肝DNA甲基化酶活性及基因组DNA对DNaseⅠ敏感性的分析

用3H标记的S-腺苷酰-L-甲硫氨酸(3H-SAM)作为甲基供体,以同位素掺入法测定了正常大鼠、糖尿病肾病大鼠、中药"糖微康"治疗的糖尿病肾病大鼠、西药"开博通"治疗的糖尿病肾病大鼠的肝细胞的DNA甲基化酶活性,并对从以上各组动物肝组织中提取的基因组DNA分别进行DNaseⅠ敏感性分析.结果显示:糖尿病肾病大鼠肝DNA甲基化酶活性明显低于正常鼠肝,其基因组DNA对DNaseⅠ敏感性比正常大鼠肝增强;中药"糖微康"治疗及西药"开博通"治疗的大鼠的肝DNA甲基化酶活性均有所回升,且中药组更接近正常大鼠对DNaseⅠ的敏感性.     

二乙基亚硝胺诱发大鼠肝纤维化-肝癌动物模型的建立

目的 建立大鼠肝纤维化-肝癌模型并动态观察大鼠肝纤维化-肝癌发生过程中的病理形态特点.方法 用0.01％二乙基亚硝胺（DEN）溶液间断喂养SD大鼠诱发肝癌,对大鼠肝脏在不同诱癌阶段的病理变化进行动态观察.结果 用药第4周后,肝细胞点状坏死及炎性细胞浸润;8周时,肝细胞严重脂肪变性、灶性坏死,门管区出现纤维组织增生;9-12周时,增生的胶原束包绕并分割肝小叶,正常的肝小叶结构被破坏,假小叶形成;15周后存活大鼠均形成肝癌,肝癌细胞排列成条索状或团块状,诱癌组为100％成癌（8/8）.结论 成功建立从肝纤维化发展成肝癌的动物模型,设立间歇期提高了大鼠癌变末期的成活率,该模型是动态研究肝癌发生发展进程的理想动物模型.     

糖尿病肾病大鼠肝DNA甲基化酶活性及基因组DNA对DNaseⅠ敏感性的分析

用3H标记的S-腺苷酰-L-甲硫氨酸(3H-SAM)作为甲基供体,以同位素掺入法测定了正常大鼠、糖尿病肾病大鼠、中药"糖微康"治疗的糖尿病肾病大鼠、西药"开博通"治疗的糖尿病肾病大鼠的肝细胞的DNA甲基化酶活性,并对从以上各组动物肝组织中提取的基因组DNA分别进行DNaseⅠ敏感性分析.结果显示:糖尿病肾病大鼠肝DNA甲基化酶活性明显低于正常鼠肝,其基因组DNA对DNaseⅠ敏感性比正常大鼠肝增强;中药"糖微康"治疗及西药"开博通"治疗的大鼠的肝DNA甲基化酶活性均有所回升,且中药组更接近正常大鼠对DNaseⅠ的敏感性.     

大鼠肝细胞膜胰岛素受体与胰岛素的相互作用

采用125I-胰岛素标记法研究大鼠肝细胞膜中胰岛素受体与胰岛素的结合性质,用31P-核磁共振法(31P-NMR)研究大鼠肝细胞膜中胰岛素刺激下的胰岛素受体体外自磷酸化,实验结果表明大鼠肝细胞膜胰岛素受体与胰岛素结合的最佳酸度大约为pH=7.5,并且表明大鼠肝细胞膜上的胰岛素受体为高亲和、低容量和低亲和、高容量两型受体.非放射性的31P-NMR波谱法检测到胰岛素刺激下的大鼠肝细胞膜胰岛素受体的体外自磷酸说明所提取纯化的胰岛素受体具有生物活性.     

用大鼠心肌条件培养基建立来源于C57BL/6J小鼠的ES细胞系

报道一种新的建立C57BL/6J小鼠ES细胞系的方法。采用大鼠心肌条件培养基,在不使用饲养层细胞和白血病抑制因子(LIF)的情况下,从C57BL/6J品系小鼠中建成1个ES细胞系即MESPU 41,成系率为1.0%。MESPU 41细胞为XX型,核型正常率高达89%,表现出XX型ES细胞系少有的稳定性。进行体内分化实验时MESPU 41细胞能发生广泛分化形成畸胎瘤。嵌合体制作实验证实MESPU 41细胞具有嵌合能力,能参与胚胎的发育。采用RT-PCR方法,检测出大鼠心肌细胞有LIF mRNA的表达,这可能与其条件培养基保持ES细胞未分化状态并使X染色体稳定有关。同时,还对大鼠心肌细胞进行了永生化的尝试,共得到了4个永生化克隆,这将进一步简化ES细胞建系和培养工作,为进一步研究ES细胞在体外培养过程中的稳定性开创了新的起点。     

应用SCID鼠筛选肝癌转移性亚克隆及M-H7402亚细胞系的建立

本研究应用人肝癌细胞SCID鼠转移模型，筛选和建立肝癌转移细胞系，旨在为肝癌转移研究提供实验材料．采用人肝癌细胞H7402，腋后背部皮下接种SCID鼠，接种后66天时，在荷瘤鼠赢弱时引颈处死，取其肺组织，进行原代细胞培养和传代培养，获得肝癌细胞H7402的亚细胞克隆，命名为M—H7402．然后，对M—H7402细胞进行了生物学鉴定，检测了细胞形态、染色体、细胞动力学、细胞周期、甲胎蛋白表达、癌基因表达和转移相关基因表达等指标．结果显示，M—H7402细胞的生长、增殖和形态等与亲本细胞H7402十分相近，其染色体形态仍为人类核型，众数维持在72～80之间，占75．0％．RT—PCR检测结果显示，M—H7402细胞甲胎蛋白表达为阳性．Western blot检测结果显示，与亲本细胞H—7402相比，癌基因C—myc表达水平较高，转移抑制基因nm23的表达水平明显下调．从肺组织中获得的肝癌转移细胞系M—H7402，在体外可连续传代培养，细胞形态不变．应用SCID鼠筛选获得的亚细胞克隆，与亲本细胞形成配对关系，可为肝癌细胞转移的研究提供新的实验材料。     

条斑星鲽连续性鳍细胞系的建立与鉴定

为了建立条斑星鲽鳍细胞系,为其细胞工程及病毒学研究奠定基础,对经Ⅱ型胶原酶和透明质酸酶联合消化法所得鳍组织碎块分别用DMEM/F12、L-15和M199培养液(pH7.2)在18～26℃进行了鳍组织的体外培养,并在所筛选出的最适培养液和培养温度下通过添加羧甲基壳寡糖、碱性成纤维样生长因子(bFGF)和I型胰岛素样生长因子(IGF-I)启动了鳍细胞的原代培养。体外培养结果显示,条斑星鲽鳍细胞的最适培养液为DMEM/F12培养液,最适培养温度为22℃,原代培养鳍细胞的生长分裂状态旺盛,细胞形态主要为成纤维样,20d后便可形成汇合细胞单层,经过连续的继代培养已建立了条斑星鲽的连续性鳍细胞系,目前已传至第135代;生长特性检测结果显示,第60代鳍细胞系细胞的群体倍增时间为56.9h,其生长分裂状态依然十分旺盛;染色体分析结果显示,第60代鳍细胞系细胞虽然出现了染色体的非整倍性,但其特征性染色体数目仍为46条,并具有2sm+44t的正常二倍体核型,证明所建立的细胞系确为条斑星鲽连续性鳍细胞系。该细胞系为条斑星鲽的细胞工程育种和病毒-细胞相互作用提供了一个理想的体外研究体系,具有重要的理论意义和应用价值。     

人肝癌细胞株HuH-7分泌铺展因子的研究

从人肝癌细胞株　ＨｕＨ－７的无血清培养基中分离出一种能促使细胞在体外铺展及生长的活性因子。该因子从条件培养基中用ＭＹ２型超滤膜浓缩５０倍后能使鼠胰岛肿瘤细胞株ＲＩＮ－ｒ细胞在塑料培养皿表面铺展及生长。ＨｕＨ－７细胞铺展因子对温度及胰蛋白酶敏感．用凝胶ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００柱层析得到三个峰，第二个峰具有生物学活性．其分子量约为８×１０４     

Clonogenic colony-forming ability of hepatic stem cells in the spleens of mice

To confirm the existence of hepatic stem cells (HSCs), fetal liver cells isolated from mice on embryonic day 13 (ED13) were long-term cultured in vitro. Growth of the cells was observed intensively and characteristics were identified by immunocytochemistry. The results showed that some of the cells grew as colonies, in which some cells expressed AFP, CD34 and Albumin. Then the cells were transplanted intravenously into irradiated syngeneic mice. At day 12 a number of small hyperplasia nodules were seen in the apparently enlarged spleens of recipient mice. Moreover, some nodules were positive for AFP and CD34 and consisted of various types of cells, suggesting the very existence of hepatic stem cells in the mouse fetal liver.     

植物素对小鼠酒精中毒血清酶及超微结构影响

以昆明小鼠为材料，研究了解酲营养素对小鼠肝酒精中毒的血清酶及超微结构的影响。结果表明，解梧营养素能明显降低酒精引起的小鼠血清ＧＰＴ的升高，电镜观察显示，饮酒组，肝细胞结构严重损，其线粒体重度肿胀，粗面内质网扩张严重，溶酶体减少并有大量脂肪滴分布。实验组小鼠其肝细胞中有稀疏的脂肪滴；细胞电子密度接近正常肝细胞；线粒体基质密度轻度降低。     

苜蓿乙硫氨酸抗性变异细胞系的筛选及特性分析

用经返地卫星搭载诱变处理豆科牧草紫花苜蓿（Ｍｅｄｉｃａｇｏ ｓａｔｉｖａ Ｌ．）干种子种植后长出的花序为外植体诱导愈伤组织,以Ｌ－乙硫氨酸为筛选剂,通过多步正筛选途径获得了苜蓿乙硫氨酸抗性细胞系ＭＥ＾ｒＢ．ＭＥ＾ｒＢ在脱离选择压９个月后,其对Ｌ－乙硫氨酸的抗性Ｉ５０（生长量半抑制时的Ｌ－乙硫氨酸浓度）比野生型高１４．２倍,表明抗性系抗笥表达稳定。抗性系还表现出对ＤＬ－甲硫氨酸的交叉抗性和对于冬氨酸     

TGF—β1和HSP70在大鼠肝癌早期诊断中的价值探讨

目的：通过动态检测大鼠肝癌模型造模各阶段血清中TGF—β1和HSP70水平并与传统指标AFP比较,对其在肝癌早期诊断中的价值做综合的评价。方法：用CCL4诱导大鼠肝硬化基础上的肝癌模型。从造模第6周起,每两周心脏采血一次,ELISA法检测大鼠血清中TGF-β1、HSP70和AFP水平,并取部分肝组织行病理学检查。结果：造模第8周发生肝硬化,第10周发生不典型增生及早期肝癌结节。造模第10周TGF-β1和HSP70水平即显著升高,TGF-β1在肝硬化阶段无显著升高,而HSP70则略微有升高,二者特异性分别为90％和60％,阳性率分别为55％和70％,联合检测的阳性率为80％,造模第12周的阳性率分别达85％和90％,联合检测阳性率达100％;AFP水平在造模第12周才有显著升高,肝硬化阶段也有升高并与早期肝癌无显著性差异。其阳性率和特异性分别为60％和30％。结论：传统指标AFP对极早期的肝癌不敏感,特异性不高,而TGF-β1和HSP70均较AFP敏感、特异,二者联合可提高检测敏感性。     

Morphological Transformation of Plant Cells in vitro and Its Effect on Plant Growth

Enhancement of cell growth in suspension cultures is urgently needed in plant cell culture engineering. This study investigates the relationship between morphological transformation and cell growth in callus and suspension cultures of saffron cells belonging to the cell line C96 induced from Crocus safivus L In the suspension culture, an unbalanced osmotic pressure between the intracell and extracell regions induced a large morphological transformation which affected normal division of the saffron cells. An increase in osmotic pressure caused by the addition of sucrose inhibits the vacuolation and shrinkage of cytoplasm in the cells. As the sucrose concentration increases, the total amount of accumulated biomass also increases. Besides the sucrose concentration, increased ionic strength and inoculation ratio also help restrain to a large extent the vacuolation and shrinkage of the cytoplasm in the suspended cells, which results in increased biomass. The conditions for optimal biomass are： Murashige and Skoog＇s （MS） medium with 40 g/L sucrose and 60% （v/v） inoculation ratio.     

苜蓿乙硫氨酸抗性变异细胞系的筛选

用经返地卫星搭载诱变处理的豆科牧草紫花苜蓿（Ｍｅｄｉｃａｇｏ ｓａｔｉｖａ Ｌ．）干种子种植后长出的花序为外植体诱导愈伤组织,以Ｌ－乙硫氨酸为筛选剂,通过多步正筛选途径获得了苜蓿乙硫氨酸抗性细胞系ＭＥ＾ｒＢ,ＭＥ＾ｒＢ在脱离选择压力９个月后,其对Ｌ－乙硫氨酸的抗性Ｉ＾５０（生长量半抑制时的Ｌ－乙硫氨酸浓度）比野生型高１４．２倍,表明抗性系抗性表达稳定。抗性系还表现出对ＤＬ－甲硫氨酸的交叉抗性和对天