鹿茸的组织结构及离体细胞的显微结构观察

本文对鹿茸的组织结构、鹿茸皮肤及顶端肉质部分的显微结构进行了较详尽的观察,同时对从鹿茸分离的细胞及由鹿茸组培养出的细胞形态结构也作了初步研究。     

条斑星鲽连续性鳍细胞系的建立与鉴定

为了建立条斑星鲽鳍细胞系,为其细胞工程及病毒学研究奠定基础,对经Ⅱ型胶原酶和透明质酸酶联合消化法所得鳍组织碎块分别用DMEM/F12、L-15和M199培养液(pH7.2)在18～26℃进行了鳍组织的体外培养,并在所筛选出的最适培养液和培养温度下通过添加羧甲基壳寡糖、碱性成纤维样生长因子(bFGF)和I型胰岛素样生长因子(IGF-I)启动了鳍细胞的原代培养。体外培养结果显示,条斑星鲽鳍细胞的最适培养液为DMEM/F12培养液,最适培养温度为22℃,原代培养鳍细胞的生长分裂状态旺盛,细胞形态主要为成纤维样,20d后便可形成汇合细胞单层,经过连续的继代培养已建立了条斑星鲽的连续性鳍细胞系,目前已传至第135代;生长特性检测结果显示,第60代鳍细胞系细胞的群体倍增时间为56.9h,其生长分裂状态依然十分旺盛;染色体分析结果显示,第60代鳍细胞系细胞虽然出现了染色体的非整倍性,但其特征性染色体数目仍为46条,并具有2sm+44t的正常二倍体核型,证明所建立的细胞系确为条斑星鲽连续性鳍细胞系。该细胞系为条斑星鲽的细胞工程育种和病毒-细胞相互作用提供了一个理想的体外研究体系,具有重要的理论意义和应用价值。     

嗜凤梨果蝇(Drosophila ananassae)细胞系的建立及其生物学特性初步观察

为建立真核基因表达受体系统,以嗜凤梨果蝇胚胎为材料,采用常规方法获取发育4～8h的果蝇胚胎细胞,以改良M3(BF)培养液体外培养,经40d左右的原代培养后行传代培养,以后每隔7d传代一次,传至10代时按照细胞系建立标准检测细胞系的一系列生物学特性.结果显示:细胞维持体外生长将近1年,传至60代.细胞在接种的0～96h内呈指数生长,临界增殖浓度为1.0×106个(细胞) mL.部分细胞染色体呈现异倍化.经液氮冻存的细胞复苏后活性达90%以上.该细胞系是一株成功的细胞系,命名为HY-ANA.     

鹿茸皮肤细胞系的建立及其部分生物学特性研究

本文报道了从培养的鹿茸皮肤组织块建立细胞系(定名为PAS—001)的方法。目前该细胞系已进行了30代培养。同时,对该细胞系的生长率、分裂指数、染色体组型以及不同培养基对其生长的影响也进行了观察和分析。     

鹿茸整体液氮保存及复苏试验

本文对鹿茸的整体液氮保存及复苏进行了初步研究。结果表明:采用液氮冷冻和复苏方法,可使在液氮中保存一年半的鹿茸组织结构不受任何破坏,细胞仍可在体外培养增殖、传代[到目前(1990.1)已传至第十五代,现仍在继续传代]。     

玉米细胞悬浮系建立和单细胞培养影响因素的研究

以玉米幼胚为外植体进行离体培养,获取愈伤组织,建立悬浮细胞系.试验结果表明:基因型无论是对细胞悬浮系建立还是对单细胞培养都有很大影响;改良1/2B5培养基用于细胞悬浮培养能获得良好的细胞生长与分裂;继代培养时间以及大量元素减半都影响玉米悬浮细胞的生长.     

原生殖细胞的体外培养及发育潜能

原生殖细胞(PCCs)是配子的始祖细胞,它发育演变生成卵细胞或精于细胞,上世纪90年代发展了体外培养PGCs技术,现在PCCs已能通过体外培养形成多潜能干细胞系(EG细胞系),对于研究体外分化机制和细胞治疗具有重要意义,本文综述了原生殖细胞的体外培养和EG细胞系的建立以及原生殖细胞的发育潜能,并展望了原生殖细胞研究领域未来的发展。     

梅花鹿鹿茸软骨细胞和间充质干细胞永生化细胞株的构建及鉴定

分离梅花鹿鹿茸软骨细胞和间充质干细胞,使用SV40 LT抗原慢病毒载体建立永生化软骨细胞和间充质干细胞系并鉴定。将含有SV40 LT基因片段的慢病毒载体,转染人胚肾细胞293T获得包装后的病毒粒子,感染鹿茸软骨细胞及间充质干细胞,连续传代培养,通过形态观察、细胞增殖、real-time PCR、甲苯胺蓝染色法和流式细胞术等方法检测SV40 LT抗原表达以及细胞性质。实验所建立的永生化鹿茸软骨细胞系与间充质干细胞系能够稳定传代并具有较强的体外增值活性。RT-PCR检测到SV40T抗原的表达,通过甲苯胺蓝染色法和流式细胞术鉴定所得细胞系具有原代细胞的基本性质。成功获得永生化的软骨细胞与间充质干细胞系,为后续鹿茸生长及发育研究奠定了基础。     

东北红豆杉细胞悬浮培养研究

东北红豆杉（Taxus cuspidata sieb et zucc)幼茎诱导的愈伤组织经多次继代培养，选择生长旺盛，紫杉醇含量高的愈伤组织进行细胞悬浮培养，建立了东北红豆杉细胞悬浮系，同时，对影响愈伤组织进行细胞悬浮培养，建立了东北红豆杉细胞悬浮系，同时，对影响愈伤组织继代培养及细胞悬浮培养的条件进行了研究，确定了适合愈伤组织生长的条件以及影响细胞悬浮培养的主要因素。     

簇毛麦（Haynaldia Villosa）的原生质体培养

簇毛麦的幼胚在含有９μｍｏｌ／Ｌ２，４－Ｄ的ＭＢ固体培养基上诱导产生愈伤组织，在相同的培养基上继代培养两个月后出现淡黄色的致密瘤状愈伤组织．在继代培养过程中，愈伤组织的分化能力丧失较快．继代培养一年左右，改变培养条件，可得到颗粒状及粉粒状愈伤组织．分别用这两种类型的愈伤组织建立悬浮培养细胞系．愈伤组织的形态结构与悬浮系的建立及原生质体培养密切相关．来源于颗粒悬浮系的细胞团块产生的原生质体分裂后可产生体细胞胚，而用粉粒悬浮系分离的原生质体不能持续分裂．     

莜麦组织培养及再生植株

以莜麦（Ａｖｅｎａｎｕｄａ）成熟种子为材料，研究了培养基成分对愈伤组织的诱导、分化和继代保持的影响。通过对ＭＳ为基本培养基附加２，４－Ｄ、６－ＢＡ、ＫＴ、ＺＴ等成分的各种培养基上诱导产生的愈伤组织观察比较，发现在２，４－Ｄ浓度为２ｍｇ／Ｌ时，诱导产生的愈伤组织量最多，随着２，４－Ｄ浓度降低，愈伤组织形成的量也减少；在２，４－Ｄ１ｍｇ／Ｌ、ＫＴ０．２５ｍｇ／Ｌ的培养基中愈伤组织能分化出芽，产生大量苗，进而再生植株。实验结果表明，在继代培养基中加入一定量的ＡＢＡ和ＺＴ，能有效地促使褐化的愈伤组织恢复正常，使之保持良好的生长状态和分化能力。     

西红花愈伤组织的诱导与花柱愈伤组织的继代、悬浮培养

以西红花的球茎,叶片和花柱为外植体诱导愈伤组织,叶片诱导培养形成白色膨大组织,球茎培养得到松散型白色愈伤组织,诱导球茎愈伤的培养基为5mg/L 6-BA 8mg/L NAA,在球茎愈伤组织中的紫外部分没有检测到西红花甙,西红花醛和西红花苦甙,在花柱愈伤组织中检测到西红花醛,适合于继代和悬浮培养,经悬浮培养后,在培养液中可检测到西红花醛和西红花苦甙,悬浮培养有利于次和一代谢的积。     

皱纹盘鲍组织培养研究

用ＭＥＭ培养液对皱纹盘鲍的血细胞、鳃、外套膜、肾脏和足肌进行了组织培养研究,血细胞培养１ｈ后即贴壁生长,从形态上可分为成纤维样细胞和圆形细胞,但２ｄ后即脱落,鳃细胞呈圆形,增殖迅速,容易获得传代细胞,其中两株现已分别传至２２代和３０代,肾细胞呈上皮样,生长缓慢,已传至第３代、外套膜和足肌则未获传代细胞。     

兼用型猪Ⅰ号和瘦肉型猪饲料添加剂

近年来国内外研制的微量元素、维生素、氨基酸等畜禽添加剂,其主要作用是促进畜禽生长,提高饲料利用率,缩短生长周期,但关于添加剂对肉质和瘦肉率的提高目前国内报导极少.因此,关于猪的高效添加剂的研究,被列入河南省科委重大科研项目之一。由新乡科技局具体组织领导攻关,我们共进行过四批试验,总共二百多头猪,试验重复性较好,产品已达预期目的.     

微量量热法筛选促菌特效营养药的研究

用热活性检测仪测定了枸杞、黄芪、灵芝、鹿茸对金黄色葡萄球菌促进作用的热功率—时间曲线;计算了不同浓度营养药物作用下的生长速率常数;根据生长速率常数和浓度的数据,确定了营养药物的最佳浓度.     

人脐静脉内皮细胞培养液的选择

目的:筛选出人脐静脉内皮细胞(HUVECs)原代、传代最适培养液.方法:0.02%II型胶原酶灌注脐静脉消化15min获得细胞,用不同的培养液培养.24h后观察细胞贴壁状况,细胞计数法得到贴壁细胞数量;内皮细胞标志性蛋白vWF进行细胞鉴定.传代培养后,用MTT法比较不同培养液对HUVECs活力的影响.结果:用含ECGS、20%FBS的ECM组进行原代培养,可获得贴壁细胞数量最多的HUVECs,且与其他组间有显著差异;用含30ng·mL-1 VEGF165、10%FBS的M199进行传代培养,HUVECs活力较ECM组无明显差异.结论:HUVECs原代、传代培养分别选用优化后的培养液,既保证原代HUVECs的质量和数量,又使传代培养成本降低60.8%.