泽蛙单倍体胚胎核糖核酸（RNA）的提取和测定

本研究以同一形态发生期(鳃盖闭合期)的泽蛙(Rana limnocharis Bole)雌核单倍体胚胎和这一期的泽蛙二倍体胚胎为材料，仿Sze(施履吉)法分别测定它们的细胞数目，并用苯酚法提取各自的核糖核酸，然后用紫外分光光度计对所提取的核糖核酸进行定性、定量。实验结果表明：鳃益闭合期泽蛙单倍体的细胞数目是二倍体的1．53倍，但每一细胞内的RNA含量却不及二倍体细胞的二分之一。作者据此讨论了泽蛙单倍体胚胎死亡的原因。     

植物细胞工程进展

概要介绍了植物细胞工程的主要分支学科及其研究进展。包括原生质体培养、细胞融合与体细胞杂交、胚胎培养和试管受精、组织和细胞培养生产有用物质、单倍体育种、体细胞无性系变异、细胞突变体的筛选、植物快速繁殖技术、体细胞胚胎发生和人工种子、组织细胞培养物的超低温保存以及转基因植物等。     

胚胎大鼠肺成纤维细胞的体外培养

目的:探讨胚胎大鼠肺成纤维细胞的体外培养条件.方法:采用胶原酶消化19d胎鼠肺组织块,经差速离心和反复贴壁法,分离、纯化肺成纤维细胞后采用加胎牛血清的DMEM培养液,进行细胞培养.用波形蛋白免疫细胞化学染色对所分离的细胞进行鉴定.结果:细胞培养24h后有一定量细胞贴壁,48h后贴壁细胞开始生长.结论:该实验方法可以成功地培养大鼠胚胎肺成纤维细胞.     

光敏感核不育水稻单倍体组织培养及再生植株遗传特性…

以湖北光敏感核不育水稻农垦５８Ｓ为材料，取在长日照和短日照条件下生长的植株的花药进行培养，均有效地获得了花粉单倍体植株，该单倍体植株幼穗离体培养脱分化容易，再分化能力强，对不同培养基的反应规律同原二倍体植株幼穗离体培养基本一致，单倍体愈伤组织细胞倍性很不稳定，易自发加倍成二倍体；结合秋水仙碱处理，已获得了加倍的二倍体再生植株，这些二倍体再生植株的种子后代纯合，群体性状整齐，保持了原农垦５８Ｓ在长日     

可持续灌注细胞培养系统的研制与测试

为了实现对体外培养细胞生长状态的实时监测,本实验研制出一套可在显微镜下实现细胞实时连续监测的可持续灌注培养系统.本可持续灌注培养系统主要包括4个部分:pH-CO2调控系统、温度控制系统、可持续灌注系统和可拆卸式细胞培养池.可拆卸式细胞培养池由Pro-E软件设计,并以有机玻璃为材料加工.利用此培养系统,已成功地将中国仓鼠卵巢细胞(CHO)、小鼠胚胎成纤维细胞(3T3)等细胞分别培养4~5天,不但细胞生长状态良好,还可对之进行显微镜下各种形态结构参数的检测.表明该系统可针对某一特定细胞的生命活动进行长时间连续实时追踪测控;并且可与显微操作系统联用,实现单个细胞的搬运,注射等显微操作.     

烟草组织培养中染色体不稳定性的研究

单倍体烟草(n=24)叶片在离体培养条件下,染色体数目和结构发生明显变化.离体培养早期(3—5天).叶外植体细胞中的染色体数倍性已有明显变化,除单倍体外尚有二倍体、三倍体、四倍体及其各种类型的非整倍体,观察细胞中的染色体数变动在8—96之间.随着培养时间的延长,烟草叶外植体细胞在分裂、增殖、分化、发育成再生植株的过程中,亚单倍体和单倍体细胞比率逐渐上升,而最终占据绝对优势.在离体培养中除了染色体数目变异之外,还经常看到染色体断片、后期桥、落后染色体和微核等染色体结构改变.     

与脊椎动物脑室空间模式形成相关的两个基因座位

通过对金鱼雌核发育单倍体胚胎的活体观察及切片观察，发现单倍体胚胎脑的空间模式发育存在正常与不正常两种不同的表型. 正常脑胚胎与自交二倍体胚胎脑的表型一致，具有正常的前脑、中脑、后脑结构，且各脑室的边界清楚. 不正常脑胚胎没有明显可见的脑室结构. 正常脑和不正常脑胚胎数目的比例为1∶3，说明金鱼脑的空间模式形成与两个不同的基因座位有关. 由于实验中排除了在这两个基因座位上同时存在突变基因的可能性，1∶3的比例反映的不是基因型，而是这两个基因的表达状态；说明这两个基因在单套染色体组中只有50%的表达概率，其表达调控机制建立在两套染色体的基础之上，受二倍体依赖型基因表达调控机制的控制.     

湘云金鳙染色体组型分析

采用PHA和秋水仙素活体注射法,对洞庭湖区人工养殖湘云金鳙的染色体组型进行分析.结果表明:湘云金鳙的染色体二倍体数为2N=48,核型公式为:24 m+18 sm+6 st,NF=90.未发现端部着丝粒染色体,也未发现带有特殊标志性特征如随体和次缢痕等的染色体.同时,本文将洞庭湖区与其他水域鲢亚科鱼的核型进行比较,探讨了...     

罗氏沼虾的染色体研究

从罗氏沼虾处于囊胚期和原肠期的胚胎细胞中提取中期染色体进行细胞遗传学研究。染色体制片分析表明，罗氏沼虾二倍体染色体数目2N=118，但是也有一些细胞具有100～109条染色体。以外，还有一些细胞具有与单倍体染色体数相近的染色体数。     

快速建立鲢、鳙纯系的初步研究

运用随机扩增多态性DNA(RAPD)方法对雌核发育和人工转性鲢、鳙进行了遗传多样性的研究,并用长江天然鲢、鳙群体作为对照分析.在雌核发育鲢中,共得到187条带,其中19条为多态带,占10.16%,而对照组鲢共扩增205条带,有32个多态座位,占总带数的15.61%.在雌核发育鳙中共产生232条带,其中11条为多态带,比例为4.74%,而在对照组中共产生241条带,25条为多态带,比例为10.37%.遗传距离分析表明,雌核发育鲢和鳙的平均值分别为0.102和0.023,而对照组鲢和鳙遗传距离平均值分别为0.161和0.104,均高于雌核发育组.从聚类分析UPGMA树可以十分明显找到了遗传配型相似、可以作为纯系繁殖的生理雄性个体及其同胞姐妹雌核发育雌鱼,由此提出了快速建立鱼类纯系的新操作途径.     

小鼠胚胎成纤维细胞的分离培养

目的探讨小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)的分离与培养。方法取BALB/c小鼠胚胎分离成纤维细胞,利用体外培养体系,对MEF的生长形态进行观察,并对传代细胞培养液、胚胎胎龄、胰蛋白酶浓度进行筛选。结果 MEF在体外为贴壁生长型细胞,第三、四、五代细胞纯度较高且增殖最为旺盛;添加血清的M199和DMEM均能较好的满足原代细胞的生长,两种培养液中细胞增殖的速度无明显差异;11.5～16.5d胎龄的小鼠胎儿MEF分离效果最好;0.1%胰蛋白酶消化MEF时间以8～11min为宜。结论通过对MEF分离培养影响因素的筛选,为MEF的进一步研究奠定了基础。     

昆明小鼠胚胎成纤维细胞的分离与体外培养

研究了昆明小鼠胚胎成纤维细胞的分离、培养和生长特征,建立了快速、稳定的优质饲养层细胞培养体系.从不同日龄的胎鼠均分离到胚胎成纤维细胞,但最佳分离时间为13.5~14.5d;三种分离原代胚胎成纤维细胞的方法中胰酶消化法效果最好,能在较短的周期内获得大量原代及传代细胞;MEF细胞形态以小梭形为主,呈漩涡状、火焰状生长;增殖速度较快,每1~2d可传一代,按1∶3比例常规传代;5代以内适宜制作饲养层用,5代以后细胞开始变形呈现典型的衰老特征.     

氮、磷限制对球形棕囊藻不同形态细胞生长和多糖产量的影响

为探究营养盐胁迫对广西北部湾不同倍性球形棕囊藻(Phaeocystis globosa)细胞生长和多糖产量的影响,本研究采用单因子控制试验,设置4.0∶1.0、24.5∶1.0和64.0∶1.0 3个氮、磷限制比例,对球形棕囊藻的单倍体和二倍体细胞进行人工海水培养,比较二者的生长变化及各生长期内藻多糖含量和透明胞外聚合颗粒物(Transparent Exopolymer Particles, TEP)的释放差异。结果表明,氮、磷营养对二倍体细胞前期生长的促进作用强于单倍体细胞,二倍体细胞生长率显著高于单倍体细胞(P<0.05)。球形棕囊藻细胞分泌的多糖主要以溶解性胞外多糖(Soluble Exopolysaccharide, sEPS)为主,其次是胞内多糖(Intracellular Polysaccharide, IPS),固着性胞外多糖(Bound Exopolysaccharide, bEPS)占总糖比例最低。单倍体细胞和二倍体细胞的bEPS分泌趋势相反。氮、磷限制组的单倍体单细胞胞外多糖(Extracellular Polysaccharide, EPS)、IPS和TEP...     

悬浮培养红豆杉细胞中影响细胞生长和紫杉醇产量若干因素的研究进展

综述了悬浮培养红豆杉细胞生长状态、植物生长调节因子、糖分、氨基酸、无机盐、ｐ Ｈ值及光照等因素对细胞悬浮培养生产紫杉醇的作用,为探索生产紫杉醇的最适条件和大规模细胞培养（生产紫杉醇）提供理论依据     

小鼠不同类型孤雌激活卵的形成及其孤雌胚发育状况的研究

注射hCG18h后收集小鼠卵母细胞,采用不同试剂和作用不同时间对其进行激活,观察不同类型激活卵的形成情况及孤雌胚的发育状况,并对单倍体孤雌胚进行了核型分析。结果表明：1）几种激活方法均可得到均质单倍体、嵌合单倍体、1个原核（1PN）的杂合二倍体和2个原核（2PN）的杂合二倍体4种孤雌激活类型。乙醇及Srcl2单独激活后出现单倍体的比率较高;而乙醇联合6-DMAP以及Srcl2联合CB激活后出现二倍体的比率较高;2）10％的乙醇单独作用10min,卵母细胞激活率最高,达到63．3％;在激活卯的原核类型上,2-细胞（嵌合单倍体）的比率随着乙醇刺激强度的增加而增加,但乙醇单独激活后过二细胞阻滞率及桑葚胚的发育率较差;3）10％的乙醇处理5min后染色观察发现出现2细胞嵌合单倍体的比例较高,但接着用6-DMAP分别处理2、4、6h,跟踪观察发现杂合二倍体类型出现比率随时间延长而升高,处理6h后出现2PN杂合二倍体比率最高,且过二细胞阻滞率及桑葚胚的发育率也显著高于乙醇单独激活,但嵌合单倍体数量较不加6-DMAP时却减少;4）10％的乙醇、2mmol／L的6-DMAP联合5μg／mL的CB处理6h后,过二细胞阻滞率及桑葚胚的发育率与不加CB比较差异不显著;5）10mmol／L的Srcl2单独及联合CB分别作用2、4h均能有效激活小鼠卵母细胞,单独及联合CB作用4h的激活率最高,两者差异不显著;在激活卵的原核类型,Srcl2单独激活后出现单倍体类型的比率较高,而联合CB后出现二倍体的比率较高,且过二细胞阻滞率及桑葚胚的发育率与Srcl2单独作用相比差异显著;6）先Srcl2处理1h后染色观察发现形成均质单倍体的比例较高,但接着用CB分别处理1、2h,跟踪观察发现杂合二倍体类型出现比率大大提高,同时发现均质单倍体类型数目反而有所减少。结论：小鼠卵母细?     

6个小鼠ES细胞系的建立和鉴定

报道从小鼠129/ter品系中建成6个胚胎干细胞系,经过核型检查,体内、体外分化等鉴定后发现,6个细胞系中有2个细胞系是正常二倍体,其中ES细胞系MESPU 13为XY型,其核骨架蛋白质成分相当于3～4d(天)的鼠胚细胞的核骨架成分,可长期维持二倍体未分化状态,并具有高效的嵌合能力。核型不正常的细胞系所形成的畸胎瘤生长较快,但细胞的分化程度与核型正常的ES细胞有所不同。对影响建系结果的各种因素进行了讨论。     

悬浮培养红豆杉细胞中影响细胞生长和紫杉醇产量若干因？…

综述了悬浮培养红豆杉细胞生长状态、植物生长调节因子、糖分、氨基酸、无机盐、ｐＨ值及光照等因素对细胞悬浮培养生产紫杉醇的作用,为探索生产紫杉醇的最适条件和大规模细胞培养（生产紫杉醇）提供理论依据。     

植物细胞工程的回顾与展望

植物细胞工程是以细胞培养和细胞操作为基础,按照人们的愿望,有计划地控制、改造和利用植物的技术体系以及发展这些技术,主要包括组织及细胞培养、花药花粉培养、原生质体培养、细胞融合与基因转化等方面的内容。目前植物细胞工程领域中,组织及细胞培养技术在快繁、脱毒、远缘杂交胚挽救等方面已广为应用。生产次生物质的植物细胞大量培养,有的已发展成产业。以花药培养为基础的单倍体育种不断发展,并取得了显著的成绩,重要农作物原生质体培养取得了较大的突破。细胞融合与基因转化取得了可喜的进展。我国在植物细胞     

鲤鱼吻端和尾鳍细胞的生长形态及增殖能力比较研究

采用组织块贴壁法,对鲤鱼的吻端和尾鳍进行细胞的离体培养,观察所获得细胞的形态,并总结每种细胞的形态学特点,同时绘制F5代细胞的生长曲线.研究结果表明,在原代细胞培养过程中,鲤鱼吻端细胞生长较快,以上皮样细胞为主,而鲤鱼尾鳍细胞生长较慢,以成纤维细胞居多.传代培养发现,通过控制胰蛋白酶消化的时间,尾鳍组织经2～3代筛选后可获得较纯的成纤维细胞.从F5代生长曲线看出,鲤鱼尾鳍细胞增殖能力略强于吻端细胞,因此鲤鱼尾鳍组织是较适宜的成纤维细胞体外培养材料.     

昆明鼠胚胎干细胞的分离培养与鉴定

目的：从昆明系小鼠的早期胚胎分离和培养胚胎干细胞(ES细胞)．方法：收集小鼠3．5d胚龄的囊胚，将其培养在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上，5—6d后取隆起生长的内细胞团块分离后再培养，观察集落的生长情况并通过碱性磷酸酶染色、原位杂交、细胞核型分析等对细胞集落进行鉴定．结果：KS细胞集落性生长，符合小鼠胚胎干细胞的一系列特性．结论：昆明系小鼠囊胚在胚胎成纤维细胞饲养层上可以发育成ES细胞，并能进行传代培养．