抗KDR-Fc杂交瘤细胞系的建立

用杂交瘤技术建立抗KDRFc的杂交瘤细胞系,以KDRFc抗原免疫雌性BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经ELISA间接法检测和有限稀释法克隆培养,再经稳定性检测、效价检测,筛选出分泌抗KDRFc单克隆抗体的杂交瘤细胞.得到了10株能持续分泌抗KDRFc的单克隆抗体的细胞株,其中3株分泌的单抗具有较高的生物活性、特异性和稳定性.     

脊髓灰质炎病毒I型单克隆抗体的制备

目的: 为建立脊灰病毒Sabin株I型特异的单克隆抗体．方法:以Vero细胞增殖病毒并用蔗糖密度梯度离心法纯化后,用病毒免疫SPF级Balb/c小鼠．取小鼠免疫脾淋巴细胞与SP2/0-Ag14骨髓瘤细胞进行细胞融合,通过间接 ELISA 法筛选抗体阳性的杂交瘤细胞,并用有限稀释法克隆化．用细胞培养法制备脊灰病毒单抗,并以中和试验测定单抗效价．结果:获得了8株分泌抗脊灰病毒Sabin株I型单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中1株G8G7能够稳定分泌抗体．间接ELISA 法测得单抗的效价为1∶8,中和试验测得中和抗体的效价为1∶58．结论:G8G7分泌的抗体为抗脊灰病毒Sabin株I型特异的单克隆抗体.     

抗Der p 2单克隆抗体细胞株的建立与鉴定

目的:建立Der p 2(屋尘螨Ⅱ类变应原)杂交瘤细胞株,并对其分泌的Der p 2单克隆抗体进行鉴定.方法:用重组Der p 2蛋白作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选和3次克隆化,制备出单克隆抗体.采用间接ELISA法、Western blot法确定单克隆抗体的免疫球蛋白的类型和亚类、相对亲和力、特异性,对单克隆抗体进行鉴定.结果:获得3株能稳定分泌高效价Der p 2单克隆抗体的杂交瘤细胞株,1B6为IgG1类,1G11、4B1为IgG2a类.间接ELISA法检测细胞上清效价为104~105,腹水效价为105~106.Westernblot试验证明3株单抗与Der p 2蛋白均有特异性反应.结论:成功制备了3株抗Der p 2的单克隆抗体,均具有良好的特异性和亲和力,为进一步建立Der p 2蛋白检测和纯化的方法奠定了基础.     

人凝血因子X单克隆抗体的研制及鉴定

目的　用于提取高纯度凝血因子X(FX)和制备缺乏FX血浆 ,以及建立FX抗原的ELISA检测方法等 .方法　用较高纯度的FX免疫Balb/C小鼠 ,经过 2次基础免疫 ,1次加强免疫 ,3d后取其脾细胞与骨髓瘤SP2 /0 Ag14细胞在PEG作用下进行细胞融合 ,经间接ELISA法筛选杂交瘤细胞株 ,通过免疫印迹试验、交叉反应试验、相加试验和二价金属离子依赖性试验等 ,对单克隆抗体进行鉴定 .结果　经 3～ 4次克隆化后获得了 10株能稳定分泌FX单克隆抗体 (FXMcAb)的杂交瘤细胞株 ,Ig亚类均为IgG1型 ,小鼠腹水效价均在 10 6以上 ,FXMcAb只与FX抗原起特异性反应 ,FXMcAb与FX抗原的结合不同程度地依赖于二价金属离子Zn2 .结论　所筛选出的FXMcAb为高纯度FX的提取和缺乏FX血浆的制备以及FX抗原的ELISA检测方法的建立 ,提供了试剂准备 .     

抗人体乳腺癌单克隆抗体6C_6杂交瘤细胞株的建立

用乳腺癌患者的原发瘤组织制备的细胞膜抗原免疫BALB/C小鼠,取致敏脾脏细胞与SP_(2/0)骨髓瘤细胞融合。融合率为42％,经克隆化培养后得到一株分泌抗人体乳腺癌单克隆抗体杂交瘤细胞,命名为6C_6。其分泌的抗体和乳腺癌细胞系MCF-7呈阳性反应,与其它5种人癌细胞系,1种人正常细胞系及4种鼠类肿瘤细胞系呈阴性反应。免疫组织化学实验表明:6C_6单克隆抗体(简称6C_6McAb)与乳腺癌的反应多呈阳性(30/36),与7例正常乳腺均呈阴性反应。6C_6McAb类别为IgC_1。其抗体经ZetaPrep大容量离子交换圆盘纯化,对乳腺癌原发瘤组织仍具有较高的活性。     

抗人绒毛膜促性腺激素（HCG）单克隆抗体的研制和特性分析

以HCG为抗原,免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠Sp2/0—Ag14骨髓瘤细胞融合,经反复筛选和再克隆化,获得8株能稳定分泌抗HCG特异单克隆抗体的杂交瘤细胞株。对其中6个高效价单抗进行了特异性和抗原决定簇检测,选出两个抗相距较远不同决定簇的单抗(2D_4,4F_4)作进一步特性分析。结果显示:免疫球蛋白亚类鉴定,2D_4为IgGl亚类,4F_4为IgG2a亚类;亲和力常数(K_(affi)),2D_4为5.41±0.94×10~(-10)mol/L,4F_4为1.37±0.33×10~(-9)mol/L。证实该两种单克隆抗体可用于研制有关临床诊断试剂盒。     

抗人癌胚抗原单克隆抗体的研制及其在免疫组化中的应用

以高纯CEA为抗原,免疫BALB／c小鼠．取其脾细胞和小鼠SP2／0-Ag14骨髓瘤细胞融合．经2次亚克隆。建立3株稳定分泌抗CEA特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。应用经纯化的该单克隆抗体进行了结肠癌组织切片的免疫组织化学实验．结果显示全部3种抗CEA单克隆抗体对结肠癌亚细胞组分均呈现特异性结合。表明已筛选出适于制作癌胚抗原临床诊断试剂盒所需的特异性单克隆抗体。     

抗爪蟾角蛋白单克隆抗体的研究

本实验以非洲爪蟾(Xenopus laevis)成体皮肤角蛋白免疫的BALB/c鼠脾细胞与小鼠Sp2/0骨髓瘤细胞在PEG的作用下进行融合,经HAT选择培养、ELISA筛选、反复克隆化及冻存复苏,获得四株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株。对其中一株杂交瘤细胞KD_(10)及其分泌的抗体进行了较全面的研究。     

抗人乳腺癌糖蛋白单克隆抗体的研究

以人乳腺癌组织提取的糖蛋白免疫后的BALB/C小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系SP2/0细胞融合,经筛选及克隆化培养,建立了1株稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株GP-1D_8。 McAb GP-1D_8与乳腺癌组织产生强阳性反应;与正常乳腺及一些其它肿瘤组织为阴性反应;与甲状腺癌及正常结肠组织出现弱交叉反应。 经Sepharcyl-S200 HR分子筛分离的抗原分子,分子量为66kd,与Western blot测出的分子量相符。抗原分子含糖量为16％。其抗原决定簇为一段耐70℃温度的多肽。与前人报导的乳癌相关抗原有区别,可能是一种新的乳腺癌相关抗原。     

镉螯合物特异性单克隆抗体的制备与鉴定

为了获得镉螯合物特异性单克隆抗体, 以异硫氰酸苄基乙二胺四乙酸为双功能螯合剂连接镉离子与钥孔戚血蓝素,牛血清白蛋白合成了免疫原与包被抗原. 经过抗原鉴定,免疫Balb/c小鼠, 取小鼠的脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合制备杂交瘤, 经筛选和2次克隆化, 从制备的腹水中获取单克隆抗体. 用酶联免疫吸附测定法鉴定单克隆抗体3A9D9G7的特性,腹水效价为4×10-4, 单抗亚类为IgM, 轻链为κ型, 亲和常数为1.44×1010 mol/L, 其他金属螯合物的交叉反应低于0.9%, 表明该单克隆抗体能特异性识别Cd-EDTA, 为环境样品与食品中镉残留的快速检测提供了工具.     

天花粉蛋白抗人免疫缺陷病毒1型研究

目的检测用基因工程方法制备的天花粉蛋白抗人免疫缺陷病毒1型的活性。方法将人免疫缺陷病毒1型在细胞系中培养,加入天花粉蛋白后,观察细胞病变情况,检测P24抗原及逆转录酶的活性。结果加入天花粉蛋白的细胞始终未见细胞病变,P24抗原及逆转录酶检测均为阴性;阴性对照组细胞在第7 d以后均出现人免疫缺陷病毒1型感染典型细胞病变,P24抗原及逆转录酶检测均为阳性;阳性对照组始终未见HIV-1感染典型细胞病变,逆转录酶的活性检测和P24抗原检测结果均为阴性。结论天花粉蛋白在培养细胞系中可以有效地抑制人免疫缺陷病毒1型。     

抗猪促卵泡激素小鼠源单克隆抗体的研究

用猪促卵泡激素(PESH)作为抗原免疫BALB/C小鼠。通过将免疫小鼠的脾细胞和同系小鼠骨髓瘤细胞(SP2/O—Ag14)进行融合,建立了九株能稳定分泌抗PFSH单克隆抗体的杂交瘤细胞。其中三株杂交瘤细胞分泌的抗体被证实是对PFSH特异结合的,它们和另一种非常相近的垂体激素——猪促黄体激素(PLH)不结合。用有限稀释法对全部九株杂交瘤进行了三次亚克隆。有几种单克隆抗体被羟基磷灰石柱层析一步法从小鼠腹水所纯化。以聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测经纯化单克隆抗体制品的纯度。     

Internalization of Trichosanthin via Different Endocytic Mechanisms

Trichosanthin （TCS） is a plant toxin with ribosome-inactivating activity. TCS can be internalized by the host cells and then attacks the ribosomes resulting in cell death. However, the manner for endocytic uptake of TCS is not well understood. The present work investigates the endocytosis pathway of TCS in human choriocarcinoma cells. The different endocytic mechanisms are interfered by potassium depletion, cholesterol-extraction/addition, or treatments of various drugs. The experiments detect their effects on the TCS-uptake. The results show that a large portion of the TCS can be internalized by clathrin-dependent, as well as by clathrin-independent but cholesterol-dependent endocytosis in human choriocarcinoma cells.     

硝基苯胺单克隆抗体的制备和效果评价

为了测定水中硝基苯胺类化合物,进而开发酶联免疫分析法(EL ISA)快速检测方法,制备了抗硝基苯胺单克隆抗体。以合成的硝基苯胺完全抗原,作为免疫原免疫B a lb/c小鼠,采用B细胞杂交瘤技术,经免疫、融合、筛选和克隆等,得到了抗硝基苯胺单克隆抗体。该抗体亚类为IgG1,制备的单克隆抗体腹水效果评价达10-7,与其他硝基苯胺结构类似物无交叉反应。实验结果表明,用本间接竞争EL ISA方法可以精确地检测不同水样中硝基苯胺残留。     

天花粉蛋白基因的克隆、表达和活性鉴定

用PCR（Polymerase Chain Reaction)扩增出天芬粉蛋白（Trichosanthin,TCS)基因全长序列，插入表达载体，经双酶切鉴定及测序分析，表明阅读框正确，表达His-TCS活性融合蛋白并纯化天花粉蛋白，鉴定出其具有RNA N－糖苷酶活性和抗原抗体结合活性。     

抗人FXYD6单克隆抗体的制备及鉴定

制备了抗人FXYD6单克隆抗体,并进行初步鉴定.以FXYD6合成多肽作为免疫原,利用单克隆抗体杂交瘤技术建立阳性克隆细胞株;腹水诱导法制备抗人FXYD6单克隆抗体;蛋白A亲合层析法纯化;ELISA测定FXYD6单克隆抗体的特异性和效价;以所得特异性抗体为一抗,利用免疫组化法检测胰腺癌组织中FXYD6的表达.结果成功获得1株稳定分泌特异性抗人FXYD6单克隆抗体的杂交瘤细胞株;腹水诱导法生产抗人FXYD6单克隆抗体2.86 mg;FXYD6单克隆抗体可以与FXYD6合成多肽特异性结合,抗体效价1:5400;免疫组织化学显示胰腺癌组织中胞膜呈阳性染色.成功获得FXYD6单克隆抗体可以为进一步研究FXYD6的组织分布、生物学作用创造条件.     

天花粉蛋白诱发人体免疫抑制中DQA1和DQB1等位基因的顺式互补受邻近DQ基因的调变

人类白细胞抗原HLA－DQ等位基因DQA1*0501和DQB1*0201以顺式和反式两种互补格局决定中药提取物天花粉蛋白诱发人体免疫抑制中CDS介导型性状的表达．研究工作进一步揭示其中的顺式互补受另一单元型上DQB1等位基因的调变．其中起正向调变作用的等位基因是DQB1*0302，0303，0401，0601；发挥负向调变作用的等位基因是DQB1*0201，0501，0602．以上现象表明天花粉蛋白诱发人体免疫应答的遗传控制呈现十分复杂的格局．     

原子力显微镜研究蛋白质晶体生长机理及进展

原子力显微镜(AFM)这种能进行微尺度测量的精密仪器是目前研究晶体生长机理最为有效的方法之一,在晶体生长机理研究中起到了重要的作用,尤其是对于蛋白质晶体生长的研究显得更为突出.分别简明地阐述了利用AFM进行蛋白质晶体生长研究的工作原理,以及在这方面已经取得的研究成果,包括二维台阶生长、螺旋位错生长、法向生长、三维成核生长、台阶发展的不对称性、及杜仲抗真菌蛋白(EAFP)和天花粉蛋白(TCS)晶体生长的新进展.论述了利用空间微重力环境进行蛋白质晶体生长及空间蛋白质晶体生长的科研和应用, 指出今后进行蛋白质晶体生长研究的趋势和前景.     

Production of transgenic blastocyst of sheep by somatic cell cloning

Five samples from primary cultures of five sheep ovarian granulosa cells were transfected by pEGFP- N1 DNA. Five transgenic positive cell lines, each from one of the five samples above, were used as donor nuclei for somatic nucleus transfer. A total of 352 in vitro matured and enucleated sheep oocytes were fused electrically with transgenic granulosa cells and 329 reconstructed embryos were obtained after activation by Ionomycin/6-DMAP, and these embryos were cultured in SOFaaBSA medium for 7 d. The result shows that 312 embryos (94.8%) had gone through cleavage and among them 63 (19.1%) had developed to the blastocyst stage. Expression of GFP gene was detected in various stages of early embryonic development by sampling randomly. Blastocyst rates given by the four cells treated with 0.5% FCS starvation was 19.6% (55/280) and it had not shown difference significantly (P＞0.05) with the result obtained with another cell line that had not gone through serum starvation (16.3%, 8/49). This experiment indicates that sheep transgenic embryos up to the blastocyst stage can be produced effectively by the combination of gene transfection in somatic cells in culture and somatic cell cloning.     

东方蝼蛄提取物对3株人宫颈癌细胞的细胞毒性研究

采用乙醇冷浸法对东方蝼蛄的干燥品粉碎物进行提取,采用聚酰胺柱层析分离划段得到东方蝼蛄乙醇提取物的不同部位,所得部位通过四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)对3种人宫颈癌细胞株(He La、Caski、C-33A)进行了体外肿瘤细胞毒性测试.结果表明,东方蝼蛄提取物中有1个分离样品的半数抑制浓度(IC50)接近10.0μg/mL,对3种人宫颈癌细胞株均具有明显的细胞毒性.东方蝼蛄乙醇提取物中存在抑制肿瘤细胞生长的物质,值得对其进一步深入研究.