绿萝花水溶性多糖体外抗肿瘤的实验研究

目的:探讨藏药绿萝花水溶性多糖体外抗肿瘤作用,为绿萝花进一步开发利用提供科学依据.方法:以绿萝花水溶性多糖为研究材料,以S180腹水瘤细胞株、HepA 1-6小鼠肝癌细胞株和L1210小鼠白血病细胞株为研究对象,以CCK-8法、AO/EB染色法和Annexin V/PI双染法流式细胞术为主要检测手段,以肿瘤细胞生长、肿瘤细胞形态、肿瘤细胞凋亡等为考核指标,研究藏药绿萝花水溶性多糖的体外抗肿瘤作用.结果:S180腹水瘤细胞为绿萝花水溶性多糖敏感细胞,1000.0μg/mL抑制率为71.38%;不同剂量绿萝花水溶性多糖均具有诱导S180细胞发生凋亡,均可以上调瘤细胞的早期和晚期凋亡率,1000.0μg/mL效果最好,凋亡率达到26.60%.结论:藏药绿萝花水溶性多糖具有体外诱导肿瘤细胞凋亡作用,作用相当于5-FU.     

藏药绿萝花水提物对小鼠免疫功能的影响

探讨藏药绿萝花对机体免疫功能的影响,为临床合理用药和进一步开发利用提供科学依据.本研究以L9(34)正交设计试验所获得的绿萝花水萃取干膏制剂为研究材料,以N2Hmice小白鼠为研究对象,以Con A诱导小鼠淋巴细胞转化试验(CCK-8法)、血凝和血凝抑制试验及巨噬细胞吞噬试验为研究方法,以(SI)刺激指数、(HI)新城疫抗体效价、吞噬百分率和吞噬指数为检测指标,探讨不同剂量绿萝对机体免疫功能的影响.实验结果显示低剂量绿萝花能够增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬指数,其增强作用极显著优于空白组;低、中剂量绿萝花组具有促进小鼠血清ND抗体产生的作用,作用显著优于空白组;低、中剂量绿萝花组具有促进小鼠外周血淋巴细胞增殖的作用,作用显著优于空白组.研究结果表明低(1.08g/次/d,7d)、中(2.16g/次/d,7d)剂量绿萝花对小鼠免疫功能具有增强作用.     

藏药绿萝花对正常小鼠糖耐量影响的试验研究

探讨藏药绿萝花的降血糖作用,为临床合理用药和进一步开发利用提供科学依据.以L9(34)正交设计试验获得绿萝花水萃取干膏制剂为研究材料,将实验动物分为空白组、高、中、低剂量绿萝花组和阳性药物组,以尾静脉血糖值、糖耐量曲线下面积为检测指标,研究不同剂量绿萝花对正常小鼠糖耐量影响.实验结果:灌胃后30min,高剂量绿萝花血糖值(11.72 mmol/L)与中剂量绿萝花组血糖值(11.41mmol/L)显著低于空白组(P0.05);三个剂量绿萝花组的糖耐量曲线下面积无显著差异(P0.05),但都均低于空白对照组的糖耐量曲线下面积,尤以中、高剂量绿萝花和盐酸二甲双胍片效果较明显.研究结果表明:绿萝花在连续服用5d后具有抑制机体对葡萄糖吸收的能力、增强机体对糖耐受的能力.     

遗传毒物对秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)寿命的影响

研究了丝裂霉素C,噻替哌和环磷酰胺对秀丽隐杆线虫(C.elegans)温度敏感突变型DH26衰老的影响。结果表明,除极高浓度(100μg/ml)的丝裂霉素C能缩短线虫寿命外,其余对寿命均无影响。     

大蒜提取液对蚕豆根尖微核率的影响

利用蚕豆根尖细胞微核试验方法研究大蒜提取液对环磷酰胺诱导蚕豆微核率的影响,并比较生食与熟食大蒜的抗突变作用.实验结果表明:1.生食大蒜浓度高于0.03g/mL时,具有一定的致突作用.2.当环磷酰胺浓度为5mg/mL时,生食大蒜比熟食大蒜抗突变作用明显.     

茶多酚诱导卵巢癌COC1细胞凋亡的研究

卵巢癌是女性生殖系统恶性肿瘤之一,而茶多酚具有抗肿瘤和抗氧化的作用,作者研究茶多酚对体外培养的卵巢癌COC1细胞凋亡的影响.采用不同浓度茶多酚处理卵巢癌COC1细胞,24h后分别采用AO/PI双染法和琼脂糖凝胶电泳法(DNA Ladder),观察和分析茶多酚对COC1细胞凋亡的影响.结果显示,低浓度茶多酚(≤500μg/mL)处理24h后,出现早起凋亡现象;而高浓度的茶多酚(2 000μg/mL)后,出现了明显的晚期凋亡现象;过高浓度(4 000μg/mL)处理,细胞出现死亡现象.不同浓度的茶多酚处理后,细胞均可检测到DNA Ladder,且随着茶多酚浓度的增加,DNA裂解程度加深,电泳中DNA Ladder更明显.实验结果表明,不同浓度茶多酚处理均可以诱导卵巢癌细胞株COC1产生细胞凋亡,研究结果为筛选新型的抗癌药物提供参考.     

合欢花水提物对大鼠脑胶质瘤C6细胞株的增殖抑制与凋亡诱导作用

采用MTT法检测合欢花水提物对C6细胞增殖活力的影响,流式细胞术检测该水提物对C6细胞的诱导凋亡作用.结果表明:合欢花水提物能抑制C6细胞的增殖,且具有剂量和时间依赖性,其在24 h、48 h、72 h时对C6细胞的半数抑制率(LD50)分别为:305 μg/mL、50 μg/mL、15 μg/mL.流式细胞术结果显示:200 tμg/mL、300μg/mL合欢花水提物均可诱导C6细胞发生早期凋亡,与对照组细胞相比,早期凋亡率分别由对照组的0.7％增加到了4.3％、14.3％.提示合欢花水提物抑制C6细胞增殖机理与诱导细胞凋亡途径有关.     

双歧杆菌对抗菌素的敏感性与抵抗性

对 10种抗菌素进行双歧杆菌的敏感性试验 ,探讨VitC、VitB1、VitB6及异麦芽寡糖对双歧杆菌抵抗抗菌素的敏感作用 .结果表明 ,双歧杆菌对 β -内酰胺类 (MIC :青霉素 0 .1177～ 0 .310 5 μg /mL ,先锋VI号 0 .2 95 9～ 0 .885 3μg /mL)、大环内酯类 (MIC :红霉素 0 .0 85～ 0 .1137μg /mL ,制霉菌素 0 .90 46～ 8.0 2 9μg /mL ,乙酰螺旋霉素 1.2 9～ 2 .94μg /mL)以及四环类的四环素 (MIC :0 .2 46 3～ 0 .4118μg /mL)很敏感 ;对四环类的土霉素(MIC :15 .7～ 2 9.4μg/mL)较敏感 ;对氨基糖苷类 (MIC :链霉素 6 5 .9～ 190 μg /mL、庆大霉素 490～ 941μg /mL、卡那霉素 16 5～ 2 15 μg /mL)的作用不敏感 .而 3种维生素和异麦芽寡糖均具有提高双歧杆菌对抗菌素的耐药性     

羟基喜树碱联合丝裂霉素诱导人白血病K562细胞凋亡

观察羟基喜树碱与丝裂霉索联合应用对人白血病细胞K562的作用效果,并探讨其机制。不同浓度羟基喜树碱与丝裂霉素单独及联合作用于人白血病细胞K562后,应用台盼蓝拒染法检测细胞生长抑制率,计算合用指数（CI）,流式细胞仪（FCM）检测K562细胞凋亡率,吖啶橙（AO）荧光染色和透射电镜观察凋亡形态学变化。结果表明：单独应用时羟基喜树碱和丝裂霉素的IC50分别是8μ/mL和12．5μg/mL,联合应用时IC50下降为4μg/mL（HCPT）和3．6μg/mL（MMC）,CI=0．78,为协同效应。羟基喜树碱与丝裂霉素单独及联合应用均可诱导K562细胞凋亡。2种药物联合应用时的凋亡率高于各自单独用药。羟基喜树碱与丝裂霉素联合应用可以通过共同诱导细胞凋亡。协同抑制人白血病细胞生长。     

LR—98对肝癌细胞增殖的抑制性效应

利用在体和离体实验相结合 ,以动物接种肿瘤细胞后的生存时间、瘤重与体重比值、肝癌细胞生存率、超氧化物歧化酶 (SOD)活性及肝癌细胞凋亡为指标 ,研究了不同剂量榄仁树叶提取物 (LR 98)对肝癌细胞增殖的抑制性效应及可能机制 .在体实验结果表明 ,5× 10 - 3g/mLLR 98处理组动物的生存时间较对照组明显延长 (P <0 .0 1) ,不同剂量处理组 (5× 10 - 3g/mL ,2× 10 - 2 g/mL ,5× 10 - 2 g/mL)的瘤重与体重比值均较对照组明显减小 (P <0 .0 5) .体外培养的细胞经不同剂量LR 98(1× 10 - 5g/mL ,5× 10 - 5g/mL ,1× 10 - 4 g/mL)作用后 ,生存率及SOD活性均显著下降 (P <0 .0 1) .流式细胞仪分析表明 ,不同剂量LR 98作用于肝癌细胞 8h后 ,在G1 期前均出现一亚二倍体峰 ,表明均能诱导肝癌细胞发生凋亡 ,凋亡率分别达 2 9.4 4 % ,2 4 .4 5%和 2 5.2 2 % .以上结果说明LR 98可显著抑制肝癌细胞增殖 .降低SOD活性 ,诱导肝癌细胞凋亡可能是LR 98抑制肝癌细胞生长的机理之一 .     

重组人酸性成纤维细胞生长因子的遗传毒性

目的:了解重组人酸性成纤维细胞生长因子(rhaFGF)皮肤外用的遗传毒性。方法:用CHL细胞染色体畸变试验、小鼠骨髓PCE微核试验和Am es试验方法对rhaFGF进行遗传毒性研究。结果:rhaFGF各剂量组和阴性对照组在加或不加S9情况下,其CHL染色体畸变率均<5%;各剂量组的骨髓细胞微核细胞率与阴性对照组比较均差异无显著性(P>0.05);rhaFGF各剂量组(0.5~5 000μg/皿)对TA97、TA98、TA100、TA102菌珠在加或不加S9混合液条件下均无致突变作用。结论:在所选试验和剂量范围内未见到rhaFGF具有遗传毒性。     

响应面法优化油脂酵母发酵产油的影响因子

微生物油脂作为一种新型油料资源,研究其发酵条件具有重要意义.以实验室保存菌株EAM-AC16为出发菌,通过单因素试验和响应面法优化菌株EAM-AC16的发酵条件.确定最优发酵条件为:葡萄糖浓度82.37 g/L,接种量9.45%,培养时间为146.4 h,pH6.0,培养温度30℃,空气量(装液量mL/三角瓶mL)70mL/250mL和(NH4)2SO4浓度1 g/L时,菌株EAM-AC16的油脂产量达5.204 g/L.利用气相色谱分析菌株EAM-AC16合成油脂的主要成分为:棕榈酸(C16:0)、亚油酸(C18:2)、γ-亚麻酸(C18:3)和反油酸(C18:3)等.     

栖热菌(Thermus)的DNA转化研究

由栖热菌FDB8(Thermus sp.FDB8)提取的染色体DNA对栖热菌FD3009(Thermus sp.FD3009)进行了转化.用丝裂霉素C选择培养基对转化子进行选择,共获得3个转化子.它们的菌落色泽、对丝裂霉素C的抗性强度和耐热DNA聚合酶活性均介于供体菌和受体菌之间,而其菌体生长速度和破壁难易程度则优于供体菌和受体菌.结果表明,转化子是由供体菌FDB8的染色体DNA转化了受体菌FD3009所致,同时还可由转化子进一步选育出抗丝裂霉素C的耐热DNA聚合酶高产菌株.     

莪术醇对HNE1鼻咽癌细胞荷瘤鼠的抑瘤作用

目的考察研究莪术醇对HNE1鼻咽癌细胞荷瘤鼠的抑瘤作用。方法体外通过细胞划痕试验,考查莪术醇不同浓度(12.5μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL)对HNE1鼻咽癌细胞迁移能力的影响,计算细胞迁移率(细胞迁移率(%)=(0 h划痕距离-12 h//24 h/48 h划痕距离)/0 h划痕距离×100%);体内采用HNE1鼻咽癌细胞接种裸鼠待长出实体瘤,将实体瘤移植裸鼠皮下建立HNE1鼻咽癌荷瘤鼠模型,用莪术醇分别给实验组裸鼠灌胃0.79 mg/10 g,对照组给灭菌蒸馏水,阳性组给予去氧氟尿苷,每日1次,连续30 d。每周测量体质量和肿瘤大小2次,第30天给药后处死小鼠,解剖称肿瘤质量,体积计算公式V=a×b×c×π/6,计算抑瘤率,评价莪术醇对HNE1鼻咽癌荷瘤鼠的抑制作用。结果与对照组比较,体外试验证明莪术醇100μg/mL对HNE1鼻咽癌细胞迁移性有统计学意义(P0.05),体内试验证明莪术醇组对HNE1鼻咽癌细胞荷瘤鼠肿瘤的抑制作用明显,抑瘤率为34.04%,肿瘤质量与对照组比较有统计学意义(P0.05),与对照组和去氧氟尿苷组比较,肝脏和脾脏系数均有统计学意义(P0.05),且与去氧氟尿苷组比较,肝脏系数有统计学意义(P0.05)。结论通过实验得出莪术醇能降低HNE1鼻咽癌细胞迁移能力并对荷瘤鼠肿瘤具有抑制作用,为莪术醇对肿瘤的抑制作用研究提供了实验基础。     

用新洁尔灭测定核酸的共振瑞利散射方法研究

在酸性BR缓冲溶液 ，新洁尔灭（溴化十二烷基二甲基苄铵，BB）与小牛胸腺DNA（ctDNA)鲱鱼精DNA（hsDNA)、鲑鱼精DNA（sDNA)和酵母RNA（yRNA)反应，产生强烈的共振瑞利散射（RRS）增强，其最大散射峰位于470nm处。由此建立测定微量核酸的新分析方法。ctDNA,hsDNA,sDNA和yRNA的测定范围分别为0－4.2μg/mL，0-4.0μg/mL,0-4.6μg/mL,0-12.0μg/mL；检出限（3σ）分别为8.6ng/mL,9.2ng/mL,9.9ng/mL和27.9ng/mL。研究发现RRS强度变化与核酸构象转变有密切联系，因此RRS法有望成为研究核酸构象的有用手段。     

龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡的观察

观察龙葵碱对3种消化系统肿瘤细胞株人肝癌细胞HepG2、人胃癌细胞SGC-7901、人大肠癌细胞Ls-174的细胞毒作用.并从细胞凋亡角度揭示龙葵碱对敏感细胞株的作用机制.采用MTT法观察龙葵碱对3种肿瘤细胞株的细胞毒作用;采用AO/EB双染,激光共聚焦扫描显微术(confocal)观察龙葵碱对HepG2肿瘤细胞形态的影响;PI单染,流式细胞仪测定龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡的凋亡率及对细胞周期的影响.龙葵碱作用于HepG2、SGC-7901、LS-174的IC50分别为14.47μg/mL、(50μg/mL、(50μg/mL;在形态学观察实验中,阴性对照组细胞形态正常,0.003 2μg/mL、0.016μg/mL龙葵碱使细胞外周呈微弱皱缩状改变,0.08、0.4、2μg/mL龙葵碱使HepG2细胞出现大量碎片及凋亡小体等典型的细胞凋亡形态.凋亡率测定结果表明5个剂量龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡率分别为6.0%、14.4%、17.3%、18.9%、32.2%,0.08μg/mL喜树碱诱导HepG2细胞的凋亡率为21.9%.细胞周期观察发现龙葵碱各组G2/M期均消失,S期明显升高.龙葵碱对HepG2人肝癌细胞株比较敏感,能够诱导HepG2细胞凋亡,并将HepG2细胞阻止在S期,影响肿瘤细胞DNA合成.     

丙二醇和吐温-80对人淋巴细胞的SCE的诱发及DNA损伤

本文研究了医药工业中常用的两种助溶剂丙二醇和吐温-80对人淋细胞姊妹染色单体互换(SCE)的诱发作用及对 DNA 的损伤作用.丙二醇(4.13mg/mL)对 SCE 无明显的诱发作用,对 DNA 复制模板也无损伤.吐温-80能诱发 SCE 频率增高,剂量与效应呈线性相关.当浓度为0.001～0.2mg/mL 时与对照组相比差异极显著(p<0.01).使 SCE 频率增加到对照组的2倍的浓度为0.12mg/mL.浓度为1mg/mL 时严重抑制细胞增殖和分裂.它也能损伤 DNA 复制模板.因此,用吐温-80作助溶剂时应该慎重.     

藏药抗肝癌活性研究

本实验采用快速溶剂萃取法制备收集100种常用藏药的环己烷、乙酸乙酯和甲醇提取物,并运用MTT法对两个肝癌细胞株HepG2和SMMC-7721进行各提取物的抗肝癌活性测试,同时选用L-02细胞来评价其体外毒性.抗肝癌活性结果显示100种常用藏药中17种藏药材有良好的抗肝癌活性,其IC50值均小于150 μg/mL,其中马兜铃、蓝翠雀花、甘青青兰、掌叶橐吾的乙酸乙酯提取物显示出显著的抗肝癌活性,其IC50值均小于50 μg/mL,但马兜铃乙酸乙酯提取物对正常肝细胞L-02显示出一定的毒性.在进一步的抗HepG2肝癌活性验证中,结果显示蓝翠雀花乙酸乙酯提取物和甘青青兰乙酸乙酯提取物具有显著的抗肝癌活性,两者在抗HepG2肝癌细胞株活性中皆显示出显著的时效和量效关系.运用倒置显微镜以及Hoechst 33258荧光染色法对经过蓝翠雀花乙酸乙酯提取物或甘青青兰乙酸乙酯提取物作用的HepG2细胞形态进行观察,结果提示蓝翠雀花和甘青青兰乙酸乙酯提取物可能是通过诱导HepG2细胞凋亡而显示抗癌活性.     

中药复方板蓝根颗粒抗柯萨奇B_4病毒作用的实验研究

采用中药复方板蓝根颗粒进行了体外抗柯萨奇病毒B4(CVB4)的研究,通过观察病毒引起的细胞病变效应(CPE)、MTT法检测细胞活性,作为考核药物抗病毒作用.结果表明:中药复方板蓝根颗粒对CVB4无直接灭活作用,但能抑制CVB4在Hep-2细胞内的的生物合成和阻止CVB4的吸附,其半数抑制浓度(IC50)分别为1129.00和1130.44μg/mL,治疗指数(TI)均为2.78.在100～1600μg/mL范围内复方板蓝根颗粒与CVB4抑制率呈明显的量效关系(P<0.01),在1600μg/mL时能抑制CVB4在Hep-2细胞内的增殖>50%.研究表明中药复方板蓝根颗粒能有效地抑制CVB4在Hep-2细胞中的增殖,其抗病毒作用发生在阻断病毒吸附细胞和抑制病毒进入细胞之后的复制增殖.     

吖啶橙-SDS-核酸荧光体系的研究及分析应用

在pH=5．89的六次甲基四胺-HCl缓冲溶液中，DNA可使吖啶橙(AO)的荧光强度增强，在一定浓度范固内，体系的荧光强度变化与DNA浓度呈线性关系，可用于DNA的定量测定。体系的荧光强度在加入阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)后有很大增强。研究了pH值及缓冲溶液种类、吖啶橙用量、表面活性剂种类及用量等对体系荧光强度的影响。结果表明，在最佳实验条件下，DNA浓度的线性范围分别为0～2．0μg/mL、2．0～10．0μg/mL，检出限为7．18ng/mL，相对标准偏差为2．0%。该方法线性范围较宽、灵敏度高、反应速度快、稳定时间长，是用染料定量分析DNA的一种无毒、高效、简便的新方法。