麻疯树花药愈伤组织诱导分化与生根培养

以麻疯树花粉处于单核中晚期的花药作为实验材料,探讨了麻疯树花药培养从愈伤组织诱导,愈伤组织分化芽,壮苗,生根的整个过程.其中愈伤组织诱导的最好培养基为N6+2,4-D 1.0 mg/L+KT 0.4 mg/L+10%蔗糖,避光培养;在愈伤组织分化芽的过程中,TDZ起到了非常明显的效果,最佳的培养基为MS+TDZ 2.0 mg/L+IAA 2.0 mg/L+水解酪蛋白1g/L+3%蔗糖;最合适的壮苗培养基为MS+GA3 1.0mg/L+6-BA 0.5 mg/L+IBA 1.0 mg/L+3%蔗糖;生根效果     

麻疯树毒蛋白对小鼠器官的急性毒性研究

研究麻疯树毒蛋白(curcin)对小鼠器官的急性毒性作用.用一定浓度梯度20、25、31、38.4、48、60×10-3g/kg的蛋白溶液腹腔注射小鼠,并用Bliss方法计算出其腹腔给药的半数致死量(LD50)为37.70×10-3g/kg,95%可信限为(33.228~43.151)×10-3g/kg.对用药小鼠器官进行病理切片研究,结果显示20×10-3g/kg的用量几乎未见对器官的异常影响,在(25～48)X 10-3 g/kg范围内对小鼠的重要器官损伤较小,部分器官如肝、肾、肺见灶性水肿充血;当给药剂量达到60X10-3g/kg时观察到肝脏细胞肿胀、出血明显,肺部充血出血、灶性区域纤维素渗出,胰腺明显充血、有部分个体出现胰腺脂肪变,部分个体的肾出现弥漫性充血.这为麻疯树毒蛋白制备免疫毒素的应用提供了参考.     

麻疯树花药愈伤组织诱导的初步研究

Preliminary studies were done on the factors affecting the callus inducement from the anther of Jartopa curcas L.,including the development stage of microspores,cold pretreatment,hormone and sucrose concentration.The results showed: compared with other stage,microspores at uninucleate stage were more suitable for culture;the cold pretreatment at 4℃ for 3～5 days is essential to high ratio of inducement;the culture medium that MS+ NAA 2.0mg/L +KT 0.4mg/L +sucrose 9% is comparativelymore suitable for callus in...     

麻疯树外植体愈伤组织中毒蛋白的Western-blot鉴定

麻疯树外植体愈伤组织中毒蛋白的Western blot鉴定戎　芳1,2,王胜华1,赵小光1,郭　亮1,魏　琴1,唐　琳1,徐　莺1,陈　放1, (1.四川大学生命科学学院,成都610064;2.安徽大学生命科学学院,合肥230039)麻疯树(JatrophacurcasL.)系大戟科麻疯树属植物,耐干旱贫瘠,抗病虫能力强[1,2],主要生长在热带和亚热带地区,在我国西南地区有丰富的资源.麻疯树种子对整体动物,如小白鼠[3]、羊[4]及人,特别是幼儿[5]表现出一定的毒性,且具有致死作用.麻疯树种子含毒成分主要是种子毒蛋白(curcin),该蛋白是一种单链核糖体失活蛋白,具抗癌活性[6],是一种具开…     

麻疯树毒蛋白(curcin)基因转化水稻的研究

以粳稻(Japonica)品种日本晴与中花11号为材料,对影响农杆菌介导水稻转化体系的几个因素进行了研究,建立了农杆菌介导的有效水稻转化体系.在该体系中,首次使用浓度为10-4g/mL嘌呤合成抑制剂acivicin在转化前对水稻愈伤组织进行预处理,结果表明此法可有效提高GUS基因的瞬时表达率.同时,利用插入了麻疯树毒蛋白(curcin)基因的植物表达质粒pBI121-curcin,通过农杆菌介导转化水稻,获得了多株转基因植株.通过PCR鉴定,证实curcin基因已整合到水稻基因组中.     

麻疯树(Jatropha curcas)毒蛋白curcin基因家族成员的分离和描述

麻疯树curcin基因家族中4个成员通过PCR扩增被分离．它们都不合有内含子,序列分析表明它们编码Ⅰ型核糖体失活蛋白（Ribosome-Inactivating Proteins,RIPs）,证明curcin基因如同大多数RIPs一样由多基因家族编码．四个curcin基因家族成员和另两个已知curcin基因家族成员的开放阅读框（Open Reading Frame,ORF）的序列比对结果显示curcin基因家族成员至少可分为两个亚类群,亚类群之间的氨基酸序列相似性低于88％．分别将这4个curcin基因家族成员命名为curA2、curA3、curB2、curB3．对四条基因启动子区和ORF生物信息学分析推测CurB2、curB3可能是被真菌及逆境诱导的curcin基因家族成员全长,而curA2、curA3可能是麻疯树胚乳贮存的curcin基因家族成员全长．Southern杂交结果显示,麻疯树基因组中至少有3个以上curcin基因家族成员．     

防止黑松外植体及其愈伤组织褐变的方法

防止黑松林外植体及其愈伤组织褐变的研究表明,取黑松的成熟胚做外植体诱导愈伤组织的成功率比新梢要高;暗培养能显减轻褐变的发生;培养基中附加抗氧化剂Vc和吸附剂活性炭均不能有效地抑制继代培养愈伤组织的褐变。选择适宜的培养基类型（1／2MS）、配合适当的生长调节物质种类及浓度,能有效地防止愈伤组织的褐变,提高增殖倍数。     

花生不同外植体愈伤组织的诱导及植株再生

以成熟花生种子的上、下胚轴和叶片外植体为对象,在离体培养下,考察几种外植体再生能力的差异并对其作出对比分析.结果表明:上述外植体均能诱导出愈伤组织并能够进一步再生出幼苗,但不同外植体的再生能力有所差异,其再生能力大小依次为:上胚轴>叶片>下胚轴,培养基的差异对外植体愈伤组织诱导及再生起决定性作用,不同预培养时间对愈伤诱导及再生也有影响,总的来看是预培养时间短的外植体要好于预培养时间长的外植体.     

一品红不同外植体愈伤组织诱导能力的研究

分别用一品红(Euphorbia pulcherima Willd)自然植株的叶片、叶柄、休眠芽、顶芽、带皮茎段、去皮茎段，以及经一段时间组织培养的试管苗相应器官作外植体，进行愈伤组织诱导能力的研究．结果表明，在所有试验过的外植体中，以试管苗的幼茎、幼叶为最好，自然植株上所取的幼茎、幼叶次之，愈伤组织诱导率分别为100％和95．0％；叶柄的愈伤组织诱导率极低，为15．0％左右；休眠芽、顶芽均未能诱导成功．     

不同外植体和激素对银杏愈伤组织诱导和生长的影响

以银杏胚的不同部位子叶、胚芽、胚轴、胚根为外植体,比较不同外源激素和培养条件对银杏愈伤组织诱导和继代培养的影响,结果表明子叶最易诱导愈伤组织,且在暗条件下诱导效果最好,2,4-D和队影响子叶的愈伤诱导能力;以茎段为外植体,发现生长素为茎段愈伤组织诱导所必需,且NAA诱导效果好于2,4-D;以叶片为外植体,发现生长素中的NAA诱导愈伤效果最好,雌雄叶的诱导能力相同.在愈伤组织生长过程中,NAA是子叶和茎段愈伤组织继代培养必需的,BA对茎段愈伤组织生长速.度无显著影响,但可使愈伤组织敛密,并有利于分化.MS 1 mg/LNAA 0.005 mg/LKT(或BA)的培养基对叶片愈伤组织生长最理想,雄叶愈伤生长较快,光照培养促进愈伤组织生长.     

麻疯树核糖体失活蛋白curcin基因的原核表达及其抗真菌活性的研究

通过PCR方法,将麻疯树核糖体失活蛋白curcin的开放阅读框片段从麻疯树总DNA中扩增出来.并将该克隆基因片段连接到原核表达载体pQE-30中,成功构建了重组质粒pQE-C,转化大肠杆菌M15菌株.经IPTG诱导后,curcin重组蛋白在大肠杆菌中成功表达.然后通过纯化原核表达产物,得到纯化的curcin重组蛋白,并以纸片法进行体外抗菌活性检测,发现其具有较强抗真菌活性.     

麻疯树小热激蛋白JcHSP-17.5的纯化与活性鉴定

将实验室已有的pET32a-JcHSP17.5重组载体,经测序验证后,转入大肠杆菌BL21(DE3)plysS中,不同温度条件下,用不同浓度异丙基硫代-D-半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达,优化表达条件;选择镍离子亲和层析柱(Ni-NTA)纯化JcHSP-17.5蛋白,SDS-PAGE电泳检测蛋白纯度;通过热激聚合反应来鉴定蛋白的分子伴侣活性.结果表明,17℃,200r/min,0.5mM IPTG诱导13h为JcHSP-17.5蛋白的最佳诱导表达条件,使用200mmol/L咪唑缓冲液纯化蛋白后,每500mL菌液可得到1.345mg的电泳纯蛋白,该蛋白在高温(45℃)条件下能够阻止苹果酸脱氢酶(MDH)发生聚合反应,表现出较强的分子伴侣活性.     

栝楼愈伤组织细胞中天花粉蛋白的免疫细胞化学定位研究

采用免疫荧光和免疫胶体金方法，对栝楼愈伤组织中天花粉蛋白进行了细胞学定位研究，并对ＴＣＳ在栝楼愈伤组织细胞中的分布进行讨论，用间接免疫荧光染色方法在光学显微镜睛发现，ＴＣＳ主要分布在细胞壁处和一些细胞质颗粒中，电子显微镜下对免疫胶体金标记样品的观察结果进一步证实，ＴＣＳ集中分布在细胞壁处。     

NaCl胁迫下枸杞愈伤组织可溶性蛋白含量的变化

以枸杞愈伤组织为材料,分别接种于对照及含100,200,400mmol／L NaCl的培养基上,培养1,3,5,7,11d．实验结果表明,随着盐浓度的升高．枸杞愈伤组织可溶性蛋白含量降低,且随着时间的延长呈先上升后下降的趋势,即随着盐浓度的升高,培养1,3,5d时可溶性蛋白含量上升,5d后开始下降;培养11d时在不同含盐培养基上加入外源ABA,愈伤组织可溶性蛋白含量升高,通过SDS-PAGE电泳实验发现,当NaCl浓度为400mmol／L时,在愈伤组织中诱导出一条40．5kD的新蛋白．     

一个麻疯树C2H2型锌指蛋白基因JcZFP1的克隆与表达分析

从麻疯树胚乳cDNA文库中克隆得到一个C2H2型锌指蛋白基因,JcZFP1,全长931bp,开放阅读框全长735bp,编码244个氨基酸残基,等电点pI=7.0,分子量PA=27.38kD.C2H2型锌指结构位于第81至103个氨基酸残基中,包括植物锌指蛋白特有的保守氨基酸序列QALGGH.在该基因的顺式作用元件上发现了与生长发育和逆境胁迫相关的启动元件.荧光定量PCR(qPCR)检测发现,JcZFP1基因在麻疯树各器官中的表达量依次为:绿果皮花叶根茎种仁,且幼嫩器官表达量高于成熟器官;对麻疯树幼苗进行低温、干旱胁迫时,JcZFP1基因的表达量明显增加,表明该基因可能在麻疯树的生长发育及逆境胁迫应答过程中起重要作用.     

大叶冬青叶外植体的愈伤组织诱导与不定芽苗再生

将离体培养的大叶冬青幼叶外植体在含有TDZ(噻吩隆,浓度0．1～5．0μmol／L)与IAA(浓度0．1～5．0μmol／L)的wPM培养基上培养,能够产生愈伤组织。当TDZ浓度不变时,5．0μmol／LIAA处理产生的愈伤组织块直径最大;愈伤组织块转培到含有不同浓度TDZ与IAA的WPM培养基上,在5．0μmol／LTDZ 3．0μmol／LIAA的培养基上出现较多不定芽苗(每一愈伤组织块平均产生11．2株);几种细胞分裂素作用比较研究表明：在BA、TDZ与ZT(均为15．0μmol／L)处理中,较好的芽苗增殖系数分别为3．7,6．0和7．4,BA与2-ip(均为3．0μmol／L)处理时芽苗高生长可达34mm和45mm。     

麻疯树核糖体失活蛋白Curcin和Curcin C与腺苷及腺嘌呤的互作方式分析

麻疯树核糖体失活蛋白Curcin和Curcin C均具N-糖苷酶活性,然而两者的体外翻译抑制能力却具有明显差异,这暗示着两者的N-糖苷酶活性也存在差异.为了探究造成这一差异的结构基础,本研究使用trRosetta对两种蛋白进行了三级结构的预测,通过PROCHECK和Qmean对预测得到的三级结构模型进行了质量评估,利用Chem3D对小分子配体腺嘌呤和腺苷进行了结构优化,借助UCSF Chimera对Curcin及Curcin C活性位点的氨基酸组成进行了预测.最终使用分子对接软件AutoDock将预测得到的模型与小分子腺嘌呤及腺苷进行分子对接.对接结果显示,两种蛋白与腺嘌呤的相互作用模式具有较高的相似性,但Curcin的关键氨基酸Arg并未参与到与配体的相互作用.此外Curcin C与腺嘌呤和腺苷之间的结合能都低于Curcin,且其和腺苷与腺嘌呤之间结合能的差值也要高于Curcin.这一结果暗示着Curcin和Curcin C之间的活性差异与其活性位点处的结构特征有关,Curcin C中的关键氨基酸Arg与腺嘌呤及腺苷的结合位点更为靠近,从而导致Curcin C与底物之间的结合能更低,...