3T3成纤维细胞和巨噬细胞在含rhbFGF培养基血纤维上的共培养

目的：了解３Ｔ３成纤维细胞和巨噬细胞在含重组人碱性成纤维细胞生长因子（ｒｈｂＦＧＦ）培养基血纤维上的生长行为。方法：采用四甲基偶氮唑盐（ＭＴＴ）比色法、相差显微镜观察、吉姆萨染色和扫描电子显微镜观察方法,结果：在低血清含ｒｈｂＦＧＦ的培养条件,３Ｔ３成纤维细胞和巨噬细胞在血纤维上能够良好生长。结论本研究揭示,血纤维不仅可以作为一种低免疫原性或无抗原性的生物支持材料用于三维组织培养,而且也可作为ｒｈ     

酸性成纤维细胞生长因子受体及信号转导的研究进展

酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)的生物学功能与受体结合、细胞信号转导具有密切的关系。近年来已发现5种成纤维细胞生长因子受体(FGFR),其中主要是FGFR-1、FGFR-2与aFGF结合并被激活,启动多条信号转导途径,引起胚胎发育、血管生成以及创伤修复等多种生物效应,其中,FGER与aFGF结合后启动的MAPK途径是调节各种细胞趋化应答、分化、分裂的重要途径,是细胞增殖、分化等信息传递途径的交集点和共同通路。     

成纤维细胞和ES细胞在小鼠和兔去核卵母细胞内发育

以昆明白小鼠成纤维细胞和胚胎干（ES）细胞作为供核细胞,以昆明白小鼠和日本大耳白兔的MⅡ期去核卵母细胞作为受体,采用核移植方法,构楚了克隆胚胎．在同种克隆中,以ES细胞为供核细胞的克隆胚胎卵裂率明显低于以成纤维细胞为供核细胞的克隆胚胎卵裂率（24．4％相对于56．9％,P〈0．05）,1．8％的ES细胞克隆胚胎发育到囊胚阶段,而成纤维细胞克隆胚胎没能发育到囊胚阶段;在异种克隆中,以ES细胞为供核细胞的克隆胚胎卵裂率（89．6％）和囊胚发育率（18．8％）明显高于以成纤维细胞为供核细胞的克隆胚胎卵裂率（54．2％）和囊胚发育率（4．2％）．     

大鼠卵泡膜中肌成纤维细胞的形成及意义

目的:探讨肌成纤维细胞在卵泡膜中的形成及意义。方法:分别取动情期和非动情期大鼠卵巢,运用免疫组化方法检测肌成纤维细胞的特征性标记(α-SMA)和波形蛋白(vim entin)分别在这两组中各级卵泡卵泡膜细胞上的表达情况,并进行图像分析。结果:1.α-SMA和vim entin表达于卵巢的各级卵泡的卵泡膜细胞(窦前卵泡、小窦状卵泡、大窦状卵泡),在动情期组,两者在大窦状卵泡的卵泡膜细胞表达最强,数量也最多,组内各级卵泡间它们表达的比较均有显著性差异(P<0.05),并且α-SMA和vim entin表达强度均与卵泡直径大小成正相关性(r分别为0.631和0.536);在非动情期组,α-SMA表达在小窦状卵泡的卵泡膜细胞表达最强,大窦状卵泡最弱,各级卵泡间α-SMA表达比较差异有显著性(P<0.05),除了窦前卵泡和小窦状卵泡vim entin表达比较差异无显著性(P>0.05)外,vim entin在其他卵泡间的表达比较差异也有显著性(P<0.05),但是α-SMA和vim entin的表达强度与卵泡直径大小无明显相关性(r分别为-0.087和0.224);α-SMA和vim entin的表达在上述两组各类型卵泡间比较也均有显著性差异(P<0.05)。结论:肌成纤维细胞存在于卵泡膜中,并可能在排卵过程中起重要作用。     

多溴联苯醚对HL-7702细胞和小鼠皮肤成纤维细胞间隙连接通讯的影响

利用划痕染料示踪标记(SLDT)方法,检测了多溴联苯醚(PBDEs)对人肝正常细胞(HL-7702)与小鼠皮肤成纤维细胞间隙连接通讯(GJIC)的影响.结果表明,PBDE-47与PBDE-209均显著抑制HL-7702细胞的GJIC(10～50μmol.L-1),随着剂量的升高,抑制作用随之增强.在小鼠皮肤成纤维细胞中,PBDE-47在3.75～50μmol.L-1范围内对GJIC有显著的抑制作用,而PBDE-209在15～50μmol.L-1范围内对GJIC有显著的抑制作用,在两种细胞中,PBDE-47的抑制作用大于PBDE-209.停止染毒后,细胞GJIC有一定程度的恢复.实验表明PBDEs可抑制细胞间隙连接通讯,为进一步研究PBDEs的毒性机制提供了科学依据.     

不同血清对山羊成纤维细胞传代的影响

考察不同血清对山羊成纤维细胞传代培养的影响．第6～8代细胞分别在添加10％Hyclone和10％四季青胎牛血清的DMEM中传代培养，实验发现，前者平均增殖倍数和群体倍增次数均高于后者．随着传代次数的增多，细胞在四季青血清培养液中的生长行为发生明显变化，细胞不能倍增且生长曲线呈不规则波动状．结果表明，细胞传代过程中使用不同血清会改变细胞生物学特性，降低细胞活力．用这种方式传代的细胞不宜用作核移植供体细胞及其他实验研究．     

人牙龈成纤维细胞的体外培养及生长曲线测定

目的:体外培养正常人牙龈成纤维细胞并测定其生长曲线,初步了解该细胞生物学特性.方法:用改良组织块法培养人牙龈成纤维细胞,通过MTT比色法研究细胞的生长曲线.结果:改良组织块法原代培养细胞成活率达80%,培养细胞呈梭形,从第3天呈对数生长,第4-5天进入平台期.结论:改良组织块法能简便快速地获得人牙龈成纤维细胞,初步了解其生物学特性.     

缺氧和高糖对大鼠肾成纤维细胞VEGF和PEDF表达的影响

探讨了缺氧对不同浓度葡萄糖培养的肾成纤维细胞(NRK细胞)血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)与色素上皮衍生因子(pigment epithelium derived factor,PEDF)表达和变化情况.将NRK细胞分为:正常组(5.6mmol/L葡萄糖)、高糖A组(15mmol/L葡萄糖)、高糖B组(30mmol/L葡萄糖)、缺氧对照组(100μmmol/LCOCl2)、缺氧A组(100μmmol/LCOCl2+15mmol/L葡萄糖)、缺氧B组(100μmmol/LCOCl2+ 30mmol/L葡萄糖).采用半定量RT-PCR方法及ELISA法测定24h、48h后NRK细胞VEGF与PEDF mRNA及蛋白的表达及其变化情况.与正常对照组相比,不同浓度葡萄糖培养的NRK细胞在缺氧条件下VEGF蛋白含量明显升高(P＜0.01,P＜0.05),VEGF mRNA表达升高(P＜0.01,P＜0.05),并呈剂量依赖性;随着缺氧时间的延长,各组NRK细胞的VEGF蛋白含量呈上升趋势(P＜0.01),VEGF mRNA表达亦升高(P＜0.05).与正常对照组相比,各组NRK细胞的PEDF蛋白含量明显下降(P＜0.01),PEDF mRNA表达下降(P＜0.01,P＜0.05),并呈剂量依赖性;随着缺氧时间的延长,各组NRK细胞的PEDF蛋白含量呈下降趋势(P＜0.01),PEDF mRNA表达亦下降(P＜0.01).缺氧加重高糖培养的大鼠肾成纤维细胞VEGF与PEDF的表达失衡,从而探讨了缺氧在糖尿病肾病(DN)的发病中起到的作用.     

重组人酸性成纤维细胞生长因子的分离纯化

采用肝素-sepharose亲和层析和SephadexG-100凝胶过滤层析法,从含haFGF基因重组体的大肠杆菌菌体中分离纯化得到人酸性成纤维细胞生长因子（rhaFGF)。SDS-PAGE,IEF电泳检测均为单一谱带。HPLC层析显示单一蛋白峰,SDS-PAGE测定rhaFGF分子质量为16.67ku,IEF测定等电点pI为4.8,并用Edman降解法测定了N-末端氨基酸序列,Balb/c3T3细胞培养法测定纯化的rhaFGF生物活性ED50为6μg/L,表明其对细胞分裂有明显促进作用。     

人皮肤成纤维细胞经X射线照射后的存活与分化

研究了单次和两次X射线辐照对人皮肤成纤维细胞GM5758的存活和分化影响。结果表明：两次照射的细胞存活率比单次照射的细胞存活率有明显的提高;单次照射引起的细胞分化百分比比两次照射的细胞分化百分比要高。提示分次照射有利于放射治疗中正常皮肤组织的保护。     

鼠高,低转移性纤维肉瘤中波形纤维蛋白的分析

为探讨肿瘤细胞生物特性与细胞骨架蛋白表达的关系，选用了鼠的高、低转移性纤维肉瘤细胞，采用ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳地，对这两株细胞的中等纤维蛋白－波形纤维蛋白进行了分析。结果显示：波形纤维蛋白在高、低转移性纤维肉瘤细胞中，其含量有所不同，并有波形纤维蛋白亚基的变化。     

胎儿子宫肌层细胞中间丝及收缩蛋白发育

利用免疫组化方法，对１２例胎龄１４～３３周人胎儿子宫肌层细胞波形蛋白、结蛋白及平滑肌肌动蛋白进行研究，结果发现：胎儿子宫肌层平滑肌细胞在发育进程中，首先表达波形蛋白及肌动蛋白，然后表达结蛋白．子宫肌层平滑肌细胞与子宫血管平滑肌细胞存在异质性；胎儿子宫肌层平滑肌细胞同时表达波形蛋白和结蛋白两种中间丝蛋白，是细胞在分过程的特征性表现．成人子宫肌层同时表达波形蛋白及结蛋白，提示成人子宫肌层平滑肌细胞有较强的增殖能力．     

螅状独缩虫(Carchesium polypinum)类中间纤维的初步研究

利用间接免疫荧光和免疫印迹发现螅状独缩虫中存在两种分子质量为58ku和66ku的蛋白。这两种蛋白能分别与抗波形蛋白和抗核纤层蛋白B的抗体反应。分子质量66ku的蛋白位于大核边缘。另外,细胞经分级抽提后大核周围存在核纤层样结构。基于上述结果,可以认为螅状独缩虫中存在类中间纤维。     

银杏叶提取物对大鼠真皮FB增殖及胶原蛋白分泌的影响

原代培养大鼠真皮成纤维细胞（Fibroblast,FB）传代培养后,以不同浓度的银杏叶提取物（EGb761,20、50、100mg／L）对其生长进行干预,四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测药物干预后24、48、72h时FB细胞活力变化,碱水解法测定药物干预后3、6d时培养液中羟脯氨酸含量变化,以分别反映EGb761对大鼠真皮FB增殖及胶原蛋白分泌的影响。研究表明EGB761在一定范围内能促进大鼠真皮FB增殖及及胶原蛋白分泌,且呈一定的剂量、时间相关性。     

石蒜碱对人胃癌细胞体外增殖的影响

以体外培养的h GCCs MGC-803细胞系为研究对象,采用不同浓度石蒜碱(5、2.5、1.25μmol/L)进行处理,倒置显微镜下观察其生长状态,同时采用血球计数板统计其体外增殖率,采用流式细胞技术检测处于不同细胞周期的细胞比例.结果表明,石蒜碱处理对h GCCs的体外增殖具有一定的抑制作用,其中5μmol/L石蒜碱对h GCCs的抑制作用最为明显.显微观察和计数分析结果表明,5μmol/L石蒜碱处理的h GCCs活力最低,细胞凋亡现象最明显.细胞周期检测的结果显示石蒜碱处理会使h GCCs增殖趋缓,细胞周期延长.     

人参皂甙Rb1对体外培养的小鼠支持细胞增殖作用的研究

观察人参皂甙Rb1(ginsenoside Rb1,GRb1)对体外培养的小鼠支持细胞增殖能力的影响,探讨其促进精子发生的作用机制.采用多次贴壁法纯化原代培养的支持细胞,取体外培养第2代第3天的支持细胞,利用MTT比色分析法和Brdu增殖细胞标记法,检测不同质量浓度GRb1对体外培养支持细胞增殖的影响.20 mg/LGRb1对支持细胞增殖有明显促进作用.GRb1能维持小鼠支持细胞的存活,并在适当质量浓度范围内可以明显促进支持细胞的增殖,从而为进一步探讨GRb1的药理作用及精子发生的机理提供一些研究基础.     

荔枝（Litchi chinensis）细胞培养的初步研究

用荔枝无菌苗作为外植体，在添加了ＡｇＮＯ３呈蜂王浆的含１ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ和１ｍｇ２，４－Ｄ的ＭＳ培养基中诱导出愈伤组织，在同样培养基中继代培养，得到了的２细胞系，这种细胞在含１ｍｇ／Ｌ－６－ＢＡ＋２ｍｇ／Ｌ，２，４－Ｄ的ＭＳ培养基中悬浮培养，培养周期２５ｄ，结果表明，维生素Ｃ和ＮａＣｌ在悬浮２中有良好的防褐作用。     

大脑皮质微血管内皮细胞培养及其缺氧性损害模型

建立改良的体外培养大鼠脑皮质微血管内皮细胞缺氧模型．取1～5d Wistar乳鼠脑皮质获得的脑微血管内皮细胞（BMEC）进行体外培养，缺氧组置入一个经改造的保鲜盒内，密闭并通入混合气体（95％N2和5％CO2）12h，检测缺氧细胞的形态结构、细胞死亡率及培养液中乳酸脱氢酶漏出量．结果显示缺氧BMEC形态结构损伤，细胞死亡率增加，细胞乳酸脱氢酶漏出量显著增加（p〈0．01）．该模型可使脑血管内皮细胞受到损伤，证实该模型具有一定的可靠性、操作简便，可重复性强，为体外研究脑血管疾病提供帮助．     

胚胎大鼠肺成纤维细胞的体外培养

目的:探讨胚胎大鼠肺成纤维细胞的体外培养条件.方法:采用胶原酶消化19d胎鼠肺组织块,经差速离心和反复贴壁法,分离、纯化肺成纤维细胞后采用加胎牛血清的DMEM培养液,进行细胞培养.用波形蛋白免疫细胞化学染色对所分离的细胞进行鉴定.结果:细胞培养24h后有一定量细胞贴壁,48h后贴壁细胞开始生长.结论:该实验方法可以成功地培养大鼠胚胎肺成纤维细胞.