绿色木霉pH响应因子编码基因TvPacC的功能分析及应用

真菌所处环境的pH值一直处于不断变化之中,这对真菌的生长发育具有重要的影响。真菌为了适应不断变化的环境,进化出了pH响应信号途径,即Pal途径,而PacC是该途径中的关键调节因子。本文针对绿色木霉TvPacC基因的功能进行了分析研究。通过融合PCR结合原生质体转化技术构建了绿色木霉Tv-1511-△TvPacC缺失突变菌株,研究了TvPacC基因在木霉适应碱性环境和木霉菌株产碱性蛋白酶中的功能和应用。结果表明,相比较于野生型,Tv-1511-△TvPacC菌株具有更好的碱性环境的适应能力,而且敲除了TvPacC基因显著增强了木霉菌株产碱性蛋白酶的能力,提高了发酵液中碱性蛋白酶的产量和活性。因此,TvPacC在提高绿色木霉碱性环境的适应能力和木霉菌株产碱性蛋白酶能力等方面起着重要作用。     

pgpA和tdcG基因的敲除对大肠杆菌磷脂酰丝氨酸合成的影响

磷脂酰丝氨酸具有改善大脑的认知和记忆的功能,是医药和食品行业重要的原料.为进一步提高大肠杆菌(Escherichia coli)中磷脂酰丝氨酸含量,利用Red重组系统,以可积累磷脂酰丝氨酸的E.coli K12(△sda A△sda B△pgp B)为出发菌株,敲除pgp A和tdc G基因,切断与磷脂酰丝氨酸合成相关的L-丝氨酸和磷脂酰甘油磷酸的分解代谢途径.摇瓶发酵后的检测结果表明,重组菌株E.coli K12(△sda A△sda B△pgp A△pgp B△tdc G)中磷脂酰丝氨酸占菌体总磷脂的比例为2.5%,较出发菌株(1%)提高了1.5倍.     

链霉菌木糖异构酶缺陷型菌株的分离

用变青链霉菌66 TK64作为出发菌,经NTG诱变,以木糖为碳源的基本培养基平板筛选得到四株木糖缺陷型菌,分别命名为C106,C215,C232和C301。依据它们木糖异构酶活性及木酮糖利用能力,可把突变菌株分为三类:一类为C215,其木糖异构酶活性是野生型的30—40%,木酮糖激酶活性正常;二类为C301,其木糖异构酶活性是野生型的15～20%,但无木酮糖激酶活性;三类是C232,它的木糖异构酶活性正常,而木酮糖激酶活性受到影响;C106菌株结果不稳定。利用链霉菌质粒pIJ702转化C215菌株原生质体,转化率为10~5—10~6/μgDNA。结果表明,可利用C215菌株作为克隆以及研究克隆的木糖异构酶基因的受体菌。     

趋化性参与内生细菌336x在小麦根系的内生定殖

变形斑沙雷氏菌336x是一株从健康小麦根系分离获得的对于小麦全蚀病具有有效生防作用的内生细菌.本研究扩增出336x基因组cheW基因的上游和下游片段,连接后构建cheW基因敲除载体,通过接合作用将敲除载体导入336x菌株,获得336x菌株的cheW基因敲除菌株(ΔcheW).比较测定基因敲除菌株ΔcheW及其野生型对于小麦根系分泌物的趋化性和在小麦根系的定殖能力,结果显示,突变体ΔcheW的趋化性丧失,在小麦根系的定殖能力下降.以上结果表明,336x的趋化性参与该细菌在小麦根系的内生定殖.     

阿维链霉菌中转录因子AveR对阿维菌素生物合成的正调节

aveR是阿维链霉菌NRRL 8165阿维菌素生物合成基因簇中唯一可能的调节基因.为了验证aveR是否参与阿维菌素生物合成基因的转录调节,构建了用于敲除aveR的基因置换质粒pJTU2530,并通过接合转移引入了阿维链霉菌.通过筛选ThioSAprR转化子,经聚合酶链式反应(PCR)扩增验证,获得了aveR内部1 320 bp区域被阿泊拉霉素抗性基因aac(3)IV替换的突变株ZD10.高压液相色谱检测表明,与野生型菌株相比,突变株ZD10不再产生阿维菌素,并且ZD10中寡霉素的产量明显高于野生型菌株.进一步的反转录PCR(RT-PCR)分析表明,与野生型菌株相比,突变株ZD10的聚酮合酶基因aveA3不再转录.结果显示,AveR是阿维菌素生物合成的正调节因子,通过调节结构基因的转录表达来影响阿维菌素的产生.     

卡那霉素B工程菌的构建及其发酵特性研究

研究高产卡那霉素B产业化工程菌的构建.以主产氨甲酰卡那霉素B工程菌——黑暗链霉菌S.tenebrarius312为出发菌株,进一步敲除氨甲酰磷酸转移酶基因tobZ,获得直接产卡那霉素B的工程菌ST314.对工程菌ST314的生物合成潜力进行研究,在200L发酵罐上进行放大实验,测定各参数,并绘制发酵代谢曲线.结果表明,该菌株遗传特性稳定,产抗能力得到有效恢复,提高幅度接近2倍;该工程菌产卡那霉素B的能力达到4500 U/mL.黑暗链霉菌ST314的研究可以向产业化生产转移.     

铜绿假单孢菌yfa操纵子中α2-M基因与抵抗力的关系

目的研究铜绿假单孢菌yfa-α2M基因与其抵抗力的关系。方法通过基因敲除的方法,得到铜绿假单孢菌的突变株PAO1Δyfa-α2M。在不同的底物存在的条件下,比较突变株和野生型菌株的生长曲线。结果突变株PAO1Δyfa-α2M对Polymixin的抗性明显降低。结论基因yfa-α2M可能与铜绿假单胞菌的抗性有关。     

同源重组法敲除酵母snoRNA基因的初步探讨

以3个粟酒裂殖酵母核仁小RNA为对象,通过同源重组法构建相应的基因缺失株,并对影响同源重组效率的因素进行分析.结果显示:载体骨架的切除可以显著提高同源重组效率;增加两侧同源片段的长度也能提高同源重组效率;另外,利用粟酒裂殖酵母野生型单倍体菌株进行snoRNA 基因敲除是可行的.     

利用基因工程提高酿酒酵母半乳糖代谢

为了提高酿酒酵母半乳糖利用速率,减弱葡萄糖阻遏半乳糖代谢,研究了负代谢调控基因GAL80,GAL6以及MIG1基因对半乳糖代谢的影响。通过重复利用loxp-Kan MX-loxp抗性基因对GAL80,GAL6以及MIG1基因进行单敲除、双敲除及三敲除,共构建了7株工程菌株。结果表明,7株工程菌株的半乳糖利用速率、乙醇产率均加快。其中,GAL80和MIG1双敲除菌株FY-501α的半乳糖代谢速率为0.916 g·(L·h)~(-1),较亲本提高44.71%,乙醇产率为0.329 g·(L·h)~(-1),较亲本提高46.22%,而在FY-501α基础上继续敲除GAL6得到GY-501α,其半乳糖代谢速率以及乙醇产率均未见提高。7株菌的葡萄糖阻遏效应也得到减弱,其中FY-501α的葡萄糖阻遏效应较亲本减弱42.11%,其次为EY-502α,FY-502α和FY-503α,减弱31.57%。阻断半乳糖代谢途径的负调控基因可以加速半乳糖代谢、减弱葡萄糖阻遏效应。     

新型马尔尼菲青霉菌Rho GTPase激活因子的RNAi研究

为探讨马尔尼菲青霉菌RhoGTPaSe激活因子基因的功能,构建了以xylP为启动子,靶基因正反双向序列被550bp gus序列隔开的干扰该基因表达的载体pCB309A-XRGT．利用根癌农杆菌的介导转化马尔尼菲青霉菌,并以博莱霉素抗性筛选;实时定量PCR（Real-time quantitative PCR）检测发现该载体的干扰效率达83％,Rho GTPase激活因子基因的表达受干扰后,马尔尼菲青霉菌的菌丝生长受到抑制,菌落也较野生型及对照菌株显著变小．     

布鲁氏菌043强毒株BR0524基因缺失突变株的构建与毒力的初步评价

为研究BR0524基因对羊种布鲁氏菌043毒力的影响,本研究利用同源重组的原理,以BR0524基因外侧的同源臂序列构建重组质粒,将其电转化至布鲁氏菌043感受态细胞,通过卡那抗性筛选和检测引物鉴定之后进而获得羊种布鲁氏菌043-ΔBR0524缺失突变株,且该缺失突变株在15代内未发生回复性突变,遗传性稳定。将羊种布鲁氏菌043-ΔBR0524缺失突变株、羊种布鲁氏菌043和M5以106 CFU剂量腹腔接种小鼠,进行体内感染试验,并以布鲁氏菌与小鼠巨噬细胞为100∶1的感染比例侵染小鼠巨噬细胞RAW264.7。结果表明:与羊种布鲁氏菌043相比,羊种布鲁氏菌043-ΔBR0524缺失突变株的载菌量几乎没有下降(P0.05),对小鼠脾脏重量变化的影响也趋于相似(P0.05);侵染小鼠巨噬细胞试验结果与动物感染试验结果也趋于一致(P0.05),这表明BR0524基因的缺失不会对羊种布鲁氏菌043毒力功能的发挥产生显著的影响。     

弱C#-正规子群与有限群的P-幂零性

利用弱c#-正规子群研究有限群的p-幂零性,得到以下结论：①设G是群,H△G,使得G／H为P-幂零,PESylp（G）,若P的极大子群皆在G中弱c#-正规且NG（P）为P-幂零,则G为P-幂零．②G是群,HqG使得G／H为P-幂零,P∈Sy／p（H）,若P的2-极大子群皆在G中弱c#-正规且NG（P）为p-N;零的,则G为P-幂零．     

由谱半径给树排序

设△（T）和λ1（T）分别表示树T的最大度和谱半径,Tn表示有n个点的树且Tn^（△）=（T∈Tn｜△（T）=△},文章根据树的谱半径给Tn^n-6（n≥18）中的树进行了排序并将结果扩大到第78棵树。     

关于λ-修改的Wiener指数

令（n，△）是具有n个顶点，最大度为△的树的全体．1．△（n）是具有n个顶点且每个顶点的度是1或△的树的全体．对于任意λ≠0，本文分别在（n，△）和。1.△（n）中确定了具有最大的五一修改的Wjener指数的极值图．     

局部重尾分布族的推广及等价性质

借助类比的思想,将重尾分布族L(γ)族、S(γ)族、S*(γ)族和局部重尾族LΔ族、SΔ族、S*Δ族推广得到一个新的分布族LΔ(γ)族、SΔ(γ),γ≥0族、S*Δ(γ),γ≥0族,并获得了当γ0时,SΔ(γ)族和S*Δ(γ)族的一个等价性质。     

二阶离p-Laplacian方程Dirichlet边值问题多重正解的存在性

本文主要讨论了一个满足Dirichlet边界条件的二阶p-Laplacian差分方程正解的存在性．通过利用Leggett—Williams不动点定理的一个推广证明了差分方程△（Фp（△u（t-1）））＋1（t）f（t,u（t））=0,t∈N[1,T]={1,2,…,T}在Dirichlet边界条件u（0）=u（T＋1）=0下,当f（t,u）满足一定条件时,至少存在三个正解,这里,Фp（s）=｜s｜p-2·s是一个p-Laplacian算子．     

利用最小光变时标与中心黑洞质量估算耀变体的多普勒因子

耀变体的高光度和快速光变表明相对论聚束效应在其辐射中起着重要作用,因此聚束效应所对应的多普勒因子是认识耀变体基本性质的重要参量。多普勒因子与喷流的洛仑兹因子及视角两个量有关,但是这两个量都难以观测。现给出一种新经验公式,通过最小光变时标与中心黑洞质量估算了一个耀变体样本的多普勒因子。     

一类时标动态方程的极限圆型判定准则及应用

在时间刻度T（inf T=0∈T,sup T=∞）上讨论了二阶动态方程[p（t）y^△]^△＋q（t）y^σ=0在特定条件（p（t）=p（t）/-α（t）,q（t）^-p（t）-p^-△（t）,α（t）为回归函数,p^-（t）≠0,p^-（t）∈Crd（T））下解的有界性以及极限圆型判定,并在此基础上得到了极限圆型判定的充要条件．     

8-羟基喹啉过渡金属配合物的标准生成焓测定

在准室温条件下,通过固相反应一步合成8-羟基喹啉（C9H7ON）过渡金属配合物：Co（oxine）2·2H2O、Ni（oxine）2·2H2O、Cu（oxnie）2,在HR-15型静态氧弹热量计上测定了配合物的燃烧热,根据热化学原理计算出配合物的标准生成焓：△fHm^-[Co（oxine）2·2H2O,（s）]=-994．36±6．65KJ／mol;△fHm^-[Ni（oxine）2·2H2O,（s）]=-1002．21±6．49KJ／mol;△fHm^-[Cu（oxnie）2,（s）]=-1703．90±3．02KJ／mol。     

时间模上二阶3－点边值问题的两个正解

运用Avery—Henderson锥上的不动点定理，讨论了时间模上的二阶非线性动力学方程3-点边值问题{y^△ （t）＋a（t）f（y（t））=O，t∈[t1,t3] T，y^△（t1）=0，y（t3）=βy（t2）至少有两个正解的存在性．其中T是一个时间模，0≤t1〈t2〈t3,0〈β〈1．