溴氰菊酯胁迫下小菜蛾泛素化蛋白的分析与鉴定

利用聚丙烯酰胺凝胶电泳、Western Blot和LC MS/MS技术,对在溴氰菊酯胁迫下的小菜蛾(Plutellaxylostella)四龄幼虫的泛素化蛋白(Ubiquitinated protein)的组分进行分析,结果表明小菜蛾溴氰菊酯敏感品系与小菜蛾溴氰菊酯抗性品系里的泛素化蛋白表达量有显著差异.本实验成功证明了在药剂胁迫下小菜蛾泛素化蛋白存在表达上的差异,该研究结果为分析昆虫细胞中泛素的功能及其对昆虫生理、生化和环境胁迫等方面的调节作用提供了参考.     

溴氰菊酯抗感品系小菜蛾成虫差异表达蛋白的鉴定

通过对小菜蛾Plutella xylostella(L.)抗溴氰菊酯品系和敏感品系成虫双向电泳图谱的比较,找到8个差异明显的点,并结合质谱分析技术和数据库信息检索最终鉴定出7个蛋白.其中包括2个代谢相关蛋白,2个调控蛋白,1个结构分子蛋白,其余2个蛋白质功能皆不明确.这些在抗性或敏感品系中差异表达蛋白质的发现,为进一步研究小菜蛾抗药性形成机制和抗性相关蛋白的寻找奠定了基础.     

小菜蛾抗性的分子机制与防治策略

小菜蛾是十字花科蔬菜上的主要害虫。由于杀虫剂的长期大量使用,它对许多种杀虫剂都产生了抗性。本文对小菜蛾的抗性机制作了阐述,并且具体解释了小菜蛾对有机磷、氨基甲酸酯、拟除虫菊酯、沙蚕毒素、苯酰基脲类昆虫生长调节剂及Bt杀虫剂的分子抗性机制。针对日益严重的抗性问题,还提出了治理小菜蛾抗性的几点方法。     

小菜蛾抗药性及治理的研究进展

小菜蛾是一种世界性分布的蔬菜重要害虫,已报道小菜蛾对50多种杀虫剂产生了抗药性,包括有机氯、有机磷、氨基甲酸酯、拟除虫菊酯类、昆虫生长调节剂及苏云金杆菌(Bt)类等杀虫剂.阐述了国内外及云南省小菜蛾抗药性的研究概况,包括小菜蛾抗性发展、抗性稳定性、抗性机理等方面的研究,并对云南省小菜蛾抗药性的治理策略进行讨论.     

小菜蛾泛素基因的克隆与分析

运用RT-PCR技术,从小菜蛾幼虫总RNA反转录产物中扩增出泛素基因的cDNA序列.利用RNA干扰(RNAi)技术将一段体外合成的与小菜蛾泛素延伸蛋白基因UBA52同源的dsRNA注入四龄幼虫体内,以抑制小菜蛾UBA52基因的表达.半定量RT-PCR结果显示,72 h后沉默组小菜蛾幼虫体内UBA52基因的mRNA表达量显著下调.本实验成功沉默小菜蛾泛素基因,此RNAi干扰体系的建立为利用此技术分析小菜蛾及其他昆虫基因的功能提供了参考.     

小菜蛾对杀虫双抗性遗传的RDA分析

采用代表性差异分析法（RDA Representational difference analysis)初步研究了小菜蛾两个品系，敏感品系和抗杀虫双近等基因系之间基因组的差异，用敏感品系作为驱动扩增子（driver)，抗杀虫双近等基因系作为检验扩增子（tester)，通过四轮消减杂交后，得到两个差异片段，范围在150bp至300bp之间，初步判断这些片段何能与小菜蛾杀虫双抗性的遗传分子基础相关。     

小菜蛾泛素基因的克隆及序列分析

设计了一对简并引物,从小菜蛾Plutella Xylostella(L.)抗溴氰菊酯品系和敏感品系的雌雄成虫基因组中分别克隆了泛素基因的编码区,GenBank登录号分别为EU28778,EU28779,EU28780,EU28781.序列分析表明,该基因的长度为228bp,编码的多肽由76个氨基酸组成.不同品系和不同性别的小菜蛾泛素基因的核苷酸序列、氨基酸序列等均存在差异,其中敏感品系雌雄成虫间差异较大,序列相似性为81.1%;抗性品系雌雄成虫间差异较小,序列相似性为97.8%.推测这些差异可能与小菜蛾抗药性的形成有关.因而为进一步研究小菜蛾抗药性形成机制和遗传机理奠定了基础.     

2-苯乙醇胁迫下酿酒酵母差异表达基因分析

2-苯乙醇(2-PE)是一种具有玫瑰花香气的高级芳香醇,广泛应用于香精香料的调配。微生物转化是生产天然2-PE最可行的方法,但其瓶颈问题是2-PE对细胞生理活性的抑制。2-PE对酿酒酵母毒性作用的分子机制还没有得到很好的研究。研究利用RNA-Seq高通量测序技术,测定分析2-PE胁迫下及其对照组的酿酒酵母转录组。结果显示,2-PE引起了酿酒酵母中1 853个基因的差异表达,其中1 122个基因表达上调,731个基因表达下调。这些基因的GO和KEGG富集分析显示,编码线粒体蛋白、细胞质蛋白和质膜蛋白的大多数基因显著上调,而与氨基酸代谢有关的酶则下调。这些结果表明,2-PE抑制了质膜蛋白的合成,抑制了生长所需的养分的运输。研究的结果可为2-PE对酵母及其他微生物抑制的机制研究提供依据。     

小菜蛾对定虫隆的抗性选育和增效剂的作用

用定虫隆对小菜蛾进行抗性选育,结果表明:F1~5仍属敏感状态,F6的敏感性已下降,F7~10达到低水平抗性,F11~13达中等水平抗性。从F14开始停止汰选,无毒饲养到F20,具有明显的抗性衰退现象。以对定虫隆具有不同抗性水平的小菜蛾种群测定3种增效剂对定虫隆的增效作用,结果表明:对F0代,TPP对定虫隆是负增效作用或几乎没有增效作用,SV 1和PBO对定虫隆均有一定的增效作用;对F13代和F20代,3种增效剂均有增效作用,但以SV 1和PBO的增效作用更明显,最高增效倍数分别为24.26和13.79;增效剂的比例不同,增效的幅度也不同,质量比为5∶1的混配增效作用比3∶1的更明显,增效倍数随小菜蛾对定虫隆抗性水平的提高而增加。     

筛选差异表达基因的方法进展

植入前胚胎差异表达基因的筛选是分离、鉴定发育相关基因的关键 ,是克隆动物发育分子机理研究的基础 .哺乳动物植入前胚胎和克隆胚胎材料的获得十分不易 ,使得筛选差异表达基因的方法在该领域的应用均受到较大的限制 .以DDRT -PCR为基础的单胚mRNA差异表达技术的建立 ,为克隆植入前胚胎发育相关基因及哺乳动物克隆胚胎发育分子机理研究提供有力的工具 ,本文将在多年研究基础上对该技术及目前筛选差异表达基因的方法进行综述 .     

银杏外种皮中银杏酚酸对小菜蛾幼虫的拒食及毒杀作用

小菜蛾(Plutella zylostella L.)是一种全球性的重要害虫,其抗药性引起国际学术界的广泛关注,而开发高效、低毒、低残留、无污染的生物农药成为了国内外农药开发的主流．报道了从废弃的银杏(Ginkgo biloba L.)外种皮中分离到的银杏酚酸对小菜蛾的拒食和毒杀作用．实验采用皂化和酯化反应及柱层析方法从银杏外种皮中分离获得银杏酚酸,并对1～3龄小菜蛾幼虫进行生物测定．生测结果表明银杏酚酸对小菜蛾有较好的拒食和毒杀作用．当处理的质量浓度为6．25mg／L时3龄幼虫的非选择性拒食率在24,48h后分别达到77．8％,94．7％以上．处理时间达到48h时,1～2龄幼虫的LC50为1.31mg／L,3龄幼虫的LC50为6．07mg／L．这表明了银杏外种皮有很好的开发前景,将为今后新型植物农药的开发和银杏废弃物的综合利用提供依据．     

颗粒体病毒对小菜蛾种群控制作用的评价

在组建小菜蛾自然种群生命表的基础上，应用种群趋势指数和干扰作用控制指数，评价小菜蛾颗粒体病毒对小菜蛾种群的控制作用．试验结果表明：施用颗粒体病毒制剂后，其种群趋势指数为5．99，干扰作用控制指数为023．即，其下代数量明显下降．可见，小菜蛾颗粒体病毒对小菜蛾种群的控制作用是明显的．     

小菜蛾抗药性研究进展

小菜蛾作为各种十字花科蔬菜的重要害虫，对多种有机氯、有机磷、氨基甲酸酯；拟除虫菊酯、苯甲酰脲类昆虫生长调节剂、农用抗生素甚至植物源杀虫剂都产生了不同程度的抗药性。本文就小菜蛾的抗药性的形成与发展、杀虫剂之间的交互抗性、抗性的生理生化机制以及分子、遗传机制等方面研究进展进行了论述。     

改进CTAB法快速大量提取小菜蛾幼虫基因组DNA

报道了一种为大量快速提取小菜蛾幼虫基因组DNA而改进的CTAB(溴代十六烷基三甲胺)法。研究结果表明,该方法比较简单、经济、有效,提取的基因组DNA完全能够满足PCR等分子生物学的研究分析。     

菜蛾种群数量变动的原因及其控制途径

影响福州地区菜蛾(Plutella xylostella)种群数量变动的主要因子是温度、食物和天敌。旬平均温度在12℃以下或28℃以上,能引起种群数量明显下降。卵至蛹的发育历期与温度间的回归关系是:(?)=3699.674 x~(-1.648)。种群密度还随十字花科蔬菜的种植面积和种植时期而变动。绒茧蜂、蜘蛛等天敌具有重要的自然控制作用。通过调整蔬菜生产布局、大力开展生物防治和合理使用化学农药,可以有效地控制菜蛾危害。     

小菜蛾在海南的生物学与防治的研究

本文对海南一些主要菜区遭受小菜蛾为害进行了田间调查,并将该虫在室内进行饲养、观察其生物学特性,探讨其发生规律以及农药防治试验研究,结果表明:该虫在海南一年可发生22代左右,具有明显的世代重叠,无越冬现象。10月至次年4月是为害盛期,是周年发生为害的重要害虫之一;成虫寿命5——23天,卵期2——18天,幼虫期5——18天,蛹期3——26天,全代历期15——75天。平均26.5天;青虫菌6号小面积防治效果平均达87.9％;40％水胺硫磷或20％杀灭菊酯与50％乐果混合液大面积防治效果较佳,分别为89.6％和89.1％。     

小菜蛾半合成人工饲料配方的优化

小菜蛾是研究害虫抗药性、生理学、病理学、毒理学等方面的重要实验昆虫。为了获得大量发育整齐的实验昆虫,应用二次正交旋转回归组合设计方法,筛选小菜蛾半合成人工饲料配方,以世代总存活率为目标函数获得的优化配方为:每100g人工饲料中,麦芽粉4.33g、蔗糖4.5g、菜叶粉5g、干酪素3g。在温度24～26℃,相对湿度60%～70%的条件下,用该优化配方饲养小菜蛾,幼虫期8.55d,蛹期4.5d,化蛹概率0.736,羽化概率0.905,存活率和发育速度与自然饲料的相似,存活比较稳定。20头蛹质量为100.30mg。成虫行为正常,雌虫平均寿命9.8d,雄虫13.7d。每雌产卵量123.50粒。该饲料配制简单,成本低廉,饲养过程中不必更换饲料,管理方便。