成熟猕猴桃果实不同组织中ACC氧化酶基因的表达差异研究

了猕猴桃“海沃特”成熟果实各组织中ACC氧化酶基因的转录水平和翻译水平对乙烯生成的影响，结果表明：（1）乙烯生成具有组织差异性；（2）ACC氧化酶基因mRNA的表达在各组中水平相似；（3）ACC氧化酶的表达水平具有显著的组织差异性及时间顺序性，因此，ACC氧化酶的瑶达水平的高低可能是导致乙烯生成的组织差异性的主要原因之一。     

鲜切南瓜组织中乙烯产生及1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)氧化酶活性的变化

本文以鲜切南瓜为实验材料,研究了切割伤害诱导、外源乙烯和降冰片二烯NBD(2,5-norbonadien)处理对乙烯的产生和ACC氧化酶活性的影响.结果表明,南瓜切割和外源乙烯处理都可诱导乙烯产生和ACC氧化酶活性急速上升,达到高峰后逐渐下降并恢复到接近原来的水平.NBD可有效抑制由伤害诱导的ACC氧化酶活性的增加,进而抑制了乙烯的产生.但当外源乙烯和NBD存在时,ACC氧化酶活性不受NBD抑制,其活性明显增加,然后逐渐下降,72h后恢复到接近原来水平,而乙烯的产生显示了与对照相似的显著增加的结果.实验结果认为切割机械伤害和乙烯处理都可通过诱导ACC氧化酶活性的提高而使乙烯的产生显著增加,NBD对ACC氧化酶的抑制作用可被乙烯所解除.     

番茄ACC合酶(LeACS2)在大肠杆菌中的可溶性表达

植物激素乙烯参与了植物生长发育等一系列生理过程,通过控制乙烯的合成进而控制经济作物的衰老和果实的成熟,给农业带来深远影响.ACC合酶是高等植物乙烯生物合成的限速酶.通过RT-PCR将番茄ACC合酶(LeACS2)cDNA克隆至大肠杆菌表达载体pET30a中并使之与GST 编码序列进行融合而构建了重组表达质粒pET-LeACS2-GST.转化获得含有该重组表达质粒的大肠杆菌BL21 starTM(DE3) pLysS细胞,在IPTG的诱导下成功表达出含有LeACS2的大小约83 000的融合蛋白.该融合蛋白具有较好的可溶性.通过GST亲和层析和MonoQ阴离子交换两步纯化后的LeACS2能够催化其底物SAM生成ACC.     

蝴蝶兰ACC氧化酶cDNA片段的克隆及其反义植物表达载体的构建

根据已报道的蝴蝶兰ACC氧化酶的基因序列,设计了一对引物,通过RT—PCR从蝴蝶兰总RNA中扩增出ACC氧化酶的cDNA片段,将其连接到pMD19-T载体上进行测序．结果显示,该片段与参考的已报道序列具有99．70％的同源性．测序后将该基因的cDNA序列反向插入pBI221的CaMV35S启动子和nos terminator之间,构建了蝴蝶兰ACC氧化酶的反义基因植物表达载体,为进一步转化蝴蝶兰研究其对蝴蝶兰花期和生长的影响打下了基础．     

环境胁迫和乙烯对番茄ACO1基因表达的影响

克隆番茄ACC氧化酶1(LeACO1)基因特异片段,以此作为探针,与经过干旱和干旱后复水、淹水、伤害、不同温度等胁迫环境及乙烯处理的番茄总RNA进行Northern杂交,杂交结果表明,LeACO1基因的表达被干旱抑制,被复水、外源乙烯强烈诱导;淹水处理对叶片中该基因的表达无影响,而强烈诱导其在茎中的表达;37℃高温处理可以诱导LeACO1基因在番茄茎中的表达;伤害对该基因的表达没有明显影响.     

蜜瓜ACC氧化酶mRNA的成串锤头型核酶和反义RNA基因的合成和克隆

我们设计和合成了切割蜜瓜成熟果实ACC氧化酶mRNA的GUC^86、GUC^388、GUC^534的三重锤头型核酶（HhRz)和阻断转录的反义RNA（AR） 基因,并构建了二、四、八联体HhRz和AR基因。为了在体外和体内检测HhRz是否切割ACC氧化酶mRNA,在E.cloliDE3rna-菌株中克隆了同域和跨域作用的（HhRz)n-AR和靶子ACC氧化酶mRNA表达系统。又构建了植物体组成型和诱导型（HhRz)n-AR表达载体。     

氰丙氨酸合酶在乙烯诱导杨树耐盐中的作用

【目的】探讨木本植物线粒体β-氰丙氨酸合成酶在乙烯诱导的交替呼吸氧化酶(AOX)途径对盐胁迫响应中的作用。【方法】选取盐胁迫下‘南林895’杨叶片,利用HPLC测定氨基环丙烷羧酸(ACC,乙烯前体)含量,实时荧光定量PCR分析基因表达,比色法测定半胱氨酸水平。【结果】盐胁迫使杨树幼苗叶片ACC积累,乙烯合成相关酶(ACS7和ACO3)、氰丙氨酸合酶(CYS C1),以及腈水解酶(NIT4)等基因显著上调表达,同时伴随着线粒体交替呼吸氧化酶(AOX1b)基因的上调和细胞色素c氧化酶(COX6b)基因下调表达。水杨基氧肟酸(SHAM)预处理导致AOX1b基因表达被抑制,电解质渗透率(EL)和丙二醛(MDA)含量上升,但不影响CYS C1表达。而乙烯合成抑制剂氨基氧乙酸(AOA)了抑制CYS C1和盐胁迫诱导的AOX1b基因的表达,并增加EL和MDA含量。此外,AOA恢复盐胁迫减少的半胱氨酸含量,而SHAM和抗霉素A(AA)均无此效应。【结论】杨树叶片CYS C1参与了乙烯激发的耐盐响应,但乙烯诱导的交替呼吸氧化酶(AOX)并未位于CYS C1上游而发挥作用。     

离体山野菜老化过程中激素变化研究初报

山野菜在采集离体后的老化速度很快,造成的损耗严重.为解决这一问题需要探讨采集后发生的生理生化变化,文献上没有查到山野菜在这方面的直接文献.在其它植物中对机械伤害(如切割、触摸、虫咬等)和化学损害(如真菌浸染、大气污染物影响等),植物都能产生一系列的变化.如呼吸作用加速、呼吸途径变化;近年来对伤害的刺激较多研究的是信号传递,如化学信号和电信号.更多的集中在乙烯的诱导形成,并对伤害诱导的基因表达、乙烯生物合成的前体 ACC 合成酶和氧化酶得到进一步证实.还     

ACC氧化酶反义基因转化青花菜的研究

以青花菜的下胚轴和带1～2mm子叶柄的子叶为转化受体，建立了根癌农杆菌介导的转化体系，获得了含番茄果实ACC氧化酶反义基因的转基因植株。经筛选获得了5株抗性植株，其中1株来自下胚轴，另外4株来自带子叶柄的子叶。PCR及Southern blot检测证实，外源．ACC氧化酶反义基因已整合进其中2株拟转化青花菜植株的基因组。转化植株移栽到室外均能成活，成熟小花蕾的乙烯测定结果表明乙烯的合成受到了不同程度的抑制。     

花生种子活力与乙烯释放

本文研究了花生种子萌发时乙烯释放的规律以及一些化合物(BA、GA_3、IAA,ACC、B_9)对种子乙烯释放的影响.讨论了种子活力与其乙烯释放能力的关系、提高种子活力的可能途径.实验表明,种子活力与其乙烯释放能力呈正相关;GA_3和ACC,特别是ACC 能提高种子活力及其乙烯释放能力.     

Fe^2＋和CO2对番木瓜ACC氧化酶活性的影响

１－氨基环丙烷－１－羧酸（ＡＣＣ）氧化酶催化ＡＣＣ氧化成为乙烯．通过ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ和Ｐｈｅｎｙｌ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ柱层析后，ＡＣＣ氧化酶被纯化１９．５倍．在体外分析中，ＡＣＣ氧化酶活性被Ｆｅ２＋和ＣＯ２促进；Ｃｏ２＋、Ｎｉ２＋和Ｍｎ２＋抑制ＡＣＣ氧化酶的活性，但这种抑制效应能部分地被Ｆｅ２＋所拮抗．ＣＯ２对ＡＣＣ氧化酶活性的促进作用与反应体系中氧的浓度有关，在２１％的氧浓度下，ＣＯ２的促进作用较显著     

Structural analysis of the promoter of tomato 1-aminocyclopropane-1-carboxylate synthase 6 gene(Le-ACS6)

Ethylene plays an important role in the regulation of many growth and developmental processes of higher plants. In tomato,Le-ACS6,a member of the ACC synthase multigene family involved in system 1 ethylene biosynthesis during fruit ripening,is subject to negative feedback regulation by ethylene. To identify the cis-elements that are responsible for the negative feedback control,we established an in vitro transient assay system employing particle bombardment on mature-green tomato fruit pericarp to examine the expression of a luciferase(LUC) reporter gene driven by a 5′-serially deleted Le-ACS6 promoter. The results localized putative cis-elements required for negative ethylene-response between -347 and -266 upstream from the translational start site ATG. Several lines of stable transformation of the Le-ACS6 promoter and GUS reporter fusion gene containing internal deletion from -347 to -266 were generated. The expression pattern of the GUS reporter showed that removal of the nucleotides from -347 to -266 completely eliminated the response of the Le-ACS6 promoter to exogenous ethylene.     

农杆菌介导的ACC氧化酶反义基因转化甜瓜品种河套蜜瓜的研究

将从甜瓜品种河套蜜瓜中克隆的ACC氧化酶基因cDNA片段反向构建到植物表达载体pROK II中,获得重组质粒pRACO 1,用三亲融合法将其导入根癌农杆菌LBA 4404中,转化河套蜜瓜子叶外植体,在芽诱导培养基M S IAA 0.8 m g/L BA 1.0 m g/L ABA 0.26 m g/L C ef 500 m g/L K an 75 m g/L中诱导生芽,待芽长到2cm左右转入M S IBA 0.5 m g/L C ef 300 m g/L K an 50 m g/L的培养基中诱导生根,1~2周后可诱导产生大量的根,形成完整的转化小植株.经PCR检测证明,目的基因已整合到河套蜜瓜的基因组中.     

Relationship Between Stimulated Ethylene Production and Alternative Respiration Pathway in “Royal Gala” Apple Fruit

Endogenous ethylene production and alternative oxidase (AOX) protein expression in “Royal Gala”apple fruits were investigated after treatments with cold (0℃ for 1 week) and heat (38℃ for 1 h). Amonoclonal antibody to the terminal oxidase of the alternative pathway from Sauromatum guttatum was used to identify the AOX protein in apple fruits. The molecular mass of AOX in “Royal Gala” apple fruits is approximately 38 kDa, similar to those reported in tobacco and tomato. The cold treatment depressed the release of endogenous ethylene production before the climacteric ethylene production and obviously induced the expression of AOX protein expression. The heat treatment had the opposite effects on the ethylene production and AOX protein expression. In addition, the climax of endogenous ethylene production preceded the maximum AOX expression after the cold temperature treatment. It is therefore proposed that in climacteric fruits the production of induced ethylene is not coordinated with the level of AOX protein.