穿心莲内酯提取工艺研究

采用正交实验法探讨穿心连内酯的提取工艺,以提取的内酯量为参考指标,考察了料液比、乙醇浓度、提取温度和提取时间等影响因素。确定影响穿心莲内酯提取率的因素大小顺序为：乙醇浓度〉提取温度〉料液比〉提取时间,其最佳工艺条件为：60℃下,用1500mL75%的乙醇对100g穿心莲进行浸提2h,得622mg穿心莲内酯。     

微波萃取穿心莲中总黄酮的工艺研究

采用紫外分光光度法,以穿心莲中总黄酮提取量为评价指标,对穿心莲进行微波辅助处理,考察微波功率、微波作用时间、溶剂用量、穿心莲粒度、水浸泡时间等因素对穿心莲中总黄酮提取量的影响,单因素实验和正交试验表明：穿心莲中总黄酮提取的最佳工艺条件为微波功率处于中火、微波作用时间4min、溶剂用量固液比1：50、穿心莲粒度为细粉、水浸泡时间60min．     

穿心莲内酯提取工艺研究

目的：筛选穿心莲最佳醇提取工艺条件。方法：以穿心莲内酯为检测指标,考察不同工艺条件对其含量的影响。结果：确定其醇提最佳工艺。结论：对穿心莲药材以80％乙醇6倍量回流提取（温度80℃）2次,每次2小时,所得穿心莲内酯含量最高。     

反相色谱法快速测定3种穿心莲内酯含量

利用高效液相色谱法测定穿心莲叶及浸膏中穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯及去氧穿心莲内酯含量 ,采用 WatersSymm etryshield C18色谱柱及甲醇提取方法。结果表明 ,穿心莲内酯在 0 .14～ 1.31μg范围内呈线性 ,脱水穿心莲内酯与去氧穿心莲内酯分别在 0 .14～ 1.2 9μg、0 .14～ 1.2 2μg范围内呈线性 ,相关系数 r分别为 0 .9976、0 .9913、0 .9985 ,该法可用于快速测定 3种内酯含量 ,对于穿心莲的质量评价有一定参考作用。     

穿心莲内酯通过影响SIRT3-p53信号通路诱导鼻咽癌C666-1细胞凋亡的机制研究

在前期研究工作中发现穿心莲内酯(Andrographolide,Andro)可以抑制鼻咽癌C666-1细胞活力并诱导其凋亡,但相关的分子机制并不清楚.为了明确穿心莲内酯调控C666-1细胞活力的具体机制,本课题组在体外培养的 C666-1 细胞中给予穿心莲内酯处理,并通过 Real-time PCR 检测 Sirutins 家族成员(SIRT1-7)的mRNA表达进行初步筛选;通过siRNA干扰的方法沉默SIRT3之后进一步检测穿心莲内酯对C666-1细胞活力和凋亡的影响;采用Western Blotting的方法检测沉默SIRT3之后穿心莲内酯对C666-1细胞中SIRT3/p53表达的影响.结果表明:穿心莲内酯能够显著增加SIRT3的mRNA表达,而对其它亚型的影响较小;沉默SIRT3能够部分逆转穿心莲内酯对C666-1细胞活力和凋亡的影响;穿心莲内酯可通过影响SIRT3的蛋白表达调控其下游凋亡相关蛋白p53的水平进而诱导细胞凋亡.本实验为进一步研究穿心莲内酯抑制鼻咽癌的机制奠定了基础.     

8,17-环氧穿心莲内酯衍生物的合成与抗菌活性

为了提高穿心莲内酯的抗菌能力,将端头烯键环氧化得到12个8,17-环氧穿心莲内酯衍生物。目标化合物均通过核磁共振仪(NMR)与高分辨质谱仪(HRMS)表征。在合成实验中,考察了穿心莲内酯3个羟基与叔丁基二甲硅基(TBS)结合与脱除的能力。抗菌活性实验研究发现,化合物B5与C5对大肠杆菌、粪肠球菌以及金黄色葡萄球菌的抑制能力均优于先导化合物穿心莲内酯,具有潜在的应用价值。     

基于纳米银-二氧化钛-壳聚糖复合物修饰电极的穿心莲内酯电化学传感器及其应用研究

利用纳米银-二氧化钛-壳聚糖（Ag-TiO₂-CS）复合物构建灵敏的穿心莲内酯电化学传感器。CV实验表明纳米Ag-TiO₂-CS复合物具有良好的电化学活性,可以作为穿心莲内酯传感器的氧化还原探针,当加入穿心莲内酯后,修饰电极的峰电流值变小,且随着穿心莲内酯浓度的增加而逐渐减小。DPV实验表明,修饰电极峰电流值与穿心莲内酯浓度对数值在一定范围内呈线性关系,方法学考察结果均良好。将所建立的电化学方法应用于穿心莲内酯软胶囊制剂实际样品,实验结果理想。     

穿心莲生殖毒性的时效关系研究

研究穿心莲对雄性小鼠精子、酶活力及睾丸组织结构的影响,并探讨时效关系.实验分为对照组、穿心莲提取物组和穿心莲内酯组,分别给予蒸馏水、4.67 g/kg穿心莲提取物溶液和315 mg/kg穿心莲内酯溶液,经口灌胃,每天1次,给药持续77 d(11周).分别在给药的第21、35、49、63、77 d剖杀受试小鼠,称量体重和...     

穿心莲临床应用

穿心莲作为传统中药具有解毒抗菌作用，以不同制剂形式应用于临床治疗感冒、扁桃体炎．支气管炎．急性菌痢．胃肠炎等多种感染性疾病。穿心莲内酯是其主要成分之一，具有清热解毒，凉血消肿等功能。现代药理学研究表明，穿心莲内酯及其衍生物（如脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯单钾盐，穿琥宁注射液、莲必治注射液、病毒净滴眼液、复方穿琥宁涂膜剂等）具有消炎抗菌．抗病毒感染．抗肿瘤，抗心血管疾病，免疫刺激、保肝利胆及抗生育等作用。     

穿心莲内酯对S180小鼠体内抗肿瘤作用的研究

观察穿心莲内酯对小鼠移植性肿瘤S180生长的抑制作用,并探讨其可能的机制.采用MTT法检测穿心莲内酯对体外培养的S180细胞增殖的抑制作用;建立小鼠移植瘤模型,采用荷瘤小鼠抑瘤率检测穿心莲内酯对小鼠肉瘤S180的体内抗肿瘤作用.以对荷瘤小鼠免疫器官质量,巨噬细胞对中性红的吞噬率,巨噬细胞产生TNF-α的影响评价穿心莲内酯对小鼠免疫功能的作用.结果穿心莲内酯能够剂量依赖型的抑制体外培养的S180细胞的增殖;25、50 mg/kg的穿心莲内酯对移植性动物肿瘤S180的抑瘤率分别为45.27%和56.87%,对荷瘤小鼠脾脏和胸腺质量无明显的影响.经穿心莲内酯刺激后,小鼠巨噬细胞对中性红的吞噬功能明显地增强,并能显著刺激巨噬细胞分泌TNF-α.说明穿心莲内酯具有明显的体内抗肿瘤作用,其抗肿瘤活性是通过抑制肿瘤细胞的生长,激活小鼠巨噬细胞两方面共同产生的.     

超临界CO2萃取穿心莲内酯结晶的特性

以穿心莲内酯中间体为试验原料,考察了超临界CO2萃取穿心莲内酯过程中结晶的特性,并采用高效液相色谱法对结晶产物的纯度测试,同时采用X射线衍射法考察了晶体的晶型变化规律.结果表明：超临界CO2萃取穿心莲内酯同时在结晶板上形成梯度结晶分布;压力越高,晶体的结晶度越高,且晶体定向生长的趋势越强;随着温度的升高,晶体趋向更多晶面生长;浓度越高,衍射峰越杂乱.     

穿心莲内酯对小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖及细胞周期的影响

目的:研究穿心莲内酯对小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖及细胞周期的影响,并对其免疫调节作用进行初步探讨.方法:分离小鼠淋巴结细胞,以双色荧光抗体染色技术结合流式细胞术检测在刀豆蛋白A(Con A)的刺激下,穿心莲内酯对T淋巴细胞早期活化抗原CD69表达的影响;用羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)染色分析穿心莲内酯对T淋巴细胞增殖的影响;用碘化丙锭染色分析细胞周期的分布.结果:终浓度为10、20、30、40 μmol/L的穿心莲内酯对Con A刺激的早期活化抗原CD69的表达具有明显的抑制作用(P<0.01);对Con A刺激的T淋巴细胞增殖具有明显的抑制作用(P<0.01);并明显阻止T淋巴细胞进入S期,且呈剂量依赖性.结论:穿心莲内酯对小鼠T淋巴细胞的体外活化及增殖均具有明显的抑制作用,并抑制T淋巴细胞进入分裂周期.     

穿心莲内酯衍生物构效关系的理论研究

选取已测活性的17个穿心莲内酯衍生物,利用高斯软件计算得到其结构参数,通过主成分分析筛选出主要影响参数,进一步利用BP神经网络对建立的活性评价模型进行验证.建立了穿心莲内酯衍生物的构效关系,为进一步开发具有更高活性的穿心莲内酯类药物提供理论依据.     

脱水穿心莲内酯/β-环糊精包合物的包合机制研究

通过对包合比例、主客体分子间相互作用力、包合部位和包合物稳定性的研究来阐明脱水穿心莲内酯和β-环糊精形成包合物的机制.应用差示热分析法确证包合物的形成,紫外分光光度法测定稳定常数并计算其热力学常数,1H-NMR、IR法确证包合部位.结果显示:脱水穿心莲内酯与β-环糊精形成了1∶1的包合物,包合部位为脱水穿心莲内酯的五元内酯环部分及十氢萘环部分,在形成包合物过程中范德华力起主要推动作用,疏水力起辅助作用,形成的包合物比较稳定.     

15-芳亚甲基脱水穿心莲内酯的合成与抗菌活性

以脱水穿心莲内酯为原料与2个取代苯甲醛缩合得到2个15-芳亚甲基取代的脱水穿心莲内酯,进一步对其C-3,19位羟基衍生化,共得到14个衍生物,所有合成化合物均通过核磁共振仪(NMR)和高分辨质谱仪(HRMS)表征。在合成实验中,初步考察了C-3,19位乙酰化、C-3位羟基氧化和C-19位脱保护的方法。抗菌活性筛选实验研究发现,化合物G2对粪肠球菌的抑制能力优于脱水穿心莲内酯,有一定的研究价值。     

穿心莲注射液提取工艺研究

就穿心莲注射液生产中普遍存在的浸出物收率不稳定问题，运用正交实验就提取诸因素对浸出物收率的影响进行了研究，并对同等条件下穿心莲总内酯的变化作了分析比较。实验结果表明，提高浸提温度可明显提高浸出物收率，总内酯的得率及组成均无显著变化     

应用高速逆流色谱对穿心莲活性成分进行分离

为了高效分离得到高纯度的穿心莲活性成分,应用高速逆流色谱(HSCCC),在流速为2.0mL/min的正己烷、乙酸乙酯、乙醇和水(体积比为1:4:2.3:2.7)的两相溶剂系统中,从穿心莲的粗提物中同时分离纯化出4种生物活性化合物.利用理化常数、质谱(MS)、核磁共振(<'1>HNMR、<'13>CNMR)等波谱检测技术对其化学结构进行鉴定,发现此4种化合物分别为14-脱氧穿心莲内酯-19-β-D-葡萄糖苷(Ⅰ)、新穿心莲内酯(Ⅱ)、穿心莲内酯(Ⅲ)和14-脱氧穿心莲内酯(Ⅳ).从500 mg粗提物中分离得到4种化合物的量分别是56.8、1.5、108.3和218.0mg;纯度分别达98.5%、92.5%、96.2%和93.6%;回收率分别为 95.5%、97.8%、93.2%和91.9%.说明高速逆流色谱是有效的,可分离得到高纯度产物.     

MTT法和CCK-8法检测中药抗病毒活性成分细胞毒性的比较

中药抗病毒活性成分的筛选首先需要考察化合物在体外的细胞毒性.分别用MTT法和CCK-8法考察穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯这两种存在于中药穿心莲中具有抗病毒潜力的成分在人肺腺癌A549细胞株的毒性情况.结果表明,CCK-8和MTT两种方法检测得到的细胞存活率的数据具有一致性,均提示在A549细胞株中,穿心莲内酯和脱水穿心内酯的无毒浓度分别在0 5μg/mL及0 10μg/mL之间.用MTT法测定穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的CC50值的变异系数(CV)均大于CCK-8法得到CV,表明CCK-8法检测的精密度较MTT法更高.回归方程的拟合优度的判定系数和细胞存活率的数据标准偏差数值表明CCK-8法测定的准确度相对MTT法更高.另外,CCK-8法操作更为简便和快速,对实验者和环境危害低.因而,CCK-8法值得在细胞增殖和药物毒性检测等实验中推广应用.     

高速逆流色谱对四种穿心莲生物活性

穿心莲是一种在中国、印度和东南亚等地被广为应用的药用植物。它含有抗炎、抗病毒、抗疟、抗糖尿病、抗癌和抗氧化等多种生理活性物质。应用高速逆流色谱(HSCCC)法,在流速为2.0 ml/min的正己烷、乙酸乙酯、乙醇和水(1:4:2.3:2.7, v/v/v/v) 的两相溶剂系统中,可从穿心莲的粗提物中同时分离纯化出4种生物活性化合物。利用理化常数、MS、1HNMR、13CNMR等波谱检测技术对其化学结构进行鉴定,表明此4种化合物分别为穿心莲内酯（Ⅰ）、14-脱氧穿心莲内酯-19-β-D-葡萄糖苷（Ⅱ）、14-脱氧穿心莲内酯（Ⅲ）、新穿心莲内酯（Ⅳ）。从500mg粗提物中分离得到4种化合物的量分别是108.3 mg、56.8 mg、218.0 mg和1.5mg, 纯度分别达96.2%、98.5%、93.6%和 92.5%,回收率各为93.2%、95.5%、91.9%和97.8%。     

穿心莲片中脱水穿心莲内酯在大鼠血浆中RP-HPLC的测定

建立了一种简单、快速的测定穿心莲片中脱水穿心莲内酯在大鼠血浆中浓度的反相高效液相色谱法.使用C18反相柱(ID,4.0mm×250mm,粒径5μm),流动相为甲醇-水(55:45),流速为0.7mL/min,检测波长为252 nm.在此条件下,20min内脱水穿心莲内酯得到检测,分离良好,不受杂质干扰.在0.204.～10.175μg·mL-1时线性关系良好,r=0.9993.低、中、高浓度下的回收率、重现性均符合方法学要求.该方法能有效地监测大鼠血浆中脱水穿心莲内酯的浓度变化.