短乳杆菌产NADH氧化酶的发酵及纯化

有氧环境下,利用优化后的发酵培养基,研究短乳杆菌(Lactobacillus brevis)产NADH氧化酶(NOX)的发酵条件.采用8层纱布,在温度为30℃,pH=7.0,转速为150 r.min-1的条件下发酵培养23 h,用pH值为5.8的0.1 mol.L-1磷酸钾缓冲液对细胞进行洗涤悬浮,超声波破碎(功率为400 W,超声2 s,间歇2 s,破碎12 min)后,测得其比活力可达2.317 mkat.g-1.通过DEAE Sepharose Fast Flow,Macro-Prep High Q和Hydroxyapatite-Ⅰ三步纯化后,其纯化倍数为3.11,回收率为8.50%.     

基于NAD+/NADH比率荧光探针的乳酸检测法

结合氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸/还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD~+/NADH)比率荧光探针SoNar与酶法分析技术,建立了一种灵敏的乳酸检测方法,并进一步对影响检测性能的几个因素,如pH、温度、底物浓度、SoNar浓度等进行了优化。结果显示,该方法的检测限(LOD)为2.60μmol/L,定量限(LOQ)为8.67μmol/L,不同时间重复测定的标准偏差(RSD)为2.37%,乳酸质量浓度0～1 000μmol/L范围内的Z因子值为0.82,表明该方法具备很好的稳定性和重复性。与目前常用的基于MTT-PMS的酶偶联分析法相比,本文所建立的乳酸检测法灵敏度更高,特异性更好,且生物兼容性更强。     

黄嘌呤氧化酶的研究进展及其发展前景

本文综述了黄嘌呤氧化酶(XOD)的研究进展及其发展前景。首先总结了XOD的基因、蛋白结构、催化机制和生物合成机制,其次介绍了与XOD催化相关的嘌呤代谢途径及其生理病理作用和相关的疾病,再次综述了目前已有商品化XOD及其生产现状和存在的问题,然后概述了XOD的应用进展和发展前景,最后探讨了XOD基础和应用研究存在的问题并提出发展建议。     

羊草的细胞色素氧化酶同工酶分析

采集内蒙古自治区兴安盟地区不同地理及生态环境下的羊草种子，在相同的实验室条件下进行栽培。取幼苗期整株进行细胞色素氧化酶同工酶分析，并作了同株酶谱对照，对其结果采用极点排序法进行排序。结果表明，不同地理及生态环境下的羊草在分子水平上（细胞色素氧化酶同工酶）存在着种内分化。     

NADH诱导的牛心肌线粒体的脂质过氧化

在ＡＤＰ－Ｆｅ３＋存在下，ＮＡＤＨ可诱导牛心肌线粒体发生脂质过氧化作用．以丙二醛的生成量来衡量脂质过氧化水平，研究ＮＡＤＨ，ＡＤＰ，Ｆｅ３＋及反应时间对线粒体脂质过氧化的影响     

多酚氧化酶催化儿茶酚的动力学及机理研究

本研究采用冷丙酮二次提取法从马铃薯中提取出多酚氧化酶,用微量呼吸仪和氧电极测定酶的最适 pH 为7,最适反应温度为25℃。通过对多酚氧化酶活性中心的测定和探讨,认为活性中心起催化作用的是二价铜(Ⅱ),两个铜离子(Ⅱ)之间的距离与儿茶酚两个羟基间的距离一致。双底物动力学结果证明,反应是以氧首先进攻酶的活性中心的强制有序三元复合物的机理。本文还用最小二乘方法回归出了动力学常数,求出了反应的活化能等重要的动力学参数。     

ACC氧化酶基因研究进展

乙烯作为植物的五大类激素之一,在植物的生长发育过程中发挥着重要作用.而乙烯在植物体内的生物合成主要是由ACC合成酶和ACC氧化酶这2个限速酶来控制的,通过调节它们的表达能有效地调节乙烯的合成量.本文就ACC氧化酶基因克隆及表达调控进行了综述,并对其应用前景进行了展望.     

羊草(Leymus chinensis)的细胞色素氧化酶同工酶分析

采集内蒙古自治区兴安盟地区不同地理及生态环境下的羊草种子,在相同的实验室条件下进行栽培．取幼苗期整株进行细胞色素氧化酶同工酶分析,并作了同株酶谱对照,对其结果采用极点排序法进行排序．结果表明,不同地理及生态环境下的羊草在分子水平上（细胞色素氧化酶同工酶）存在着种内分化．     

从头算分析NAD+及NADP+的电子传递

用HF从头算计算NAD+及NADP+及其还原产物NADH及NADPH分子的绝对能量、电荷分布、前线轨道能量、偶级距、键长、电子自旋伸展空间,并讨论了空间构形与电子传递的关系,提出了NAD+及NADP+在电极和生物氧化过程中传递电子的机理.     

吲哚乙酸氧化酶和过氧化物酶关系的同工酶研究

用细胞质雄性不育系小麦和普通小麦中国麦与鄂恩１号为材料，用Ｄａｖｉｓ和Ｒｅｉｓｆｅｌｄ不连续聚丙烯酰胺垂直析以凝胶电泳技术进行吲哚乙酸氧化酶和阴、阳离子过氧化物酶同工酶分析，并用ＳＣ９１０型双波段薄层扫描仪进行扫描，记录其谱带数及强弱，结果表明阳离子过氧化物酶同工酶谱与ＩＡＡ－氧化酶同工酶谱十分相似，而阴离子过氧化物酶酶谱相差甚远，由此表明具有吲哚乙酸氧化酶活性位点的过氧化物酶，应主要是阳离子过氧     

溶氧对谷氨酸棒杆菌发酵产谷氨酸代谢的影响

分别控制0、5%、30%3种溶氧水平进行谷氨酸分批发酵,考察了3种溶氧水平下谷氨酸棒杆菌发酵的代谢响应。结果表明,随着溶氧降低,发酵液中柠檬酸和α-酮戊二酸的含量降低,三羧酸(TCA)循环还原臂途径中的有机酸含量增加,丙氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸含量也有所增加,在溶氧为0时,乳酸和乙酸大量积累。通过分析不同溶氧水平下的相关酶活和胞内氧化还原状态,发现随着溶氧降低,谷氨酸脱氢酶酶活降低,乳酸脱氢酶酶活升高,胞内氧化还原电势升高,它们的共同作用使氧限制条件下发酵的代谢流流向TCA循环的还原臂途径和乳酸合成途径,导致谷氨酸产量下降。     

葡萄糖氧化酶发酵动力学的研究

利用恒化器研究了葡萄糖氧化酶（ＧＯＤ）发酵动力学，建立了较为合理的恒化培养系统。对采集的数据用计算机进行回归，求得最大比生长速率μｍａｘ＝０．２２５ｈ－１、饱和常数Ｋｓ＝８．９１ｇ／Ｌ、基质得率系数ＹＧｍａｘ＝０．４９ｇ／ｇ以及维持系数ｍ＝０．０２ｇ／ｇ·ｈ。并研究了ｐＨ、ＤＯ、ＮＨ２－Ｎ、葡萄糖酸、细胞产率，酶比活及体积产酶速率等参数随比生长速率变化的规律。在Ｄ＝０．１３１ｈ－１下体积产酶速率（ＤＥ）达最大值，为３．４６×１６．６７μｍｏｌ／ｓ·Ｌ·ｈ，是分批发酵最大体积产酶速率（１．５３×１６．６７μｍｏｌ／ｓ·Ｌ·ｈ）的２．２６倍。     

用固定化酶管流动注射测定谷氨酸

用多孔玻璃珠固定自制的谷氨酸氧化酶（GO）制成GO固定化酶管，并结合流动注射系统测定谷氨酸（Glu)的含量，测定的线性范围在0．2－3．0mol/m3，精密度（c.v.)为0．75％，测定速率每小时60个样品，该酶管使用寿命为40d，在一定的条件下，保存稳定期达120天，当测定的Glu浓度低于3mol/m3时，pH在6．5－7．5，温度在20－30度，磷酸盐浓度在0．05－0．25mol/L范围内变化时，对Glu含量的测定几乎无影响，用醋酸纤维膜修饰的铂电极测定H2O2选择性好，该方法与试剂盒法同时测定不同发酵时间发酵液中Glu的含量，两者结果一致。     

聚乙烯醇静电纺丝法固定葡萄糖氧化酶

利用静电纺丝纳米纤维具有高比表面积和多孔疏松结构的优势固定葡萄糖氧化酶，以提高酶电极的性能．通过聚乙烯醇（PVA）和葡萄糖氧化酶（GOD）共同静电纺丝的方法在金电极表面获得了固定化酶膜，用于构筑安培型葡萄糖生物传感器，膜的红外光谱、紫外-可见光谱和扫描电镜的分析均表明酶成功固定在静电纺丝形成的纳米纤维膜中．循环伏安测试表明固定化酶在静电纺丝纳米纤维中保持了活性，采用PVA静电纺丝法固定COD比利用浇铸膜法所得到的酶修饰电极对葡萄糖有更好的电流响应特性，通过在静电纺丝溶液中加入纳米金进一步提高了酶电极的电化学响应特性．     

湿地生态系统中土壤酶的研究进展

土壤酶能够把高相对分子质量的有机化合物分解成为能够被生物利用的简单化合物,土壤酶的分解作用普遍被认为是生态系统中有机物质分解过程的限制性步骤,控制着湿地生态系统的物质循环.本文对湿地生态系统中土壤酶的时空格局、影响酶活性的环境因子、与全球变化的关系以及在湿地净化功能中的意义等几方面进行了综述,并强调应在人类活动影响下湿地土壤酶的作用方面加强研究.     

富士苹果中多酚氧化酶活性的中心必需基团与抑制动力学

以源于苹果的多酚氧化酶(PPO)为对象,选取溴乙酸、乙酰丙酮、N-溴代琥珀酰亚胺、1,4-二硫代苏糖醇和对氯汞苯甲酸等具有相对专一性的氨基酸基团修饰剂,研究PPO的酶活性中心必需基团,并确定乙醇对PPO的抑制动力学特性.结果表明:富士苹果中的PPO蛋白结构中酶活性中心必需基团有组氨酸的咪唑基、精氨酸的胍基与色氨酸残基.抑制动力学实验表明:乙醇通过与PPO酶活中心基团的结合抑制PPO酶活性,其对PPO的半抑制浓度(IC50)为0.14mmol.L-1,抑制类型为可逆的竞争性抑制.     

酶生物传感器的研究进展

简要介绍了酶生物传感器的工作原理、分类以及酶生物传感器在环境监测、食品分析、生物医学等方面的应用,探讨了影响酶传感器研究进展的瓶颈,并展望了其应用前景.     

酶固定化载体材料的研究进展

酶的固定化是生物技术中最为活跃的研究领域之一。固定化酶能在较为温和的反应条件下高选择性、高效率地催化某些化学反应,并且不会对环境造成污染。作为固定化酶技术的重要组成部分,载体的结构及性能在很大程度上直接影响所得固定化酶的催化活性及操作稳定性。综合性能优良的载体材料的设计与制备是固定化酶技术领域的一个非常重要的研究内容。综述了近年来国内外有关固定化酶载体材料的研究现状和发展趋势。     

天然产物来源的黄嘌呤氧化酶抑制剂研究进展

高尿酸血症及痛风是当今社会的常见病、多发病,至今无法根治.尽管临床常用的降尿酸药物,如别嘌呤醇疗效确切,但副作用大,使其应用受到明显限制,故寻找新的安全、高效的降尿酸活性物质一直是研究热点之一;黄嘌呤氧化酶（xanthine oxidase,XOD）是介导尿酸生成的重要酶;旨在对天然产物提取物、活性部位和单体成分抑制黄嘌呤氧化酶活性的研究成果进行综述.