芜菁花叶病毒四川分离物外壳蛋白基因的克隆及序列分析

从四川省3个蔬菜基地感病的甘蓝、花菜、萝卜、叶芥菜分离到芜菁花叶病毒6个分离物.利用 RT-PCR克隆了这6个分离物的外壳蛋白基因(CP), 测定了它们的核苷酸序列并进行了序列分析. 结果表明,6个分离物的 CP基因均为864个碱基,核苷酸序列同源性较高, 达 97.0%～100%;它们与 world-B组分离物的同源性最高,达 92.1%～100%;与 basal-B组分离物的同源性最低,仅 87.6%～90.2%. 基于 TuMV的 CP基因核苷酸序列的分子进化树显示,TuMV分离物可分为4组,本研究所分离到的6个 TuMV四川分离物属于第四组,即 world-B组.     

甘薯羽状斑驳病毒中国分离株外壳蛋白基因的克隆和序列分析

根据已报道的甘薯羽状斑驳病毒(Sweetpotatofeatherymottlevirus,SPFMV)外壳蛋白基因序列,设计合成了一对特异性引物,以我们从国内甘薯品种徐薯-18上分离到的SPFMV的RNA为模板,经过反转录合成cDNA第一条链,经PCR扩增、限制性酶切后克隆于pUC19的Hind 和SacI位点,转化大肠杆菌JM109,经限制性酶切分析、PCR鉴定以及序列分析证实获得了SPFMV中国分离株外壳蛋白基因的全长克隆.     

香石竹斑驳病毒（CarMVsh）外壳蛋白基因克隆及原核表达

香石竹斑驳病毒上海分离株是从上海地区栽培的香石竹上分离并鉴定的,以提纯的病毒为材料,ＳＤＳ－酚法纯化的基因组ＲＮＡ作为模板,ＲＴ－ＰＣＲ合成并扩增外壳蛋白基因ｃＤＮＡ,ｃＤＮＡ克隆于ｐＧＥＭ－Ｔ ｅａｓｙ ｖｅｃｔｏｒ,转化为Ｅ．ｃｏｌｉＪＭ１０９。阳笥克隆ｐＴＣａＣＰ经序列分析,证明带有全长ＣＰ基因。     

甜菜坏死黄脉病毒不同分离物外壳蛋白的研究

应用SDS-PAGE和PCR—SSCP分析技术，对新疆不同地区的BNYVV分离物进行分析，结果表明：12个分离物蛋白质外壳的蛋白亚基分子量均为20kD；来自库尔勒的K4和K5分离物编码外壳蛋白质的基因不同于其他地区和本地区的分离物，二者彼此间也不相同。     

侵染新疆辣椒CMV的外壳蛋白基因的克隆和序列分析

从表现黄化的辣椒病株上获得分离物XJ-P,用1对CMV基因引物进行RT-PCR,扩增得到了774bp的特异性核苷酸片段。将PCR产物克隆到pMD18-T载体中再转化到大肠杆菌TOP10。经限制性内切酶酶切鉴定,重组克隆中含有与PCR产物大小相同的774bp的插入片段。cDNA全序列分析表明,所扩增出的774bpCMV基因,含1个657bp开放阅读框架（ORF）,编码218个氨基酸组成的蛋白,所克隆的基因包含完整的CMVCP基因。所测得的XJ-P分离物其CP基因与CMV亚组Ⅰ、亚组Ⅱ各株系之间的核苷酸同源性分别为90.84%-94.22%和74.37%-76.52%,氨基酸同源性分别为94.04%-98.17%和80.37%-82.19%,因此将该分离物鉴定为黄瓜花叶病毒亚组Ⅰ。     

家蚕质多角体病毒基因部分序列克隆及分析

根据BmCPV(Bombyx mori cytoplasmic polyedrosis virus)核酸片段4的末端序列设计一对引物，通过RT－PCR扩增获得多条DNA片段，对其中占优势的约740bp的片段进行切胶回收，克隆到pGEM-Teasy载体上并进行序列测定。与GenBank中的database比较分析表明，该序列与已登录的序列同源性很低，并与呼肠弧病毒科其它种的对应核酸序列有较大差异。本实验证明所测序列为一新序列。     

苹果褪绿叶斑病毒库尔勒香梨分离物外壳蛋白基因的序列分析

利用RT-PCR，获得苹果褪绿叶斑病毒库尔勒香梨分离物外壳蛋白基因的cDNA克隆。序列分析结果表明，库尔勒香梨分离物外壳蛋白基因由582个核苷酸组成，编码一个由193个氨基酸组成的蛋白质。与已报道的P863、P205、A-Ball分离物序列比较，核苷酸序列同源性为80．0％～86．1％，推导的氨基酸序列同源性为84．9％～89．6％。     

马铃薯卷叶病毒陕西分离物外壳蛋白(CP)的生物信息学分析

目的分析预测马铃薯卷叶病毒(PLRV)外壳蛋白的理化性质及结构。方法应用DNA-MAN软件、ExPASy中的ProtParam工具,SignalP,LipoP程序,TMHMM,PSIPRED和3D-PSSM等方法,分析PLRV.CP的核苷酸基本特征、蛋白质理化性质、亲疏水性、可溶性、信号肽、跨膜结构域、二级结构、保守区域、三级结构等。结果陕西PLRV.CP,与已报道的PLRV.CP高度同源。蛋白序列分析显示无跨膜螺旋结构,不属分泌蛋白,是可溶的亲水性蛋白。二级结构主要为折叠和无规则卷曲,不含转角。三级结构保守区预测表明,该蛋白属于黄化病毒属外壳蛋白成员。结论对马铃薯卷叶病毒外壳蛋白的生物信息学分析为进一步研究其功能、探索抗病途径奠定了基础。     

云南红豆杉炭疽病原菌的分离鉴定与致病性研究

通过对云南红豆杉病原菌的分离培养和致病性研究，确定该病炭疽病病原菌为黑盘孢目盘长孢属菌。该病主要在７￣１０月湿热条件下发生，经每半个月喷０．５％ＦｅＳＯ４和１：１：１００波尔多液各一次，可控制该菌的危害，使云南红豆杉保持旺盛的生长。     

牦牛德尔卑沙门氏菌的分离、鉴定及致病性研究

为调查四川省阿坝州红原县牦牛腹泻病因,本课题组从红原县4所养殖场采集牦牛腹泻粪便16份,并对分离株进行多位点序列分型、血清型鉴定、耐药性试验及小鼠致病性试验.结果表明：16份样品共计分离出16株沙门氏菌,均为德尔卑沙门氏菌ST71型,100%菌株对四环素、氨苄西林、氯霉素和头孢噻呋多重耐药;选取腹泻较严重牦牛粪样沙门氏菌分离株（编号15XLR）进行致病性试验,得出分离株15XLR的半致死剂量为1.2×107 CFU,病理切片结果显示小鼠后脾脏、肠道损伤严重.本研究对红原县牦牛腹泻病因进行了调查研究,并证实德尔卑沙门氏菌除感染猪鸡外,其能够入侵牦牛机体,提示牦牛腹泻疾病的防控应注重沙门氏菌的感染以及在牦牛群体中的传播.     

长叶车前花叶病毒上海株(RMVsh)外壳蛋白基因的克隆、序列分析及原核表达

长叶车前花叶病毒上海分离株（RMVsh)是从上海郊区的青菜（Brassica chinensis)上分离鉴定的，以提纯的病毒为材料，SDS－酚法纯化的基因组RNA作为模板，通过RT－PCR方法克服了该病毒的外壳蛋白基因（CP），DNA序列测定结果表明，外壳蛋白基因全长474个碱基，编码157个氨基酸，将CP基因插入原核表达载体pBAD/His-C中，转化E.coli Top10后，诱导表达，经聚丙烯酰胺凝胶电泳分析呈－特异性的蛋白条带，Western blot检测表明，表达产物与RMVsh抗血清呈阳性反应，RMVsh CP基因的核苷酸序列及氨基酸序列与烟草花叶病毒属中其他能侵染十字花科作物的成员相比，同源率分别为83．5％－98．9％和87．9％－99．4％，并讨论了RMVsh的分类地位为烟草花叶病毒属侵染十字花科植物2个亚组中的第一亚组的代表。     

魔芋软腐病病原菌的分离及致病性研究

自贮藏期腐烂的魔芋球茎和有典型软腐病害症状特性的植株分离出的菌株,通过形态特征、生理生化特性及致病性研究,结果表明:3号、4号菌株为魔芋软腐病病原菌-胡萝卜软腐欧氏杆菌(Erwinia carotovora subsp. carotovora),但两菌株在致病性上有明显的差异.     

禽流感病毒番鸭分离株HA基因的克隆及序列分析

禽流感病毒番鸭分离株ZM（A／Muscovy/Zhejiang/1/2000)经12日龄鸡胚增殖后纯化,提取病毒的基因组RNA,采用RT－PCR方法一次性扩增出17kb的特异性条带,与预计大小相符,将扩增产物提纯后克隆pGEM-T载体,酶切分析筛选到含1．7kb基因片段的阳性质粒,进一步对该片段进行测定及分析,结果表明：所扩增的基因延期长度为1732bp,含HA基因完整的阅读框架,编码568个氨基酸,同源性分析表明：该毒株起源于欧亚种系,与GD／96的HA基因核苷酸同源率高达99％,表明这两个株HA基因亲缘关系极为密切。     

鸡源致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

为了解鸡源致病性大肠杆菌的生物学特性和耐药性,试验通过采集病料、细菌分离培养、16S rRNA基因鉴定、致病性试验、药敏试验等方法。结果表明:分离出的20株细菌的培养特征、镜检特征均符合大肠杆菌特征;16S rRNA基因序列经BLAST比对与大肠杆菌同源性达99.9%～100%,确定20株分离菌为鸡源大肠杆菌;20株大肠杆菌的致病力为40%～100%;10株鸡源致病性大肠杆菌对15种抗菌药物均呈现多重耐药,耐药率为33.3%～93.3%,耐药情况较严重和复杂。     

北疆地区辣椒上烟草花叶病毒（TMV）各分离物的差异性研究

以ＴＭＶ－ｏｍ为对照,测定了辣椒上５个烟草花叶病毒分离物Ｐ－９、Ｐ－３８、Ｐ－４４、Ｐ－７１、ＴＭＶ－ｗｙｍ在４２个辣椒品种、品系上的致病反应,结果表明这５个分离物对辣椒的致病性存在明显差异：Ｐ－７１、ＴＭＶ－ｗｙｍ＞Ｐ－９＞Ｐ－３８、Ｐ－４４;对接种过５个ＴＭＶ分离物的辣椒（四平头）进行过氧化物酶（ＰＯＤ）和酯酶（ＥＳＴ）同工酶分析,结果表明辣椒上５个ＴＭＶ分离物引起的酶活性有差异：导致ＰＯＤ上活性强弱为ＴＭＶ－ｗｙｍ＞Ｐ－９、Ｐ－３８＞Ｐ－４４、Ｐ－７１;引起ＥＳＴ活性强弱为Ｐ－３８＞ＴＭＶ－ｗｙｍ、Ｐ－４４＞Ｐ－７１＞Ｐ－９。说明北疆地区辣椒上ＴＭＶ存在着分化。     

柑橘衰退病毒柠檬分离物外壳蛋白基因原核表达及多抗血清制备

在云南发现的柑橘衰退病毒柠檬分离物对云南省德宏州的柠檬产业造成较大危害.通过用NdeⅠ和XhoⅠ对柑橘衰退病毒柠檬分离物外壳蛋白基因进行双酶切,定向插入到表达载体pET-28a中,并转化大肠杆菌BL21,经IPTG在28℃下诱导6 h后,SDS-PAGE电泳显示,在25 kDa处有特异表达谱带,回收特异蛋白带作为抗原免疫家兔,制备出特异抗血清.间接ELISA测得效价为1∶3000,并且与CTV具有良好的特异性反应.     

辣椒脉斑驳病毒侵染性克隆构建的简易方法

本文介绍了一种构建辣椒脉斑驳病毒(Chilli veinal mottle virus , ChiVMV)侵染性克隆的简易方法. 基于辣椒脉斑驳病毒的全长确定序列, 根据基因内部的单一限制性酶切位点, 设计引物, 将ChiVMV分成KL1,KL2, KL3三个片段通过RT PCR和TA克隆的方法将3个片段构建到PMD19 T载体上. 通过双酶切将ChiVMV前面7000bp的片段构建到载体上, 从而将全部的ChiVMV cDNA分段构建到两个重组质粒中, 成功地避免了全长病毒序列在大肠杆菌中不稳定的现象. 进行体外转录时, 先通过PCR扩增出两个彼此有一定重叠的平末端片段, 再利用两个重叠片段为模板用重叠PCR的方法扩增出全长带T7启动子的ChiVMV cDNA, 并通过T7 RNA聚合酶成功转录出ChiVMV的病毒RNA.     

西藏地区牦牛源沙门菌分离鉴定、血清分型及致病性研究

本研究旨在了解西藏地区牦牛源沙门菌流行情况、分布情况和血清型种类.通过采集西藏全区七地市牦牛腹泻粪便,利用细菌培养特性、生化特性和分子生物学方法对样品中细菌进行分离鉴定,再根据血清特异性凝集对分离菌株进行血清分型,最后利用动物感染试验和动物组织HE染色法了解菌株致病性强弱.结果表明：西藏全区共分离出50株沙门菌,检出率为25.13%（50/199）.其中,拉萨、昌都和山南三地分离率相较于其他四地较高,阿里地区分离率最低;血清型分型结果显示,共分离出B群、C1群、C2群、D群4种血清群,包含都柏林沙门菌、伤寒沙门菌、阿邦尼沙门菌等血清型共18种血清型.按血清群统计结果显示,4种血清群中,以D群所占血清菌株最多,为常见血清群;50株沙门菌种以都柏林沙门菌为优势血清型,占所有菌株的20.00%（10/50）;从各地区沙门菌分型结果显示,各地区所占血清群、血清型数量均不相同.致病性试验结果显示：牦牛源都柏林沙门菌感染KM小鼠的LD₅₀为0.368×10⁸CFU/mL,属强致死性菌株;组织HE染色观察结果显示牦牛源都柏林沙门菌可引起宿主全身性损坏,其中...     

孔雀低致病性禽流感病毒株的分离与鉴定

用鸡胚分离方法从发病孔雀脑组织中分离病毒;将分离病毒进行血凝试验、血凝抑制试验、致病指数试验和半数致死量试验。结果表明,该株病毒可凝集鸡红血球,血凝性可被已知的禽流感(H9N2)抗体所抑制,脑内致病指数在1.6~2.5范围内,半数致死量,致病指数为50%,表明该病毒为低致病力禽流感毒株。     

甜菜退绿斑驳病毒的分离和鉴定

本文报导一种甜菜退绿斑驳病毒的分离和鉴定。这种病毒对藜科植物有较强的亲和力,而难以侵染茄科及其它科植物。感病的甜菜表现为系统的退绿斑驳,其它藜科植物则产生局部枯斑、坏死斑及系统顶端坏死。物理化学性质测定表明,这种病毒在体外很不稳定,致死温度为40—45℃;;稀释限点10~(-2)—10~(-3);;体外存活期仅有8—10小时(10—15℃)。病毒粒子含有脂类性质外膜酸球形、椭圆形或其它不规则形态,直径约70—90nm,当用无离子洗涤剂处理除去外膜后,剩下形态较规则的球形核衣壳部分,直径约55—60nm.。超薄切片观察表明,病毒粒子存在于细胞质中,并总是伴随着细胞质浓密染色物质出现。