金荞麦愈伤组织诱导及其总黄酮含量测定方法的建立

金荞麦是蓼科(Polygonaceae)荞麦属(Fagopyrum Mill.)一种营养丰富并具有重要药用价值的多年生草本植物, 其块根活性提取物(其成分同悬浮培养的次生代谢产物即黄酮类化合物)是多种重要的抗癌药物和癌预防药物的主要成分之一. 利用金荞麦腋芽的叶片和茎段进行愈伤组织的诱导, 筛选出最适合愈伤组织生长的培养基为1/2MS+6-BA 2.0mg/L +NAA 0.3mg/L(或IBA 0.3mg/L)+2,4-D 0.1mg/L. 并在借鉴其他物种利用分光光度法测定总黄酮含量的基础上,对金荞麦愈伤组织的显色时间等条件进行了优化, 得到了一种适合金荞麦愈伤组织总黄酮含量测定的方法. 该方法简单易行, 为悬浮培养和其工厂化生产黄酮类化合物时总黄酮含量的测定奠定了基础.     

迎春花无菌体系的建立以及茎段和叶片愈伤组织的诱导

本文对迎春花无菌体系的建立和茎段、叶片愈伤组织的诱导进行了研究。结果表明：（1）在建立迎春花的无菌体系时,应该选择晴天去采集外植体为好;（2）带芽茎段和叶片的污染率最大,而不带芽茎段的污染率最小;（3）在超净工作台外消毒应先用饱和洗衣粉溶液浸泡10 min,然后用自来水冲洗2-3次,最后再用蒸馏水冲洗2-3次;在进行超净工作台内消毒时,叶片应该先用84消毒液（1%）浸泡5min,无菌水冲洗3次,75%酒精浸泡20s,无菌水冲洗3次,0.1%升汞浸泡8 min,无菌水冲洗3次,而茎段应该先用84消毒液（1%）浸泡10 min,无菌水冲洗3次,75%酒精浸泡30s,无菌水冲洗3次,0.1%升汞浸泡10min,无菌水冲洗3次;（4）在NAA为0.2 mg/L时,高浓度的6-BA有利于不定根的再生,而低浓度的6-BA则更利于愈伤组织的诱导;在NAA为0.2 mg/L时,高浓度的KT有利于愈伤组织的诱导,而低浓度的KT则有利于不定根的再生;（5）NAA更利于不定根诱导,也可诱导愈伤组织。而2,4-D只利于愈伤组织的诱导,不利于诱导不定根。     

蔓茎堇菜愈伤组织分化再生植株

研究了蔓茎堇菜植株再生的培养条件。通过L9（3^4）正交试验筛选出诱导蔓茎堇菜愈伤组织的适合培养基为MS＋2,4－D1．5＋ZT1．0;4个激素组合即ZT2．0＋NAA0．5、ZT2．0＋IBA0．5、6－BA2．0和6－BA2．0＋NAA0．5可诱导出蔓茎堇菜芽;诱导根分化与植株培养的适宜培养基为MS＋NAA2．0＋6－BA（或ZT）0．25或MS＋（IBA＋IAA）1．0＋6－BA（或ZT）0．25。     

蔓茎堇菜总黄酮含量的测定

蔓茎堇菜样品经提取,净化后,用紫外分光光度法测定,以芦丁为标准品,在256nm处测定其总黄酮含量,结果表明,植物株总黄酮含量为2．39％,根总黄酮含量为1．08％,细胞悬浮物总黄酮含量为0．76％,研究结果了为利用蔓茎堇菜生产黄酮类药用成分提供科学根据。     

黄秋葵愈伤组织培养及再生体系建立的研究

以具有杂种黄蜀葵嫩茎为材料,采用组织培养的方法,进行了嫩茎的愈伤组织诱导、分化,不定芽的生根以及试管苗的生根继代增殖培养、移栽与定植的研究.结果表明:嫩茎愈伤组织诱导培养和继代增殖培养的理想培养基是MS+6-BA0.75mg/L+2,4-D2.1 mg/L;愈伤组织分化培养的理想培养基是MS+AgNO31.0 mg/L+NAA0.1mg/L+ZT1.6mg/L;1/3MS+蔗糖10g/L+IAA0.4mg/L是不定芽生根培养的理想培养基;试管苗生根继代增殖培养的理想培养基是1/3MS+ABT0.6mg/L+蔗糖10g/L+IAA0.4mg/L.试管苗移栽成活率为93.9%,定植成活率为97.5%.定植的试管苗保持了杂种黄秋葵所有植物学性状和杂种优势.     

青蒿茎段愈伤组织的诱导及植株再生

为了建立青蒿的快速繁殖与遗传育种体系,以青蒿茎段为外植体,研究其离体培养及试管苗再生途径.结果表明,青蒿基段愈伤组织诱导培养基为MS 6-BA1.0mg·L-1 NAA1.0mg·L-1,分化培养为MS 6-BA3.0·L-1 NAA0.5 mg·L-1,生根培养基为MS NN1.5mg·L-1.     

茴香胚性愈伤组织的诱导和再生植株

以茴香幼苗的茎和叶柄为外植体，在不同种类和浓度的植物激素处理下产生了愈伤组织，进一步诱导生成胚性愈伤组织，在分化培养基上，愈伤组织通过形态建成的两种基本方式：器官发生和胚状体发生，得到了茴香的再生植株。     

影响水稻愈伤组织植株再生频率的因素研究

以水稻成熟种子为外植体,研究了影响水稻伤组织再生频率的各种因素,如渗透压,植物激素素和ＡｇＮＯ３等。发现不同基因型愈伤组织再生频率有很大差异,增加诱导培养基或分化培养基其中的渗透压和琼脂浓度,继代培养时加入适量的激动素或６－苄基氨基腺嘌呤以及在分化增减基中加入活性炭、玉米素等均可明显提高水稻愈伤组织的再生频率。     

花生愈伤组织的诱导及植株再生

研究花生愈伤组织的诱导及植株再生的条件．用汕油71花生幼苗上胚轴、下胚轴、子叶、幼叶等不同外植体类型进行比较,发现幼叶较易诱导愈伤;用不同激素质量浓度配比研究对花生幼叶愈伤诱导的影响,发现IAA（吲哚乙酸）对花生的愈伤诱导效果较2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）和NAA（萘乙酸）好;用不同叶龄及叶切段比较,发现以10d苗龄的叶片中部切段愈伤诱导率较高取苗龄10d的花生无菌苗的幼叶中段为外植体,置于ρ（MS＋IAA）3mg／L＋ρ（BA）1mg／L培养基中培养,30d后诱导率达到100％且愈伤呈淡绿色、半透明、疏松状．50d后转至ρ（MS＋IAA）0．5mg/L＋ρ（BA）2mg／L＋ρ（TDZ）0．5mg／L分化培养基中诱导芽（TDZ,噻重氮苯基脲）,截取诱导芽单芽,转接至根诱导培养基中。获得再生植株     

蒲苇愈伤组织的诱导和再生体系的建立

以蒲苇成熟种子为外植体,MS为基本培养基并附加不同激素组合,筛选出诱导蒲苇愈伤组织产生和分化的最佳培养基,成功建立蒲苇的再生体系．试验结果表明：蒲苇种子最佳灭菌方式是将种子灭菌前用无菌水浸泡24h左右,然后用75％酒精消毒20s,再用0．1％（W／V）氯化汞消毒灭菌10min．愈伤组织诱导的最佳培养基为MS＋2,4-D3．0mg/L＋6-BA0．1mg／L;愈伤组织分化的最佳培养基为MS＋6-BA 2．0mg／L＋NAA 0．1mg/L分化继代的最佳培养基为MS＋6-BA 1．5mg／L＋NAA 0．2mg/L;生根最佳培养基配方为1／2MS＋NAA 0．8mg/L＋6-BA 0．2mg／L＋（0．02％）AC．     

杉木合子胚愈伤组织的诱导及植株再生

以杉木成熟及未成熟合子胚为外植体,研究了基本培养基、植物激素、合子胚的发育阶段等因素对杉木愈伤组织的诱导及不定芽分化的影响。结果表明：1／2MS＋2mg／L 2,4-D＋1．0mg／L 6-BA＋1．0mg／L KT＋30g／L蔗糖是成熟合子胚诱导愈伤组织的最佳培养基;处于胚胎选择阶段或者组织与器官分化阶段的幼胚,能诱导出松软、晶莹透明的愈伤组织,诱导频率为2％～6％。成熟阶段的幼胚诱导出的愈伤组织的外观形态与成熟合子胚诱导出的愈伤组织相似,愈伤组织的诱导频率随着合子胚发育的成熟而迅速提高;DCR＋1．5mg／L 6-BA＋1．5mg／L KT＋20g／L蔗糖是诱导不定芽发生的最佳培养基。高约1．5cm的不定芽转入生根培养基,生根率可达100%。     

草地早熟禾胚性愈伤组织的诱导和植株再生体系的建立

使用MS附加2,4-D作基本培养基,对草地早熟禾进行愈伤组织的诱导和愈伤组织分化成苗试验,建立了最佳的早熟禾胚性愈伤诱导和植株再生体系.早熟禾的成熟种子经过灭菌后,接种到愈伤组织诱导培养基上,置于25±2℃,黑暗条件培养约8周~9周,有胚性愈伤组织产生.然后将愈伤组织转至分化培养基上,黑暗培养一周后,再进行光照培养,约20天后开始分化出根和芽,继续培养则长成粗壮的绿色植株.2,4-D是影响愈伤形成和植株再生的关键物质.本实验结果证明,3.0mg.L-1和0.1mg.L-12,4-D是最佳浓度组合,其诱导频率和分化频率分别为67.82%和48.81%;0.5mg.L-16-BA对根和芽的分化具有促进作用.     

黔产钩藤不同部位中总黄酮的含量测定

目的:测定黔产钩藤不同部位中总黄酮的含量。方法:以芦丁为对照品,采用紫外分光光度法在510 nm下,对钩藤的皮、叶、钩、茎、木质部、薄壁组织中总黄酮进行含量测定。结果:芦丁对照品在0.3428μg/mL～2.0565μg/mL范围内线性关系良好,Y=0.3896X+0.03(r=0.9994);加样回收率96.34%,RSD=2.17(n=6);钩藤不同部位中皮的含量最高,为196.26μg/g。薄壁组织含量最低,为38.70μg/g。如下:皮叶钩茎木质部薄壁组织。结论:建立的紫外分光光度法操作简便,重复性良好,可用于钩藤中总黄酮的含量测定;造成黄酮类化合物在钩藤不同部位分布存在差异的原因,可能与黄酮类的生物合成途径有关,植物的生物合成途径需要相应的酶发生作用,该结果可以为钩藤的更进一步研究与开发利用提供科学依据。     

花生不同外植体愈伤组织的诱导及植株再生

以成熟花生种子的上、下胚轴和叶片外植体为对象,在离体培养下,考察几种外植体再生能力的差异并对其作出对比分析.结果表明:上述外植体均能诱导出愈伤组织并能够进一步再生出幼苗,但不同外植体的再生能力有所差异,其再生能力大小依次为:上胚轴>叶片>下胚轴,培养基的差异对外植体愈伤组织诱导及再生起决定性作用,不同预培养时间对愈伤诱导及再生也有影响,总的来看是预培养时间短的外植体要好于预培养时间长的外植体.     

白花泡桐叶柄愈伤组织再生植株的诱导与培养

为提高白花泡桐繁殖效率,防止丛枝病的传播,保持优良种性,利用愈伤组织再生技术对其增殖.研究表明:叶柄产生愈伤组织最适培养基为MS 2.0 mg/L BA 0.2 mg/L NAA 0.05 mg/L2,4-D;诱导芽分化最适培养基为1/2MS 2 000 mg/L脯氨酸,可使诱导分化率达27%;增殖继代最适培养基为B5 1.0 mg/L BA 0.1 mg/L NAA,增殖系数达6.79;生根最适培养基为1/2MS 0.1 mg/L IBA 0.1 mg/L NAA,生根率达100%.     

蜂胶胶囊总黄酮含量测定的紫外分光光度法应用

本文针对紫外分光光度法在药品分析中的广泛应用,对蜂胶胶囊中总黄酮含量进行了测定,并结合胶囊剂型特点,开展方法学研究,为蜂胶的质量标准化研究提供实验依据。     

驱蚊香草愈伤组织再生植株的诱导与培养

驱蚊香草(Pelargonium citrosumVanleenii)具有较强的净化空气作用,因其所分泌的挥发性成分香茅醇、香茅醛具有驱蚊功效而广泛栽培.利用愈伤组织再生技术对其增殖进行研究.叶柄愈伤组织诱导芽分化最适培养基为MS BA 1.0 mg/L NAA 0.1 mg/L 2,4-D 0.05 mg/L,可使诱导分化率达87%;增殖继代最适培养基为MS BA 1.0 mg/L NAA 0.1 mg/L,增殖系数达9.79;生根最适培养基为1/2 MS NAA 0.1 mg/L,生根率达100%.     

日本结缕草茎节和愈伤组织再生体系的优化

分别以日本结缕草的成熟胚和茎节为外植体,建立并优化了2套组培再生体系.实验结果表明:利用成熟胚诱导愈伤组织,适宜诱导培养基为MS基本培养基添加2 mg/L 2,4-D配合0.2 mg/L 6-BA,诱导率为42.5%;继代培养可改善愈伤组织状态,增加胚性,其中增加培养基渗透压,并适当添加ABA(0.2 mg/L),可明显提高胚性愈伤组织比率;继代2次后的愈伤组织在3种细胞分裂素6-BA,KT,ZT适当配比的分化培养基上,分化率可达到50%~75%.在以茎节为外植体的组培体系中消毒处理和预培养是比较关键的环节;预培养时MS培养基效果优于1/2 MS,在MS基本培养基中添加0.25 mg/L KT,1.0 mg/L ZT和0.1 mg/L NAA为比较适合的芽诱导培养基,诱导率可达37.9%.同时,比较了两套再生体系的优缺点,为日后日本结缕草的遗传转化奠定基础.     

玉米幼胚愈伤组织再生植株的变异

玉米受粉7—10天的幼胚,在含激素的MS培养基上诱导生成愈伤组织,并分化出胚状体,成苗后移栽于温室内,至成熟结实。这些试管苗植株在整个生长发育过程中,出现了雌穗顶生,顶生雌雄同穗,植株矮,叶片少,雌穗着生部位低及轮生叶序和对生叶序等多种显著的差异和变异。