青菜花粉管通道法导入外源DNA的研究初报

采用花粉管通道法，将青菜株系７５Ｆ５、１４号大白菜、紫阳等三个品种的总ＤＮＡ及质粒ｐＡｃｔ１－Ｄ ＤＮＡ导入青菜６０５品系，收获青菜种子。种子发芽后分别提取约两周苗龄的小苗总ＤＮＡ，并经ＥｃｏＲⅠ酶切，以ｇｕｓ基因片段为探针做子杂交，证实了外源ｇｕｓ基因已整合到青菜６０５品系中；田间观察还获得了一株与供体大白菜花形相似的变异株。     

基因工程与外源DNA导入技术

基因工程是把目的基因与适当的载体相连接形成重组ＤＮＡ, 并引入到适当的寄主细胞中进行复制和表达; 外源ＤＮＡ 导入技术是将供体总ＤＮＡ的片段, 在自花受粉后一定时期内, 使其沿着花粉管通道或其他方法进入胚囊, 转化受精卵或其前后的细胞． 基因工程方法思路清晰、原理清楚、目的明确, 但操作繁琐, 费用高; 外源ＤＮＡ导入技术简便易行, 费用低, 但目的性不强, 工作量大． 如将两种方法结合使用, 可降低费用, 提高整合率． 综述了两种方法的研究进展情况及在实际应用中所取得的成果     

外源DNA导入技术在小麦改良中的应用研究

研究表明:(1)外源 DNA 导入技术应用于转移抗病基因是有效的;(2)外源DNA 导入后代常常会产生意想不到的特殊类型,为新种质创造开辟了一条新途径.     

用种子醇溶蛋白电泳技术鉴定外源DNA导入春小麦变异 …

采用醇溶蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对外源ＤＮＡ导入技术选育的春小麦变异株系的单株及其受体种子的分析结果：小麦各变异后代电泳谱带在１５￣１９条之间变动,受体谱带为１６条。多数谱带与受体相似,也出现了受体所没有的新谱带。各后代的谱带着色深度,谱带宽度均存在显著差异,其差异的出现与外源ＤＮＡ导入有关。同时说明,种子醇溶蛋白电泳技术可用于外源遗传物质导入小麦变异后代的鉴定。     

用种子醇溶蛋白电泳技术鉴定外源DNA导入春小麦变异后代

采用醇溶蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对外源DNA导入技术选育的春小麦变异株系的单株及其受体种子的分析结果:小麦各变异后代电泳谱带在15～19条之间变动,受体谱带为16条.多数谱带与受体相似,也出现了受体所没有的新谱带.各后代的谱带着色深度、谱带宽度均存在显著差异,其差异的出现与外源DNA导入有关.同时说明,种子醇溶蛋白电泳技术可用于外源遗传物质导入小麦变异后代的鉴定.     

黄瓜外源 DNA 导入技术方法研究

依据黄瓜的花器结构及开花习性,研究了通过花粉管通径将外源DNA 导入黄瓜子房的方式以及DNA 溶液的浓度、用量、pH 值和黄瓜花粉粒的渗透压等因紊对导入效果的影响.采用花粉与DNA 溶液混合授粉和子房微量注射均可成功的获得10~(-2)～10~(-3)的高遗传转化率.证明了应用外源DNA 导入进行黄瓜分子育种的可行性.     

大豆自花授粉后外源DNA导入技术的验证

以花生DNA为供体,大豆为受体,在大豆自花授粉后,采用液滴法和注射法导入花生DNA,在受体大豆植株后代中获得了多种变异类型。为探讨外源DNA 导入技术的可靠性,将具有卡那霉素抗性基因的质粒pCaMVneo 用同法导入大豆。所收获的种子发芽后培养于一定浓度的卡那霉素溶液中,其中部分植株对卡那霉素表现抗性,可继续生长发育。分株提取这些植株的DNA,以质粒DNA 为探针,进行斑点杂交.供试的14个植株中出现了13个阳性斑。实验结果证明质粒DNA 已整合到大豆基因组中并获表达,从而间接地证实了授粉后通过花粉管通道导入外源DNA 的技术是可靠的。     

导入大豆总DNA改良大麦籽粒营养品质

利用花粉管通道法和基因枪法将大豆总DNA直接导入大麦。采用微量凯氏定氮法和氨基酸自动分析仪进行大麦后代籽粒蛋白质含量和氨基酸含量分析。结果显示：(1)经花粉管通道法导入大豆总DNA获得的大麦后代有6个单株籽粒蛋白质含量明显超过对照(12．91％)，它们是18．23％，16．61％，16．42％，16．58％，16．22％和16．38％，占总数比例的7．06％；(2)经基因枪法导入大豆总DNA共获得12个单株籽粒蛋白质含量明显超过对照(13．29％)，它们的蛋白含量分别为16．70％，16．52％，17．9l％，19．59％，17．44％，18．56％，18．46％，17．3l％，16．5l％，18．8l％，18．8l％和19．02％，占总数比例的8．33％；(3)籽粒氨基酸含量分析显示在高蛋白变异后代中，随着籽粒蛋白质含量增加的同时，籽粒总氨基酸和各种必需氨基酸含量也有明显提高．经直线相关分析显示，导入大豆总DNA的后代籽粒赖氨酸等6种必需氨基酸含量与总氨基酸含量呈极显著正相关关系。本试验结果充分说明，直接导入大豆总DNA有可能提高大麦籽粒的蛋白质含量及质量。     

外源全量DNA导入方法对葡萄种子发芽生根和成苗的研究

应用物化法对葡萄导入抗塞外源总量基因，采收转基因种子，进行层积处理、催芽、育苗，结果表明：转导外源基因的方法、外源基因种类以及受体葡萄品种的不同与座果率、种子发芽、成苗之间的比较结果是不同的。     

作物外源总体DNA导入技术及研究概况

对国内外作物外源总体ＤＮＡ导入技术及研究进展进行了综述。介绍了ＤＮＡ的制备，ＤＮＡ浓度、纯度及活性的鉴定，外源总体ＤＮＡ导入的方法及后代鉴定等主要技术环节。总结了该项技术所取得的成就及应用前景。     

外源DNA导入麦类作物结实率的研究

以普通小麦和硬粒小麦为受体、以亲缘关系不同的7个材料作供体，研究了花粉管通道法转化植株的当代结实率。结果表明：（1）受体为普通小麦时，在授粉后4-8h转化植株的结实率较高；受体为硬粒小麦时，时间上较为分散。（2）不同供体的转化植株的结实率差异较大；不同浓度的外源DNA导入后的当代结实率也存在较大的差异。（3）在不同的缓冲系统中，PBS系统的转化植株的结实率高于SSC和TE系统。由此可知，在不同条件下，利用花粉管通道法转化植株，其结实率受到一定的影响。     

导入野生大豆DNA小麦后代的农艺性状研究

用花粉管通道法将野生大豆总DNA导入小麦，获得了转基因小麦，其后代的农艺性状有较大的变化。田间实验分析了变异系小麦植株与对照植株在叶片的光合速率、蒸腾速率、叶面积及株高、穗粒、穗重等性状上的差异。t检验结果显示，变异系小麦在叶面性状及产量性状上的差异是显著的，外源DNA的导入改善了植物的农艺性状，并在后代中表达，为选育高产、优质的新小麦品种提供了依据。     

提高棉花杂交成铃效果试验

通过改离体去雄授粉为不离体对花授粉,杂交成铃率增至74.08%,杂交棉产量提高6.9倍,制种成本降至17.78元/公斤,为棉花杂交种大田应用创造了更为有力的条件.     

菠萝DNA导入黄瓜的初步研究

以菠萝为供体,黄瓜为受体,应用花粉管通道导入外源ＤＮＡ技术,在黄瓜自花授粉后直接导入菠萝ＤＮＡ,导入后代在产量、糖分含量等性状上产生了变异。结果表明：利用花粉管通道直接导入外源ＤＮＡ是改良黄瓜品种的有效技术,这一技术将在作物品种改良及远缘杂交方面起着非常重要的作用。     

花生DNA导入大豆的后代POD SOD活性及其同工酶谱分析

利用花粉管通道技术，将花生ＤＮＡ导入大豆中，得到变异后代Ｄ３．取结荚期大豆、花生和Ｄ４的不同器官为测试材料，对超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、过氧化物酶（ＰＯＤ）活性及同工酶特性进行了比较研究．结果表明，导入后代Ｄ４种皮的ＳＯＤ、ＰＯＤ活性明显增高，种子活性降低；其同工酶在凝胶上的分布及染色活性均表现出与受体和供体不同的特征，有的酶带明显来自花生ＤＮＡ．     

大豆DNA导入后的稻米粗蛋白与直链淀粉含量的相关性

以大豆为外源ＤＮＡ 供体,采用浸种及幼苗期浇灌法和花粉管通道法直接将大豆总ＤＮＡ 导入受体水稻,经常规栽培获得水稻后代种子⒚采用微量凯氏定氮法和Ｊｕｌｉａｎｏ 法分析水稻后代种子糙米的粗蛋白含量和直链淀粉含量,并对两者进行相关分析⒚结果显示：糙米的粗蛋白含量和直链淀粉含量呈负相关关系,相关系数ｒ＝ － ０．７６２,达极显著水平⒚由此推测将大豆ＤＮＡ导入水稻培育高蛋白稻米的同时,可降低稻米的直链淀粉含量,从而达到改良稻米食味品质的目的     

外源基因的导入对Synechococcus sp.PCC7942 SOD活性和同工酶谱的影响

外源DNA导入Synechococcus sp．PCC7942后．通过NBT光化还原和PAGE电泳检测发现转基因藻Synechococcus sp．PCC7942的SOD活性和同工酶谱发生了改变．若外源基因整合在受体细胞染色体DNA上，根据整合位点的不同则能提高或减弱Synechococcus sp．PCC7942的SOD活性，同时增加同工酶谱带．若外源基因不是整合在染色体上而是以质粒的形式存在，则只改变Synechococcus sp．PCC7942 SOD活性而不影响其同工酶谱．