酒精和冷冻处理对肌肉组织基因组DNA提取的影响

提取基因组DNA的质量对于后续的基因扩增、酶切以及测序等分子生物学研究具有关键的影响,对肌肉组织进行不同的酒精和冷冻处理会显著影响提取DNA的质量。经过-80℃超低温冷冻数日的黄鳝样品解冻,取肌肉组织放入75%酒精处理后提取的基因组DNA完整性差、降解厉害;经过-80℃超低温冷冻数日的黄鳝样品直接取肌肉组织提取的基因组DNA比较完整、降解程度低;活体采取的黄鳝新鲜肌肉组织样品经过75%酒精处理,在-80℃超低温冷冻数日然后提取的基因组DNA质量也较好,电泳条带明晰而锐利,弥散降解带较少。后两种处理方法对黄鳝肌肉组织中DNA酶活性降低显著,因此提取的肌肉组织基因组DNA质量较高,可以有力支持后续的酶切、PCR扩增等分子生物学实验。     

山西省沙棘品种AFLP的初步分析

沙棘体内酚类物质和蛋白质含量较高,影响了基因组DNA提取的产量.采用改良CTAB法对观光木基因组DNA进行提取,经过紫外吸收、琼脂糖凝胶电泳、双酶切和AFLP标记检测,结果表明:改良CTAB法提取的基因组DNA吸光值OD260/OD280为1.7～1.9,DNA无降解现象和杂质污染;基因组DNA双酶切彻底,并且APLP...     

不同浓度二硫苏糖醇对急性运动小鼠心、肝和肾组织脂质过氧化水平的影响

探讨了不同浓度二硫苏糖醇（DTT）对急性运动小鼠心、肝、肾组织脂质过氧化水平的影响。108只昆明种系雄性小鼠随机分为安静对照组（A）、运动对照组（B）、运动加五种不同浓度DTT组（分别为C、D、E、F、G）建立急性游泳训练模型。结果表明，运动后即刻，随着DTT浓度的升高，心和肾组织中MDA含量呈现出先上升后下降的趋势。肝组织中呈现出先上升后下降又突然增高的趋势。但运动后即刻F组心、肝、肾组织中MDA含量均低于A、B组。24h恢复后，随着DTT浓度的升高，心、肝、肾组织中MDA含量都呈现出先下降后上升的趋势。不同浓度DTT均具有抗脂质过氧化作用，但不同浓度DTT对不同组织在不同时期的脂质过氧化水平影响不同。     

对动物组织DNA提取方法的改进及PCR检测

以小型哺乳动物社鼠为例,通过调整酚与氯仿的比率、减少抽提次数及消化时间,对采用-70℃超低温冰箱、-20℃低温冰箱、70%乙醇液浸泡、95%乙醇液浸泡和含50 mmoL/L乙二胺四乙酸二钠的70%乙醇液浸泡等不同方法保存的社鼠肌肉组织提取基因组DNA,并对其进行微卫星指纹图谱分析,研究了改进方法对不同方法保存的社鼠肌肉组织提取DNA的效果,并比较了不同保存方法对DNA提取效果的影响.结果表明:改进方法可行,完全可以满足微卫星等分子标记技术的需要.     

样品保存温度和时间对总RNA提取的影响

目的:保障提取总RNA质量的前提下探索一种保存样品的适宜方法。方法:Trizol法(试剂盒)提取缺血复灌后肾组织总RNA。缺血45分钟后再灌注的大鼠肾脏,按照不同保存方法将样品分成四组,第一组液氮处理后立即提取总RNA;第二组-20℃冻存1天后提取总RNA;第三组-20℃冻存1周后提取总RNA;第四组液氮处理后1周后提取总RNA,然后检测各组RNA含量。结果:第一组RNA含量最多,第三组提取总RNA的含量最少。结论:提取总RNA的肾组织样品最佳保存方法是获得组织后立即提取总RNA,或者经液氮处理后保存在-20℃,一周后仍可获得较多含量的总RNA。     

β-烟酰胺单核苷酸对衰老小鼠的抗氧化作用研究

研究β-烟酰胺单核苷酸对衰老小鼠的抗氧化功能.衰老小鼠适应环境至少3d,按血清中丙二醛(MDA)水平分为7组,每组10只.各剂量组小鼠给予不同受试样品连续灌胃30d.实验结束时取血测血清中脂质氧化产物含量,取肝测肝组织中蛋白质羰基含量、还原性谷胱甘肽含量及抗氧化酶活力.脂质过氧化产物:NMN(125mg/d)、VC(200mg/d)组的小鼠血清中MDA值低于阴性对照组.蛋白质氧化产物:VC(200mg/d)组的蛋白质羰基含量低于阴性对照组.抗氧化酶活力:NMN(250、125、60mg/d)、VC(200mg/d)组小鼠肝组织中SOD水平高于阴性对照组.抗氧化物质:NMN(125mg/d)组小鼠肝组织中GSH含量高于阴性对照组;与VC(200mg/d)组比较,125mg/d组小鼠肝组织中GSH-PX活力显著升高.以上差异均有统计学意义(P＜0.05).在本实验条件下,β-烟酰胺单核苷酸在125mg/d的剂量下对衰老小鼠具有较好的抗氧化功能.     

幼龄和老龄SD大鼠肝、肾组织中生化指标变化的研究

目的研究过氧化脂质(LPO)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)在幼龄和老龄SD大鼠肝、肾组织中的变化,探讨此三种酶在机体衰老过程中的意义。方法21日龄和18月龄SD大鼠各10只,4℃取鼠肝、肾组织,用硫代巴比妥酸法测定LPO的含量;化学发光法测定SOD活力;DTNB直接法测定GSH-Px活力。结果幼龄SD大鼠肝、肾组织中LPO含量明显低于老龄鼠(P<0.01);SOD活力显著高于老龄鼠(P<0.01);GSH-Px的活力明显低于老龄鼠(P<0.01)。结论LPO、SOD、GSH-Px在幼龄和老龄鼠中有显著的变化,对机体衰老过程的研究具有指标意义。     

水体双酚A暴露对鲤肝肾的氧化胁迫及静止代谢率的影响

【目的】研究水体中双酚A(BPA)暴露对鲤(Cyprinus carpio)肝、肾组织的氧化胁迫及静止代谢率的影响。【方法】设置1个水体中BPA暴露质量浓度为0的空白对照组、1个水体中BPA暴露质量浓度为0但乙醇质量分数为0.03%的乙醇对照组和水体中BPA暴露质量浓度分别为0.5,0.9,1.8,3.6,7.2mg·L-1等5个处理组,处理30d后测定各组实验鱼的静止代谢率,肝组织中BPA的积累量及肝、肾组织中丙二醛(MDA)含量和过氧化氢酶(CAT)活性。【结果】1)3.6和7.2mg·L-1BPA暴露处理组的肝、肾组织中MDA含量比两个对照组的肝、肾组织中MDA含量更高,且与后两者的差异均具有统计学意义(p0.05)。2)3.6和7.2mg·L-1BPA暴露处理组的肝组织中CAT活性以及1.8,3.6和7.2mg·L-1BPA暴露处理组的肾组织中CAT活性均低于两个对照组的肝、肾组织中CAT活性,与后两者的差异均具有统计学意义(p0.05)。3)1.8和3.6mg·L-1 BPA暴露处理组的静止代谢率高于两个对照组的静止代谢率,7.2mg·L-1 BPA暴露处理组的静止代谢率低于两个对照组的静止代谢率,上述差异均具有统计学意义(p0.05)。4)实验鱼肝组织中BPA积累量随水体中BPA暴露质量浓度的升高而升高,表现出明显的线性正相关关系。【结论】水体BPA暴露质量浓度与鲤肝组织中BPA积累量之间具有剂量-效应关系。鲤肝、肾组织中MDA含量和CAT活性对水体BPA暴露相对较敏感,肝组织比肾组织更敏感。在一定质量浓度范围内,水体BPA暴露导致鲤静止代谢率升高以满足鲤在组织损伤修复和毒物净化方面额外的能量消耗,但较高质量浓度的BPA暴露可能对鱼体组织器官造成损伤并引起静止代谢率下降。     

籼米黄淀粉中蛋白质提取工艺的优化

采用单因素试验和响应面分析法优化了耐高温α-淀粉酶提取籼米黄淀粉中蛋白质的主要工艺参数。试验结果表明,当黄淀粉浆浓度为10%、酶量为4 500U/mL、酶解温度为95.00℃、酶解时间为4.60h、CaCl2添加量为0.086g/mL时,籼米黄淀粉酶解产物中的蛋白质含量最高达80.52%,蛋白质提取率可达到95.42%。     

水体双酚A暴露对鲤肝肾的氧化胁迫及静止代谢率的影响

【目的】研究水体中双酚 A(BPA)暴露对鲤(Cyprinus carpio)肝、肾组织的氧化胁迫及静止代谢率的影响。【方法】设置1个水体中BPA暴露质量浓度为0的空白对照组、1个水体中 BPA 暴露质量浓度为0但乙醇质量分数为0.03%的乙醇对照组和水体中BPA暴露质量浓度分别为0.5,0.9,1.8,3.6,7.2mg·L-1等5个处理组,处理30d后测定各组实验鱼的静止代谢率,肝组织中 BPA 的积累量及肝、肾组织中丙二醛(MDA)含量和过氧化氢酶(CAT)活性。【结果】1)3.6和7.2mg·L-1BPA暴露处理组的肝、肾组织中 MDA 含量比两个对照组的肝、肾组织中 MDA 含量更高,且与后两者的差异均具有统计学意义(p<0.05)。2)3.6和7.2mg·L-1BPA暴露处理组的肝组织中CAT活性以及1.8,3.6和7.2mg·L-1BPA暴露处理组的肾组织中CAT活性均低于两个对照组的肝、肾组织中 CAT 活性,与后两者的差异均具有统计学意义(p<0.05)。3)1.8 和3.6mg·L-1BPA暴露处理组的静止代谢率高于两个对照组的静止代谢率,7.2 mg·L-1BPA暴露处理组的静止代谢率低于两个对照组的静止代谢率,上述差异均具有统计学意义 (p<0.05)。4)实验鱼肝组织中BPA积累量随水体中BPA暴露质量浓度的升高而升高,表现出明显的线性正相关关系。【结论】水体 BPA 暴露质量浓度与鲤肝组织中BPA积累量之间具有剂量-效应关系。鲤肝、肾组织中 MDA 含量和 CAT 活性对水体 BPA 暴露相对较敏感,肝组织比肾组织更敏感。在一定质量浓度范围内,水体 BPA 暴露导致鲤静止代谢率升高以满足鲤在组织损伤修复和毒物净化方面额外的能量消耗,但较高质量浓度的 BPA 暴露可能对鱼体组织器官造成损伤并引起静止代谢率下降。
     

污水处理系统中噬菌体的浓缩分离和宏合格基因组DNA的提取

以城市污水活性污泥为材料,经分级粗滤、超滤、等密度梯度离心等方法获得高纯度噬菌体悬液,常规SDS方法提取噬菌体DNA.荧光显微镜观察和计数表明浓缩液中噬菌体的纯度和丰度都显著提高;利用透射电镜对浓缩液进行观察,噬菌体的形态呈杆状、线状等多样;基因组提取结果显示,得到的DNA样品纯度高,大小介于20~25kb之间,电泳条带清晰,整个泳道没有弥散现象;利用细菌通用引物对提取的噬菌体DNA进行16SrDNA扩增阴性,说明所得到的噬菌体纯度较高,没有细菌污染.通过实验获得一种高效快捷的从污水处理系统中纯化浓缩噬菌体并进一步获得噬菌体宏基因组DNA的方法,同时为研究环境噬菌体生态分布、多样性组成奠定基础.     

Nf-κb在遗传性糖尿病长爪沙鼠多种组织中的表达状况

目的 探讨糖尿病长爪沙鼠6种组织中Nf-κb基因mRNA和蛋白的表达水平,以期探索长爪沙鼠糖尿病模型中Nf-κb的作用和靶器官。方法 选取糖尿病长爪沙鼠和正常血糖沙鼠各6只,分别采集动物的骨骼肌、肝脏、脂肪、肾脏、心脏和脑组织,用Q-PCR和Western blotting检测Nf-κb在各组织中mRNA和蛋白表达水平。结果 与对照动物相比,在糖尿病长爪沙鼠的肌肉、肾脏和脑组织中,Nf-κb基因的mRNA水平表达有升高趋势,脂肪中则显著降低,肝脏和心脏中仅有降低趋势。检测蛋白水平发现除肝脏外,其他组织的结果均与mRNA水平一致。结论 糖尿病长爪沙鼠脂肪组织是Nf-κb作用的靶器官。     

从动物血液中提取基因组DNA方法的比较研究

从血液中提取基因组DNA的传统方法是先得到淋巴细胞,再用蛋白酶K、SDS消化,然后用酚、氯仿抽提,乙醇沉淀．CTAB法提取基因组DNA多应用于植物和微生物,从全血中提取基因组DNA报道甚少．采用改良的CTAB法从全血中提取基因组DNA,并以传统方法和TAKARA Blood Genome DNA Extraction Kit作对照．结果表明：CTAB法可以得到大量的、较完整的基因组DNA,并且纯度达到1．8～2．0,可以满足PCR扩增和限制酶切等实验的要求．     

大草履虫总DNA的提取方法比较

快速而稳定地提取大草履虫的基因组DNA是进行后续分子生物学研究的前提.文章通过比较传统SDS法、CTABⅠ法和CTABⅡ法等提取大草履虫DNA的效果,进一步优化提取方法,获得快速稳定地提取大草履虫基因组DNA的方法.结果表明:用CTAB I法提取的DNA浓度低,杂质较多;CTABII提取的DNA电泳时检测不出条带;而SDS法提取的DNA在电泳时带型较整齐,无降解,且DNA的得率和纯度较高,但仍有蛋白质污染.针对蛋白质的去除,用SDS-蛋白酶K法和SDS-NaAc法来提取DNA,经过试验发现这2种方法都能够很好地去除蛋白质,所获DNA样品的纯度和得率都能用于进一步分子试验,而SDS-NaAc法更经济适用.     

cn3b在遗传性糖尿病长爪沙鼠多种组织中的表达情况

目的 比较正常血糖长爪沙鼠和自发遗传性糖尿病长爪沙鼠肝脏、肾脏、骨骼肌和脑组织中钠通道β亚基(sodium channel beta subunit 3 gene,Scn3b)的表达差异。方法 选取正常血糖长爪沙鼠和自发遗传性糖尿病长爪沙鼠各6只,分别采集动物的肝脏、肾脏、骨骼肌和脑组织,利用Real-time PCR和Western blotting检测Scn3b在各组织中的mRNA和蛋白表达水平。结果 与正常血糖动物相比,在糖尿病长爪沙鼠肝脏和脑组织中,Scn3b mRNA和蛋白水平表达均下降,其中在肝脏具显著性差异。结论 Scn3b在糖尿病长爪沙鼠肝脏和脑组织中表达减少,提示在肝脏和脑组织中Scn3b的异常表达可能参与长爪沙鼠糖尿病的发生。     

泡桐叶片DNA提取

以兰考泡桐组织培养苗叶片为材料,分别采用CTAB-Ⅰ、CTAB-Ⅱ、SDS-Ⅰ、SDS-Ⅱ四种方法提取叶片DNA,并对不同提取结果进行紫外分光光度、电泳、酶切、RAPD等方法的鉴定。结果表明,用四种方法提取的泡桐叶片DNA得率约为3.5-5.2μg/10mg,A260/A280约为1.7-1.8,A260/A230在2.0以上,分子量在23Kb以上,能够被EcoRⅠ、HindⅢ酶切,能够进行RAPD分析。综合考虑得率、纯度、质量等因素,以SDS-Ⅰ法为最佳方案。     

Rapid Cloning and Expression of Glutaryl-7-Aminocephalosporanic Acid Acylase Genes from Soil Samples

A polymerase chain reaction （PCR）-based strategy was developed to rapidly obtain the gene encoding for an industrially important enzyme, glutaryl-7-aminocephalosporanic acid （GL-7-ACA） acylase.Different soil samples were cultured with a Pseudomonas selective medium to enrich specific microorganisms, and then the genomic DNA was extracted to serve as PCR templates. PCR primers for GL-7-ACA acylase gene amplification were designed on the basis of bioinformatics searches and analyses.The method was used to successfully amplify three GL-7-ACA acylase genes from different soil samples.The GL-7-ACA acylase genes were then cloned and overexpressed in Escherichia coil with a relatively high level of 266 unit · L^-1.     

绿色荧光蛋白基因在大黄鱼体内的表达

以绿色荧光蛋白基因为报告基因，以pIRESnco为载体质粒，制备含有报告基因的质粒，以肌肉注射的方式导入大黄鱼体内，每隔一周用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白基因在鱼体不同部位的表达情况。结果表明，绿色荧光蛋白基因可以大黄鱼体内得到表达，表达时间高达28d以上。绿色荧光蛋白基因不仅可以在肌肉注射部都组织细胞得到表达，而且在其它部位的肌肉、肝脏、肾脏和心脏等组织中也有表达，但表达水平低于肌肉注射部位组织。     

菊叶香藜（Chenopodium foetidum）基因组DNA的提取方法研究

文章通过传统CTAB法、改良CTAB法、SDS法、高盐低pH法和试剂盒法等5种方法,对菊叶香藜进行基因组DNA提取,旨在筛选一种菊叶香藜基因组DNA的适宜提取方法。同时用紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳对5种方法所提DNA进行检测,并对改良CTAB法提取的DNA进行RAPD-PCR扩增检测。结果表明：改良CTAB法提取速度较快,便于操作,提取的DNA质量较好,进行的RAPD-PCR扩增条带清晰,能满足分子标记的要求。因此,改良CTAB法为菊叶香藜基因组DNA可靠并合适的提取方法。