雏番鸭细小病毒疫苗在雏番鸭、雏鸡体内诱导的免疫动态研究

用雏番鸭细小病毒(Muscovy Ducklling Parvovirus MPV)灭活疫苗对不同日龄的雏番鸭作首免,以及用MPV不同剂型的疫苗对同样日龄的雏番鸭作免疫试验,在免疫前及免疫后多次采血,用酸性o—醋酸菜酯酶(ANAE)反应标记淋巴细胞的细胞化学方法及琼脂扩散试验等分别测定其外周血液中T.B淋巴细胞百分比值和MPV沉淀抗体滴度,首次探索MPv在雏番鸭体内诱导的免疫动态,为本病的免疫防制提供了可行的免疫程序和理论依据.试验同时设立雏鸡免疫对照,探索了非易感动物对MPV免疫的应答差异和应用鸡作免疫载体制备MPV高免血清的可行性.     

鸡传染性鼻炎三价灭活疫苗油乳佐剂的筛选及免疫效果评价

为了对比筛选出鸡传染性鼻炎(IC)三价灭活疫苗的最适油乳佐剂,使用三种不同的油乳佐剂制备了3批鸡传染性鼻炎(A型+B型+C型)三价灭活疫苗,并对疫苗的物理性状、安全性及免疫效力进行检测.结果 显示,三种佐剂制备的疫苗均为稳定的油包水乳剂,而佐剂3组的黏度(29.3 Pa.s)显著低于其余两种佐剂组(184.2 Pa.s...     

CpG ODN对初生仔猪外周血CD4+和CD8+T淋巴细胞的影响

以猪伪狂犬病毒为模式病毒,研究了CpG ODN对仔猪外周血中CD4^＋,CD8^＋T淋巴细胞的影响．实验结果表明：疫苗组初生仔猪血液中CD4^＋／CD8^＋T淋巴细胞比例随年龄的增加逐渐降低,而CpG ODN能有效抑制其降低（P〈0．05）;CpG ODN的使用也可以阻止伪狂犬病毒导致的血液中CD4^＋T淋巴细胞比例的降低;联合免疫CpG ODN和猪伪狂犬病毒活疫苗,可以诱导初生仔猪血清中猪伪狂犬病毒特异性抗体迅速产生并达到较高的水平（P〈0．05）;这表明CpG ODN能显著增强动物的免疫应答能力．     

绵羊溶血性曼氏杆菌灭活疫苗的制备

用实验室分离获得的溶血性曼氏杆菌菌株制备甲醛灭活疫苗,进行不同佐剂(AI(OH)3、蜂胶)菌苗的安全性及免疫保护试验研究.结果表明:所制备疫苗的各项指标均符合要求,安全可靠.     

纳米铝佐剂诱导鸡提前产生抗AIVH9体液免疫应答

接种灭活油佐剂疫苗是目前国内防控禽流感主要的措施,为有效防控禽流感的流行发挥了重要的作用,但灭活苗首次接种后需要较长时间抗体才能达到有效保护水平.纳米颗粒具有独特的生物学特性,作为疫苗佐剂能引起机体强烈的免疫应答.本研究用纳米铝颗粒作为AIV H9的佐剂,结果显示,小鸡产生有效免疫保护抗体时间较常规油佐剂疫苗提前4天且无副反应,但抗体峰值和持续时间均低于油佐剂疫苗.氢氧化铝纳米颗粒作为佐剂可能对禽流感等重大传染病的紧急预防接种具有潜在的应用价值.     

抗病毒中药复方制剂对雏鸡免疫功能影响的研究

探讨抗病毒中药对雏鸡免疫功能的影响,为药理作用和临床合理用药提供科学依据.采用水萃取法制备抗病毒中药复方浸膏制剂,将实验动物随机分为阴性对照组、阳性对照组、低剂量中药组、中剂量中药组和高剂量中药组,在免疫接种NDV-Lasota株灭活疫苗的基础之上,以NDV-Ab(鸡新城疫病毒抗体)、CD4+/CD8+T淋巴细胞比值为检测指标,研究中药复方制剂对雏鸡免疫功能的影响.实验结果表明:高剂量中药组在连续给药5d后,能够促进实验雏鸡在疫苗接种后7-14d的NDV-Ab水平急剧上升,14d达到最高(27.8073ng/L),极显著高于阳性对照组的17.8183ng/L(P0.01);3个剂量中药组均能提高实验雏鸡在疫苗接种后7-14d外周血T淋巴细胞CD4+/CD8+比值的作用,14d达到最高,高于阳性对照组(P0.05).结论:抗病毒中药复方制剂具有诱导实验雏鸡体液免疫应答的作用,诱导作用可能与中药剂量及机体的免疫状态有关.     

微囊化转CEA基因细胞诱导小鼠抗肿瘤免疫的研究

为发展癌胚抗原(CEA)阳性肿瘤的治疗性疫苗,应用基因工程和静电液滴技术制备出微囊化转CEA基因细胞,经腹腔免疫实验小鼠,再分别应用CEA基因转染的H 2 2 细胞小鼠皮下及腹腔接种,观察微囊化转CEA基因细胞对小鼠肿瘤的抑制作用及其诱导小鼠细胞毒性T淋巴细胞(CTL)特异性杀伤CEA 阳性肿瘤细胞的能力,并用流式细胞术检测了小鼠肿瘤细胞的生长周期和各实验组脾脏T淋巴细胞亚群的分布情况. 结果显示,微囊化转CEA 基因细胞可以有效抑制CEA阳性肿瘤的生长,诱导小鼠CTL对CEA阳性肿瘤细胞的特异性杀伤 ,并能改善荷瘤小鼠的免疫功能,延长腹水瘤小鼠的生存期.     

雏鸡感染堆型艾美耳球虫早熟株外周血T淋巴细胞的动态变化

8日龄雏鸡(免疫组)每只接种3×103个堆型艾美尔球虫(Eimeria.acervulina)早熟株孢子化卵囊,在第16日龄免疫组和不免疫攻毒组每只攻毒堆型艾美尔球虫强毒株孢子代卵囊5×104个,用а 醋酸萘酯染色法计数T淋巴细胞数量,得T淋巴细胞所占淋巴细胞的百分率。t检验结果表明,免疫攻毒组T淋巴细胞的百分率与不免疫攻毒组和空白对照组的T淋巴细胞的百分率差异极显著,显示该早熟株具有较好的免疫保护效果。     

血淮淋巴细胞计数与小儿先天性心脏病并发症发生的关系探讨

为探讨小儿先天性心脏病并发症的发生与血液淋巴细胞的相互关系 ,笔者将 39例住院的先天性心脏病患儿分为 2组进行比较研究 ,血液淋巴细胞计数百分率≥ 2 0 .3%者为A组 ,≤2 0 .2 %者为B组 .结果表明 :B组与A组比较 ,前者的心力衰竭、心律失常发生率显著升高 (P<0 0 5 ) .提示 :先天性心脏病患儿的血液淋巴细胞降低易并发心力衰竭、心律失常 .     

藏猪白细胞介素-12基因表达对猪圆环病毒2 疫苗的免疫增强效应

为研究IL-12基因在猪体内表达对PCV2疫苗免疫应答的调控作用,本研究将藏猪IL-12基因克隆至VR1020载体,壳聚糖包裹重组质粒制备成壳聚糖纳米颗粒(VRIL-12-CNP)并与PCV2疫苗共同接种21日龄断奶仔猪.接种后第0d、7d、14d和28d采集猪前腔静脉血进行血细胞分析、PCV2抗体检测和相关免疫基因表达量检测,并记录体重.结果显示:接种VRIL-12-CNP和PCV2疫苗的实验组猪的CD3~+、CD4~+、CD8~+T细胞和PCV2抗体显著增长(P0.05),TLR2/7、IL-12/4/6/15、STAT1/3和Bcl-2基因的表达量显著高于对照组(P0.05);试验期间实验组体重净增长也明显高于对照组(P0.05).结果表明:VRIL12-CNP能增强PCV2疫苗的先天性和获得性体液、细胞免疫应答,是安全、有效的PCV2疫苗佐剂.     

超抗原SEA体外对Jurkat T淋巴细胞增殖活性与表面超微结构的影响

目的:通过显微形态观察和功能检测分析超抗原(SEA)对Jurkat T淋巴细胞的影响.方法:应用CCK-8法,原子力显微镜(AFM)体外检测Jurkat T淋巴细胞增殖活性、及其细胞膜超微结构的改变.结果:与对照组比较,不同浓度的SEA随着作用时间的增加,细胞膜超微结构与Ra值明显发生改变.Jurkat T淋巴细胞经过质量浓度为0.1-100 mg/L SEA,作用48 h期间,Jurkat T细胞的表面超微结构(平均粗糙度,Ra)和增殖活性(A值)变化非常明显.其中,质量浓度10 mg/L SEA作用24 h,Jurkat T淋巴细胞表面结构变化最明显,而细胞增殖活性在48 h达最强.结论:SEA作为超抗原作用于Jurkat T淋巴细胞后,Jurkat T淋巴细胞的活化表现出表面形态结构改变先于代谢水平的改变,较后者更灵敏.     

淫羊藿素、脱水淫羊藿素对T淋巴细胞的比较研究

通过分离制备小鼠淋巴细胞;CCK-8法检测脱水淫羊藿素(AHI)、淫羊藿素(ICA)对淋巴细胞的毒性;流式细胞术(FCM)结合双色免疫荧光染色技术检测AHI、ICA对con A刺激T淋巴细胞早期活化标志CD69,中期活化标志CD25的表达情况;利用活性染料CFSE,结合流式细胞术分析AHI、ICA对T淋巴细胞增殖的影响;流式细胞术分析AHI、ICA对T淋巴细胞周期的影响;流式细胞术实时分析AHI、ICA对T淋巴细胞钙离子内流的影响;使用流式蛋白定量检测技术(CBA)检测AHI、ICA对T淋巴细胞分泌细胞因子的影响.结果显示AHI与ICA对活化的小鼠T淋巴细胞具有明显的免疫抑制作用,特别是ICA,能明显抑制经con A刺激的T淋巴细胞早中期活化、增殖、钙离子内流,并阻滞细胞周期在G0/G1期,以及分泌IL-6、IL-10、IFN-γ、TNF和IL-12p70细胞因子;ICA比AHI对活化的小鼠T淋巴细胞具有更明显的免疫抑制作用.     

有氧和力竭游泳运动对DNA疫苗免疫效果的影响及机制研究

将48只雌性C57BL/6小鼠随机分成对照组(16只),有氧游泳运动组(16只)和力竭游泳运动组(16只).在小鼠分别进行6周有氧和力竭游泳运动后,肌肉注射DNA疫苗3次,每次间隔14d.末次免疫后14d,处死小鼠,收集血液和脾细胞,检测抗原特异性的体液和细胞免疫反应.为了进一步研究不同强度有氧运动影响疫苗的免疫效果的作用机理,小鼠运动6周后,处死小鼠,收集脾细胞分析CD4⁺CD25+CD25⁺调节性T细胞(Treg)的数量及其抑制功能和IL-2的变化.结果显示:和对照组比,有氧运动增强了抗原特异性的细胞免疫反应和细胞毒T淋巴细胞反应(CTL);与之相反,力竭运动抑制抗原特异性的细胞免疫反应和CTL反应.但两种不同强度的游泳运动都不影响血清中抗体的产生.机理研究发现,力竭运动增加Treg细胞的数量及抑制功能,而有氧运动并不影响Treg的数量和功能,但增加脾细胞IL-2的表达.以上结果表明:1)有氧和力竭运动不影响DNA疫苗的体液免疫效果;2)有氧运动可能通过增加脾细胞中IL-2的产生而增强DNA疫苗的细胞免疫效果;3)力竭游泳运动可能通过改变Treg的数量及其抑制功能而削弱DNA疫苗的细胞免疫效果.     

噬菌体展示外源多肽的免疫原性研究

利用噬菌体展示技术将丝状噬菌体fd基因8克隆入pKK223-3质粒中，将白色念珠菌特异表位基因插入到修饰后的质粒载体中，并制备了杂合噬菌体，利用纯化的该表位抗原PA免疫小鼠，结果表明该噬菌体-表位抗原PA在有无佐剂存在的情况下均产生抗体，用ELISA方法采用双波长（450/630nm)检测抗体，其在有无佐剂存在的情况下光密度值无明显差别，免疫后小鼠脾淋巴细胞在有无佐剂的情况下均产生明显增殖，未见明显的毒副作用，具有良好的安全性，该方法产生的抗体与传统的合成多肽相比具有方法简便、低价高效等特点，它将成为生产高效低价疫苗的有效途径，该噬菌体-表位抗原PA为真菌疫苗的研制打下基础。     

中药制剂对热应激下雏鸡T淋巴细胞转化率和免疫器官指数的影响

为了探讨中药制剂在热应激条件下对雏鸡T淋巴细胞转化率和免疫器官指数的影响,分析其对雏鸡免疫功能的调节作用,选择120只1周龄的海兰褐商品代蛋用雏鸡为研究对象,随机分为4个组,每组30只。其中,1组为对照组,饲喂基础日粮;2,3,4组饲喂添加了中药制剂的基础日粮,其中中药制剂的质量分数分别为0．005,0．010,0．015。于4周龄时采用MTT法测定其外周血T淋巴细胞转化率和法氏囊、脾脏和胸腺的器官指数。结果表明,2,3,4组鸡的T淋巴细胞转化率均明显高于对照组的（P〈0．01）,各实验组间没有明显差异,但有随添加量增加而升高的趋势。2,3,4组鸡的免疫器官指数均高于对照组的,其中,第3组鸡的脾脏器官指数显著高于对照组（P〈0．01）。因此,日粮中添加一定剂量的“热消”对雏鸡的免疫功能有一定的增强作用,能增强雏鸡的抗热应激能力。     

胶质瘤Hsp70-肽复合物激活T淋巴细胞抗肿瘤研究

目的 研究胶质瘤Hsp70-肽复合物激活的T淋巴细胞抗肿瘤效应、探讨其用于临床治疗的可行性.方法 取胶质瘤手术标本,经组织块法培养、建株胶质瘤细胞,冻融法获取胶质瘤细胞抗原,抗原与Hsp70体外构建Hsp70-肽复合物并激活T淋巴细胞,制备特异性CTL,MTT法检测对胶质瘤细胞的体外杀伤作用.结果 Hsp70-肽复合物激活CTL对胶质瘤细胞的杀伤活性明显高于未经胶质瘤抗原激活的CTL对胶质瘤细胞的杀伤作用( P ＜ 0.01).结论 肿瘤组织中或细胞中提取的Hsp70-肽复合物作用于T淋巴细胞,能诱导CTL在体外对胶质瘤细胞能产生高效而特异杀伤作用,为临床制备肿瘤疫苗奠定理论基础.     

抗幽门螺杆菌蛋黄免疫球蛋白的制备分离

该文研究了幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,简称HP)疫苗对母鸡诱导产生特异性抗体(Immunoglobulinofyolk,简称IgY)以及IgY的制备和检定方法.采用融冻法和超声波法对HP破碎,破碎后的细胞用福氏完全佐剂和福氏不完全佐剂制成疫苗对生蛋母鸡进行免疫,通过ELISA间接法检测鸡蛋的免疫应答,IgY用盐析、超滤和葡聚糖凝胶(SephadexG 200)层析等方法纯化,未纯化和纯化的IgY进行SDS PAGE电泳分析.IgY与HP的凝集反应均为阳性,表明IgY为HP的特异性抗体,用ELISA测定效价达1.6×103,比未免疫的蛋黄IgY高约160倍,根据SDS PAGE图谱分析抗HP的特异性IgY分子量在180kD左右.     

大强度运动对青年男子淋巴细胞凋亡的影响

设计训练组(T组,14名男性田径运动员)和对照组(C组,14名男性普通大学生)均完成一次大强度运动,并于运动前、运动后即刻以及运动后12h取血液淋巴细胞测定淋巴细胞计数、凋亡率、羟自由基(·OH)和8-氧鸟嘌呤(8-oxodG)含量,对比运动员和普通大学生在一次大强度运动前后淋巴细胞DNA损伤的变化,探讨长期运动训练对淋巴细胞凋亡的影响及其可能机制.结果显示,运动后即刻:组内前后比较,两组所有指标均显著性升高(P<0.05或P<0.01);组间比较,T组指标变化的幅度均低于C组(P<0.01).运动后12h:组内前后比较,C组淋巴细胞凋亡率和8-oxodG含量升高(P<0.01),淋巴细胞计数降低(P<0.01),·OH含量恢复(P>0.05),T组8-oxodG含量升高(P<0.05),其他指标均恢复至运动前水平;组间比较,T组8-oxodG含量升高幅度明显低于C组(P<0.01).以上结果表明:一次大强度运动诱导淋巴细胞自由基产生增多并造成DNA氧化损伤,细胞凋亡增加;长期运动训练则可降低淋巴细胞DNA氧化损伤和细胞凋亡并加速凋亡恢复,防止运动应激后淋巴细胞数量的减少.     

放线菌酮体外强烈抑制小鼠活化T淋巴细胞CD69表达

目的 :利用淋巴细胞的早期活化标记物CD6 9的表达 ,探讨放线菌酮 (CHX)对T淋巴细胞体外活化的影响 ,以进一步揭示CHX对免疫系统的影响 .方法 :分离小鼠淋巴结细胞 ,与CHX预孵 1h ,加入多克隆刺激剂继续培养 ,总计培养 2 4h后收获细胞 ,进行双色免疫荧光标记 ,以流式细胞术对T细胞的CD6 9分子表达情况进行分析 .结果 :在CHX(终浓度 10 μmol/L)作用下 ,ConA和PDB活化的T细胞CD6 9表达百分率依次为 12 33%± 4 75 %、13 0 7%± 11 0 5 %,与对照组比较均有显著差异 (P <0 0 1) .结论 :CHX(10 μmol/L)对ConA、PDB活化的T淋巴细胞均显示了强烈的抑制效应 .     

ＲAG2 /IL2ＲG 双基因缺陷小鼠杂交群体的建立

摘要: 目的建立ＲAG2 /IL2ＲG 双基因缺陷的CＲG 小鼠杂交群体。方法将ＲAG2 基因缺陷小鼠与IL2ＲG 基因缺陷小鼠分别进行繁殖,选取ＲAG2 基因缺陷雄鼠ＲAG2( － / － ) 与IL2ＲG 基因缺陷雌鼠IL2ＲG( － / － ) 进行配对,培育杂交后代,通过PCＲ 扩增基因组ＲAG2 和IL2ＲG 基因进行鉴定; 应用流式细胞仪分析检测ＲAG2 /IL2ＲG 双基因缺陷小鼠外周血T 细胞( CD3 + ) 、B 细胞( CD19 + ) 和NK 细胞( CD49b + ) 含量; 并测定8—12 周龄ＲAG2 /IL2ＲG 双基因缺陷小鼠血液生理生化及主要脏器重量指标。结果成功繁育ＲAG2 基因缺陷小鼠和IL2ＲG 基因缺陷小鼠,筛选获得稳定的ＲAG2 /IL2ＲG 双基因缺陷小鼠并成功保种和扩群; 该双基因缺陷小鼠外周血淋巴细胞中T 细胞、B 细胞,NK 细胞比例显著降低( P ＜ 0. 05) ; 与相同周龄野生型C57BL/6 相比9 项血清生化指标无明显变化( P ＞ 0. 05) ; 18 项血液生理指标中红细胞( ＲBC) 和血红蛋白( HGB) 含量显著降低( P ＜ 0. 05) ; 白细胞( WBC) 、淋巴细胞数( LYMPH) 、淋巴细胞比率( LYM) 、单核细胞、中性细胞数( NEUT) 降低极显著( P ＜ 0. 01) ; 脾脏重量显著均低于野生型C57BL/6 小鼠( P ＜ 0. 05) ; 人肝肿瘤传代细胞移植于ＲAG2 /IL2ＲG 双基因缺陷小鼠后,肿瘤移植成功率和生长速率均明显高于亲本单基因缺陷小鼠( P ＜ 0. 05) ,成功获得了临床肝癌病人肿瘤组织的异种移植模型。结论 成功构建筛选出ＲAG2 /IL2ＲG 双基因缺陷小鼠杂交群体。