某院金黄色葡萄球菌的临床分布及耐药性分析

为研究金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)在医院的临床分布特征及耐药情况,该文以四川某医院2018年收集的539株S.aureus为研究对象,采用微量肉汤稀释法测定其对15种抗生素的最低抑菌浓度(MIC),并用统计学方法进行分析。结果显示,539株S.aureus中有142株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA);MRSA主要分布于皮肤性病科(30株,21.1%);S.aureus对青霉素、红霉素、克林霉素耐药率较高,分别为96.10%、63.50%、60.30%,但对利奈唑胺、万古霉素等敏感;MRSA菌株对苯唑西林、青霉素、红霉素等的耐药率均明显高于甲氧西林敏感型金黄色葡萄球菌(Methicillin-sensitive Staphylococcus aureus,MSSA)菌株;在预防和治疗S.aureus感染时,需根据药敏实验合理选择使用抗菌药物。     

Nuc和mecA基因在金黄色葡萄球菌及其甲氧西林耐药性检测中的初步应用

目的为获得金黄色葡萄球菌对甲氧西林的耐药信息,评估通过PCR扩增nuc基因、mecA基因检测金黄色葡萄球菌及其甲氧西林耐药性的可行性。方法收集获得63株临床分离鉴定的金黄色葡萄球菌,采用传统药敏检测方法进行菌株药敏测试;再用PCR方法检测菌株是否携带nuc基因和mecA基因,以传统药敏检测结果为参照,评估用PCR扩增技术检测金黄色葡萄球菌及其甲氧西林耐药性的可行性。结果 1.样本菌株中有24株为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphyococcus aureus,MRSA),39株为甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌(Methicillin-sensitive Staphyococcus aureus,MSSA)。来自重症医学科的分离株中MRSA数量较多。2.样本菌株nuc基因携带率为85.7%,其中nuc基因在MRSA菌株中的携带率为87.50%,在MSSA菌株中携带率为84.62%;3.样本菌株mecA基因的携带率为19.05%,其中MRSA菌株的mecA基因携带率为50.0%,MSSA中均不携带mecA基因。来自重症医学科的MRSA中同时携带mecA基因和nuc基因的比例为77.78%。结论用PCR技术检测nuc基因、mecA基因来快速鉴定金黄色葡萄球菌及其甲氧西林耐药性可能存在一定比例的误诊结果。     

21日龄鸡胚中金黄色葡萄球菌的PCR检测

为检测某鸡场21日龄鸡胚金黄色葡萄球菌感染情况, 针对其特有的耐热核酸酶基因(Nuc)设计并合成1对引物进行PCR扩增, 建立特异性检测金黄色葡萄球菌的PCR方法. 对18个21日龄鸡胚培养、分离, 获得18株疑似金黄色葡萄球菌菌落. 用建立的PCR方法对18份疑似样品进行扩增获得4份金黄色葡萄球菌的阳性扩增, 证实该鸡群21日龄鸡胚中金黄色葡萄球菌的感染率为22%(4/18). 本文中基于Nuc基因建立的PCR检测方法是检测鸡胚中金黄色葡萄球菌快速、特异的分子生物学方法.     

有柄石韦药膏制备及对大鼠伤口愈合作用的研究

利用有柄石韦(Pyrrosia petiolosa,P.petiolosa)试制药膏,在动物水平研究其抗菌及促伤口愈合的作用.将有柄石韦制备成药膏,构建大鼠皮肤切除创伤模型并随机分为单纯创伤组和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)感染组.各组分别经自然恢复、P.petiolosa药膏、京万红软膏处理后检测大鼠体重与进食情况、创面愈合情况、创面组织病理情况及血清炎性因子的表达情况.结果显示,不同处理组大鼠体重与进食量无显著变化;创面愈合及组织病理学分析显示P.petiolosa药膏可促进单纯创伤组及S.aureus感染组伤口愈合;ELISA结果显示P.petiolosa药膏在致创前期可明显降低炎性反应.结果表明,这款自主研发的以P.petiolosa为主要原料的中药药膏具有很好的拮抗S.aureus和促进伤口愈合的效果.     

奶牛金黄色葡萄球菌乳腺炎小鼠模型的建立

目的利用从临床乳腺炎奶牛乳样中分离纯化的金黄色葡萄球菌（S.aureus）感染小鼠乳腺,建立奶牛金黄色葡萄球菌乳腺炎小鼠模型。方法将产后8～10 d的ICR远交系母鼠随机分为3组,包括无菌生理盐水对照组,低剂量攻菌组（含金黄色葡萄球菌2×102CFU）和高剂量攻菌组（含金黄色葡萄球菌5×106CFU）。以小鼠第4对乳腺为攻菌部位,用非损伤方法经乳头管注入生理盐水或金黄色葡萄球菌。攻菌24h后采集乳汁进行白细胞计数;从眼球采血,进行血常规检测和流式细胞计数;之后处死母鼠,取乳腺组织进行匀浆细菌计数,并做乳腺组织切片。结果高剂量攻菌组不论是体温、组织学观察,还是乳汁白细胞计数、乳腺匀浆细菌计数、血常规指标和流式细胞计数,都和对照组有显著或极显著差异（P〈0.05）;而低剂量攻菌组与对照组相比,除血液CD4＋/CD8＋比值差异显著外（P〈0.05）,其余指标差异均不显著。结论金黄色葡萄球菌浓度为5×106CFU、攻菌时间24 h时,成功建立了远交系小鼠金黄色葡萄球菌乳腺炎模型,而2×102CFU细菌浓度则不适于远交系小鼠乳腺炎模型的建立。     

用生物素标记核酸探针检测鼠金黄色葡萄球菌的研究

利用聚合酶链反应技术从金黄色葡萄球菌基因组DNA中扩增出 6 78bp耐热核酸酶nuc基因特异性片段 ,经生物素标记后作为核酸斑点杂交试验的探针 ,对实验动物的金黄色葡萄球菌及其临床样品进行了检测。结果显示 ,标记探针与金黄色葡萄球菌DNA呈杂交阳性 ,而与链球菌、大肠埃希氏菌和巴氏杆菌DNA呈杂交阴性 ,斑点杂交的检测灵敏度为 1pg基因组DNA。用斑点杂交试验和PCR对 2 4 0份临床样品进行了检测 ,检出率为 2 9% (7 2 4 0 ) ,符合率为 10 0 %。这些试验结果表明 ,研究制备的核酸探针及建立的斑点杂交试验具有较高的特异性和敏感性 ,可用于实验动物金黄色葡萄球菌的快速检测     

从石蜡包埋的皮肤组织中提取核酸的两种脱蜡方法比较

探讨从石蜡组织中提取核酸的简便、实用方法,比较两种脱蜡方法对DNA质量的影响.取收集的20例包埋好的银屑病皮损组织,分别用二甲苯和TES溶液脱蜡、酚-氯仿提取,然后检测DNA的浓度及纯度,并用PCR扩增方法检测哪种脱蜡方法对提取DNA更有优势.结果表明,用TES溶液脱蜡提取DNA的D260/D280=1.6～1.8的比例为60%,而二甲苯脱蜡的比例为35%.从实用、快速和经济的角度综合考虑,TES溶液脱蜡、酚-氯仿提取是值得推荐的石蜡组织DNA提取方法.     

蝇蛆抗菌肽对小鼠金黄色葡萄球菌性乳腺炎治疗效果的研究

目的研究蝇蛆抗菌肽对小鼠金黄色葡萄球菌性乳腺炎的治疗效果。方法本试验采用金黄色葡萄球菌诱导蝇蛆,从蝇蛆中提取抗菌肽并用于治疗金黄色葡萄球菌性乳腺炎。采用分娩后6～8 d的BALB/C雌鼠120只,随机分组:空白对照组、生理盐水治疗组、抗生素治疗组和抗菌肽治疗组,每组30只。空白对照组不做处理,另外3组用金黄色葡萄球菌感染小鼠建立小鼠乳腺炎模型,建模成功后,各试验组使用相对应的药物连续治疗7 d,并于第3、5、7天每组分别断颈处死10只小鼠,观察小鼠乳腺病理组织及HE染色切片,测定小鼠乳腺组织中TNF-α含量和金黄色葡萄球菌数量。结果经过金黄色葡萄球菌诱导产生的抗菌肽浓度显著高于未诱导组(P0.05)、对金黄色葡萄球菌具有较强的抑菌活性、对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为1.5 mg/L,蝇蛆抗菌肽可显著抑制小鼠乳腺组织中金黄色葡萄球菌的生长(P0.05)、降低乳腺组织的损伤和极显著下调TNF-α的含量(P0.01)。结论蝇蛆抗菌肽对小鼠金黄色葡萄球菌性乳腺炎治疗有一定治疗效果。     

金黄色葡萄球菌调控基因agr及sae对其耐热核酸酶分泌的影响

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)是一种重要的人畜共患病病原,它能产生一种由nuc基因编码的胞外耐热核酸酶。耐热核酸酶是金黄色葡萄球菌的毒力因子之一,agr及sae位点是编码金黄色葡萄球菌的主要毒力调节因子,研究发现sae调节位点在影响耐热核酸酶的表达上占主导地位。分析金黄色葡萄球菌各毒力因子和金黄色葡萄球菌现有疫苗,为解决金黄色葡萄球菌的耐药性,寻找更好的防治方法,有必要进行探索性实验寻找一种因素或药物,用来阻抑sae调控因子对耐热核酸酶的分泌过程进行调节,从而为金黄色葡萄球菌的防治研究提供一种新材料。     

新疆喀什、库尔勒及石河子地区维吾尔族妇女宫颈癌HPV16感染率对比

为探讨新疆喀什、库尔勒及石河子地区维吾尔族妇女宫颈癌患者中HPV16感染率的差异.采用半巢式PCR技术对152例维吾尔族妇女宫颈癌石蜡组织中HPV16DNA进行检测.结果显示在喀什、库尔勒及石河子地区妇女宫颈癌组织中,HPV16DNA检出率分别为80%,80%及53.1%,在统计学上有差异(x2=9.566,P=0.008);喀什及库尔勒地区维吾尔族妇女宫颈癌组织中HPV16感染率高于石河子地区(x2=8.247,P=0.004;x2=5.906,P=0.015).因此,新疆喀什、库尔勒及石河子地区维吾尔族妇女宫颈癌患者中HPV16感染有所不同.     

多重荧光PCR同时检测转基因成分35S和Nos方法的建立

根据商品化转基因作物中常用的花郴花花叶病毒启动子（CaMV35S）和根癌农杆菌终止（Nos）的序列特点，设计并合成了两对引物和相对应的荧光双链探针，建立一种应用荧光双链探针的多重荧光PCR同时检测转基因成分35S启动子和Nos终止子的方法，并利用该方法对马铃薯、大豆、玉米、甜椒、番茄等11份实物样品进行了检测，其中有5份样品结果阳性，结果表明所建立的多重荧光PCR方法能同时检测了35S方法同时检测出35S和Nos双组分，较常规PCR技术更为简便、快速、准确，有很很好的应用前景。     

生物制品中支原体污染的快速检测

用两步ＰＣＲ法及ＤＮＡ荧光染色技术,检测了国内部分生物制品研究所生产的８１份不同来源和批号的疫苗及一些实验用细胞株中的支原体,并对检测结果做了比较。     

5S及16S rDNA序列PCR扩增用于环境军团菌检测

军团菌病（Ｌｅｇｉｏｎｎａｉｒｅｓ’ｄｉｓｅａｓｅ）是一种严重的空气传播疾病,在世界各地都常有报道,是由军团菌（Ｌｅｇｉｏｎｅｌａ）引起,该菌迄今已鉴定出了４４个种,其中１８种具致病性,最常见的导致严重病症的种有嗜肺军团菌（Ｌ．ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ...     

Efficient inactivation of Staphylococcus aureus by silver and copper loaded photocatalytic titanate nanotubes

One dimensional titanate nanotubes(TNTs) were synthesized by microwave assisted alkaline hydrothermal process. The process was followed by UV-photodeposition of Ag and Cu on the surface of TNTs to enhance the photocatalytic activity in visible light spectrum. The loading of Ag and Cu(single and combination mode)offered a new insight to inactivate multi-drug resistant micro-organisms. The antibacterial properties of these samples were studied on Gram positive bacteria, Staphylococcus aureus(S. aureus) using well diffusion method.The TNTs with Ag and Cu loading showed a clear zone of inhibition after overnight incubation of S. aureus. The bacterial inactivation efficiency of nanoparticles in the visible light was further analyzed by kill kinetics. TNTs with Ag and/or Cu loading showed a significant reduction in bacterial growth. Cu co-loaded with Ag sample showed the highest inactivation efficiency within 90 min of visible light irradiation. To elucidate the mechanism of bactericidal properties of samples under visible light irradiation, the formation of reactive oxygen species(ROS), particularly, superoxide radical anion was determined by nitro blue tetrazolium(NBT) assay and the protein degradation by each samples were measured. Based on overall results, it was observed that the Cu coloaded with Ag on TNTs samples were found to be more effective as compared to either Ag or Cu loaded TNTs. It provides new avenues for utilizing the combination of Cu and Ag for enhancing the antimicrobial efficacies for different nanoparticles.     

成都地区健康犬及其畜主鼻腔金黄色葡萄球菌和中间型葡萄球菌的分离及耐药性研究

为了解成都地区健康犬及其主人金黄色葡萄球菌和中间型葡萄球菌的携带率及耐药情况,对收集的鼻腔棉拭子样本308份(犬源和人源各154份)进行相关细菌分离、纯化及鉴定.对获得菌株进行药物敏感性和mec A基因检测.结果表明:犬源和人源金黄色葡萄球菌分离率分别为5.19%(8/154)和13.64%(21/154),犬源和人源中间型葡萄球菌分离率分别为9.74%(15/154)和2.60%(4/154);金黄色葡萄球菌和中间型葡萄球菌中mec A检出率分别达20.71%和68.42%;29株金黄色葡萄球菌对磺胺二甲嘧啶耐药最严重(耐药率R达93.10%),对青霉素G和复方新诺明耐药较严重(R分别为72.41%和58.62%),对其余药物呈不同水平耐药性(耐药率范围6.90%~27.59%);19株中间型葡萄球菌对磺胺二甲嘧啶、青霉素G耐药非常严重(R分别达100.00%和94.74%),对红霉素及复方新诺明耐药较严重(R分别为78.95%和73.68%),对其余药物呈不同水平耐药性(R范围5.26%~63.16%),26.32%中间型葡萄球菌对苯唑西林耐药.不同来源菌株表现出较严重多重耐药性,尤其是耐苯唑西林中间型葡萄球菌呈100.00%多重耐药性.以上结果说明,健康犬和人类鼻腔内可携带金黄色葡萄球菌和中间型葡萄球菌,这些菌株已呈较严重耐药性,在这些菌株中mec A基因普遍存在,应加强对这两种细菌流行情况及其耐药性检测.     

Cre-lox重组系统介导转基因烟草中外源基因删除的研究

对Cre在转基因个体中介导的重组效率进行了研究。构建了含有Cre 基因(p35S-Cre)和 GUS 基因侧翼含同向loxP 位点的(loxP-p35S-GUS-loxP)两种植物表达载体。以共转化的技术将两种基因元件同时转化烟草得到转基因植株,根据对共转化植株GUS 基因的活性分析、分子检测、PCR检测及对重组后扩增DNA片段进行序列分析表明：Cre-loxP 重组系统在转基因烟草中能精确高效地介导转基因的删除,但也存在部分植株不能完全删除的现象。     

7β-[2-(2-氨噻唑-4-基)-(Z)-2-甲氧亚胺乙酰氨基]-3-(2-芳基-1,3,4-恶二唑-5-硫亚甲基)头孢菌素衍生物抑菌活性及构效关系探讨

采用2倍浓度稀释法、平板抑菌实验法、比浊法检测了衍生物对金黄色葡萄球菌等的最小抑菌浓度(MIC)及时效、量效关系，比较了6种衍生物不同的抑菌作用。结果表明，该系列头孢菌素衍生物对实验菌株均有明显的抑制活性。对金葡菌最为敏感，其中7β[2—(2—氨噻唑—4—基)—(Z)—2—甲氧亚肢乙酰氨基]—3—(2—芳基—1，3，4—恶二唑5—硫亚甲基)头孢—3—烯—4—羧酸a作用最强，与头孢拉定相似。提示该类衍生物是一类对受试菌株中金葡菌最为敏感的化合物。