大黄酸抑制脂多糖刺激巨噬细胞升高[Ca2+]i和释放TNFα的作用特征

以正常腹腔巨噬细胞(PMφ)和脂多糖(Lipopolysacharide，LPS)刺激的PM垂为对象，用MTT法和激光共焦扫描显微术检测肿瘤坏死因子α(TNFα)释放量和单细胞[Ca^2 ]i的动态变化，研究了大黄酸(Rhein)的作用特征和机理．结果显示，大黄酸对正常PMφ释放TNFα没有明确的影响，但对LPS刺激的PMφ释放TNFα有显的抑制作用，其抑制作用随浓度增加而增强，10^-4mol／L大黄酸抑制了10μg／mL LPS效应的72％．值得注意的是，大黄酸不但抑制了LPS引发的PMφ[Ca^2 ]i的升高，而且使LPS引发的[Ca^2 ]i由宽平台峰状转变为振荡动力学模式，胞外介质无钙时又转变为更低幅值的峰．以上结果表明，大黄酸降低LPS引发的PM垂的[Ca^2 ]i升高是其抑制TNFα释放的信号传导通路的重要环节，并提示大黄酸在降低胞内钙释放和胞外钙内流的同时又对其动力学进行了类周期性的调制．     

龙葵碱对HepG2细胞内[Ca2+]i的影响

探讨龙葵碱对HepG2细胞形态及细胞内[Ca~(2 )]i的影响,揭示龙葵碱诱导细胞凋亡的机制.以人肝癌细胞HepG2为研究对象,采用AO/EB双染HepG2细胞,激光共聚焦扫描显微镜观察细胞形态学改变,Fluo-3/AM单染HepG2细胞,激光共聚焦扫描显微镜观察细胞内[Ca~(2 )]i的改变.结果发现龙葵碱作用于HepG2 48h后,细胞形态出现典型的细胞凋亡形态;细胞内[Ca~(2 )]i浓度明显升高.表明龙葵碱升高细胞内Ca~(2 )浓度启动细胞凋亡机制.     

ATP刺激巨噬细胞[Ca2+]i升高和氧自由基增加及大黄酸的抑制作用研究

研究了ATP刺激的大鼠腹腔巨噬细胞[Ca2 ]i升高与氧自由基(ROS)产生的关系和大黄酸抑制作用特征.提取大鼠腹腔巨噬细胞,利用Ca2 探针Fura-2检测单细胞胞内自由Ca2 浓度([Ca2 ]i)变化,同时利用NBT还原反应强度检测同一细胞ROS产生能力.结果发现无ATP刺激的巨噬细胞的ROS产生量较低;1mmol/L ATP刺激巨噬细胞单细胞后诱发[Ca2 ]i显著升高由胞内Ca2 释放和胞外Ca2 内流组成,同时ROS产生增强2倍;胞外无Ca2 条件下ROS产生随着[Ca2 ]i下降而减少.10-5和10-4mol/L浓度大黄酸对1mmol/L ATP刺激巨噬细胞单细胞的[Ca2 ]i升高和ROS产生有剂量依赖性的抑制作用;多细胞的统计分析表明10-5和10-4mol/L浓度大黄酸分别抑制了[Ca2 ]i峰值的49%和84%,同时抑制了ROS产生的59%和81%.因此认为ATP刺激大鼠腹腔巨噬细胞诱发的[Ca2 ]i升高介导了ROS的产生,大黄酸剂量依赖性的抑制ATP刺激的细胞[Ca2 ]i升高和ROS产生能力,并提示大黄酸抑制细胞[Ca2 ]i升高是其抑制ROS产生的重要机制.     

科罗索酸诱导细胞内ROS及Ca2+超载抗人结肠癌的研究

为了研究科罗索酸对人结肠癌SW480细胞的抗增殖、促凋亡作用及其机制,分别采用不同浓度的科罗索酸干预SW480细胞24和48 h后,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力并计算半数抑制浓度(IC_(50));使用4,6-联脒-2-苯基吲哚(DAPI)染色以及Annexin V-FITC/PI双染检测科罗索酸诱导细胞凋亡的作用;通过单克隆实验考察科罗索酸对SW480细胞增殖能力的影响;采用2′,7′-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)法和二氢乙啶(DHE)超氧化合物阴离子荧光探针法检测科罗索酸对SW480细胞内的活性氧(ROS)浓度的影响;荧光探针(JC-1)检测细胞线粒体膜电位;Ca~(2+)荧光探针Fluo-4AM检测细胞内Ca~(2+)浓度;蛋白质免疫印迹法检测科罗索酸对线粒体凋亡通路相关蛋白Cleaved Caspase-3、Bax、Bcl-2和Cleaved PARP表达的影响。结果表明:科罗索酸干预细胞24和48 h的半数抑制浓度分别为12.13和7.79μmol/L;低于半数抑制浓度的科罗索酸可以显著抑制SW480细胞的增殖;与空白对照组相比,科罗索酸(3.75、7.5和15μmol/L)干预SW480细胞后,其细胞凋亡率分别为20.05%、20.95%和31.60%,线粒体膜电位显著下降;同时,Cleaved Caspase-3、Bax和Cleaved PARP蛋白表达水平显著上升,Bcl-2表达水平显著降低,科罗索酸激活线粒体凋亡通路诱导SW480细胞凋亡。科罗索酸可以明显抑制SW480细胞的增殖并激活线粒体凋亡通路发挥抗肿瘤作用,其机制与上调细胞内活性氧浓度和Ca~(2+)超载有关。     

龙葵糖蛋白对MCF -7细胞内[Ca2+]i的影响

研究龙葵糖蛋白对乳腺癌MCF -7细胞内[Ca2+]i的影响.通过MTT法测定龙葵糖蛋白对MCF -7细胞的细胞毒作用;Hoechst33258染色荧光显微镜下观察龙葵糖蛋白作用MCF -7细胞的形态学变化;采用Fluo - 3/AM探针标记,激光共聚焦技术观测龙葵糖蛋白对MCF -7细胞内[Ca2+]i的影响.结果表...     

运动训练对大鼠淋巴细胞内Ca2+浓度的影响

研究常规训练对大鼠淋巴细胞内Ca^2 浓度的影响，并与未训练大鼠进行比较。将24只大鼠随机分为安静组、力竭运动组和训练 力竭运动组。训练 力竭运动组常规训练3周后，与力竭运动组一同进行负重4％条件下的力竭游泳运动。观察、对照运动后即刻大鼠脾细胞、胸腺细胞及外周血淋巴细胞内Ca^2 浓度的变化，结果发现训练 力竭运动组达到力竭的时间较力竭运动组显著延长。与安静组相比，力竭运动组脾细胞及外周血淋巴细胞内Ca^2 滚度有升高趋势，而训练 力竭运动组升高显著；训练 力竭运动组3种淋巴细胞内Ca^2 浓度普遍有高于力竭运动组的趋势，表明运动训练能提高大鼠运动能力可能与增强机体对力竭运动导致的钙调节失衡的适应能力有关。     

滑膜细胞[Ca2＋]i变化的理论模型研究

以滑膜细胞内钙离子浓度变化为研究对象,通过分析整合影响滑膜细胞内钙离子浓度变化的模块来建立滑膜细胞[Ca2+]i变化的理论模型.先考虑参与钙调节的质膜上钙泵、内质网上钙泵和渗漏、IP3受体、Na+/K+泵、延迟整流钾通道、TRPV1通道等各个模块在网络中的作用,确定钙调控过程中各模块的数学模型.在此基础上,引入钙缓冲系统的参量,并重点突出[Ca2+]i和膜电位的相互作用,建立起滑膜细胞上胞浆[Ca2+]i变化的动力学模型.最后,调整模型参数,使得模型处于稳定的初始状态,并保证模型参数的取值在合理的范围,给出滑膜细胞响应刺激所对应的[Ca2+]i随时间变化的模拟结果,并简要分析了某些参数对模型的影响.研究结果表明:IP3受体的调控机制在辣椒素刺激滑膜细胞胞浆[Ca2+]i变化的动力学模型中有明显作用;[Ca2+]i和膜电位的相互作用对滑膜细胞钙网络调控至关重要;质膜上钙泵的密度、活性,IP3受体通道密度,TRPV1通道密度等的变化对[Ca2+]i模拟曲线形状有明显影响.     

不同浓度ET-1引起心肌细胞[Ca2+]i 升高作用的量效关系

目的：探讨内皮素－１（ＥＴ－１）对心肌细胞内游离钙浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）的作用以及不同浓度ＥＴ－１引起［Ｃａ２＋］ｉ升高作用的量效关系。方法：采用分离的Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ大鼠心室肌细胞,以Ｆｕｒａ－２／ＡＭ荧光指示剂负载,检测不同浓度ＥＴ－１引起［Ｃａ２＋］ｉ变化。结果：ＥＴ－１引起［Ｃａ２＋］ｉ升高呈双相反应,即起始的短暂快速相和随后的持续相。在１×１０－９～５×１０７ｍｏｌ／Ｌ范围内,随着ＥＴ－１浓度的增加,其升高［Ｃａ２＋］ｉ的作用亦增强;并且这种作用可被ＥＴＡ的特异性受体阻断剂ＢＱ１２３（２×１０６ｍｏｌ／Ｌ）所阻断。结论：ＥＴ－１升高［Ｃａ２＋］ｉ呈剂量依赖关系,其作用具有特异性,并且是通过ＥＴＡ受体介导的。     

光强对砀山酥梨果实发育期Ca2+、Zn2+含量变化的影响

本实验以砀山酥梨为实验材料研究梨果实发育期间C a2+、Zn2+含量的变化规律以及与光强的关系。结果表明:(1)砀山酥梨果实C a2+、Zn2+浓度在盛花后第1周和第7周出现两次高峰,这正是石细胞形成的关键期,说明C a2+、Zn2+浓度大小与石细胞的形成有关;(2)梨果实吸收C a2+、Zn2+主要在幼果期,且表现出高光强>中光强>弱光强>极弱光强。     

15 － KETE 对大鼠肺动脉平滑肌细胞钙离子浓度的影响

摘要: 目的探讨15-KETE 对大鼠肺动脉平滑肌细胞内Ca2 + 的作用及其来源。方法以酶法( 胶原酶Ⅰ型和弹性 酶) 分离培养原代大鼠肺动脉平滑肌细胞,将细胞稀释所需密度( 2 × 105 个/mL) ,加样于6 孔板中的盖玻片上,放 入37℃孵箱中培养12 h,细胞贴壁后,取出6 孔板中的盖玻片,放入特制的小槽内,D-Hanks 液冲洗细胞3 次,加入 1 × 10 － 5mol /L 的Flou-3 /AM,置37℃孵箱中避光孵育约30 min,用D-Hanks 液洗去细胞外残留染料,应用激光扫描 共聚焦显微镜技术,测定了15-KETE 对大鼠肺动脉平滑肌细胞游离钙离子浓度的影响。结果1) 15-KETE ( 1 × 10 － 8-1 × 10 － 6 ) mol /L 可依赖性引起肺动脉平滑肌细胞内钙离子浓度( ［Ca2 +］i) 增加; 2) 1 × 10 － 6 mol /L 维拉米( L-型钙离子通道阻断剂) 和无钙离子细胞外液显著阻抑了1 × 10 － 6 mol /L 15-KETE 引起肺动脉平滑肌［Ca2 +］i 增 加。结论15-KETE 可引起大鼠肺动脉平滑肌［Ca2 +］i 增加,并且此钙来源于细胞外液钙离子。     

荧光法分析丙烯酰胺对人外周血淋巴细胞钙稳态的影响

应用fura-2-AM荧光探针，研究不同剂量丙烯酰胺对淋巴细胞内钙离子稳定状态的影响，并探讨其作用机制．     

甲基对硫磷诱发大鼠肝细胞内钙浓度升高的初步机制研究

应用激光扫描共聚焦显微镜观察甲基对硫磷(M ETHYLPARATH ION,MP)对正常大鼠肝细胞株(BRL)内游离钙浓度([CA2 ]I)的影响。实验结果表明,在正常生理盐溶液(N-PSS)中,MP能引起细胞内的钙升高,并呈浓度依赖性;在无钙生理盐溶液(0 CA2 -PSS)中,400 PMOL/L MP不显著改变细胞内的钙浓度。用不同的非选择性阳离子通道阻断剂(300ΜMOL/L GD3 ,2 MMOL/L SR2 ,2 MMOL/L N I2 )作用于由MP引起的钙升高时,发现均能有效地抑制钙升高,其中N I2 的抑制效果最为明显。同时MP引起的钙升高的时程远远大于ATP的作用。以上结果显示,MP对BRL细胞胞内的CA2 具有升高作用,此作用可能是MP激活非选择性阳离子通道,并最终导致细胞膜上的其它钙离子通道开放。     

钙离子对学习记忆的影响

Ca^2 作为神经信号传递的重要信使，参与学习记忆的神经机制。突触前和突触后细胞内钙离子在长时程突触的可塑性中发挥重要的信息传递作用。研究表明衰老性记忆障碍与中枢神经系统的Ca^2 稳态调节失衡有关。神经细胞内游离钙水平[Ca^2 ]i受多种机制的调节，主要包括Ca^2 的跨膜转运、细胞内钙池摄取与释放Ca^2 等过程；最近的研究表明神经胶质细胞也参与其调节。     

体外ELF电磁场对肝细胞Ca2+生理浓度变化的影响

研究了ELF电磁场对细胞游离Ca2 浓度的影响。分别通过(a)从单个肝细胞内钙离子振荡的动力学模型出发,以细胞膜上IP3受体浓度作为作用因子的数值计算和(b)ELF电磁场对细胞作用的实验结果分析电磁场对细胞游离Ca2 浓度的影响。结果表明:钙振荡的周期与IP3受体的浓度成非线性关系,外加ELF电磁场影响胞内钙振荡的周期和胞浆Ca2 浓度:强度为53v/m、频率为16Hz、45Hz和频率为16Hz、强度为80v/m的电磁波可使细胞胞浆Ca2 浓度上升明显,有显著统计学意义,强度为53v/m、频率为32Hz和60Hz和频率为16Hz、强度为26v/m的电磁波作用后细胞胞浆Ca2 浓度上升不明显,无统计学意义。     

Intracellular Ca indicator Quin-2 inhibits Ca2+ inflow via Na/Ca exchange in squid axon

Until recently, intracellular free calcium has been amenable to measurement and investigation only in cells large enough to permit either microinjection of a suitable Ca sensor such as a aequorin or arsenazo III or insertion of a Ca-sensitive microelectrode. This constraint on cell size was removed by the development of the fluorescent Ca2+ -sensitive dye Quin-2 and its acetoxymethyl ester, which can be introduced into a wide range of cell types. A major requirement of any intracellular Ca2+ indicator is that it should not disturb intracellular Ca2+ homeostasis and Quin-2 is generally considered to be satisfactory in this respect. We now report that injection of Quin-2 into squid (Loligo forbesi) axons can almost completely abolish one component of Ca2+ entry--intracellular Na+ (Nai)-dependent Ca2+ inflow, which occurs via Na/Ca exchange. Mixtures of Ca and Quin-2 that buffer an ionized Ca2+ at close to physiological concentrations also block Nai-dependent Ca2+ influx but these same mixtures fail to block the extracellular Na+ (Na0)-dependent extrusion of Ca2+, showing that Quin-2 acts specifically on Ca2+ inflow.     

低功率激光通过细胞内Ca^2＋对细胞功能的调控作用

综述了Ｈｅ－Ｎｅ激光照射使细胞溶质内［Ｃａ＾２＋］ｉ增加，产生钙信号，从而调控细胞功能，引起细胞内一系列生理和生物化学反应。     

Ca2+和Co2+对百合切花保鲜效果的影响

探讨了不同浓度处理的无机盐CaCl2和CoNO32溶液对瓶插百合切花保鲜效果的影响.结果表明:CaCl2和CoNO32配合使用可以使百合切花花枝硬挺,花径增大,改善切花的观赏品质,延长瓶插寿命;同时,还具有保持百合切花花枝鲜重、维护花瓣细胞膜透性的稳定、维持瓶插溶液pH值保持在适合的浓度范围之间、缓解叶绿素的降解等作用.通过对各处理的各项指标的综合观测与分析可知,以0.1%CaCl2和0.05‰CoNO32溶液的配合使用对百合切花的保鲜效果最好.     

锌缺乏对小鼠周围血淋巴细胞增殖反应的抑制效应

本实验测定锌缺乏时小鼠周围血淋巴细胞（ＰＢＬ）对有丝分裂ＣｏｎＡ刺激反应的改变。当用不同锌含量的合成饲料饲养Ａ／Ｊ小鼠２８天后，缺锌组小鼠体重和总食物消耗明显减少，体重仅为对照组的６８％。当用５μｇＣｏｎＡ／ｍｌ刺激ＰＢＬ时，中度和重度缺锌组细胞３￣Ｈ－ＴｄＲ掺入显著减少，分别为对照组的５２％和３１％，而限制组与对照组相比无明显改变。结果说明：缺锌时周围血淋巴细胞免疫功能受到严重损害，而不是由于食物摄入不足所致。