龙眼基因组DNA提取及RAPD反应体系优化的研究

采用改良CTAB法提取龙眼幼叶基因组DNA,并以其为模板对影响RAPD扩增反应的主要因子采用单因素递进分析方法进行优化,建立了龙眼基因组DNA最佳RAPD反应体系,即在25μL的反应体积中,含20 ng模板, 1．0 U Taq DNA聚合酶,2．0 mmol／L MgCl2,各0．20 mmol／L dNTP,0．20μmol／L引物．     

濒危植物刺桫椤RAPD反应体系的优化

以高盐SDS法提取濒危植物刺桫椤(Alsophila spinulosa)嫩叶总DNA，进行RAPD分析，分别研究了模板DNA、引物、dNTP、Mg^2 和Taq DNA聚合酶用量以及反应体积对反应结果的影响．筛选并建立了适合于利桫椤RAPD扩增的反应体系：反应体积10μL，内含2ng/μL模板DNA，2．0mmo1/L MgCl2,0．3μmo1／L引物，300μmo1／L dNTP，0．5u Taq DNA聚合酶．     

中国特有极度濒危植物猪血木RAPD反应体系的探索

采用改进的CTAB法提取中国特有极度濒危植物猪血木(Euryodendron excelsum H.T.Chang)嫩叶总DNA,进行RAPD分析。分别研究了模板DNA、引物、dNTPs、Mg2 和Taq DNA聚合酶用量对RAPD PCR扩增反应结果的影响。筛选并建立了适合于猪血木RAPD扩增的反应体系:总体积25μL,其中10×PCR缓冲液(500 mmol/L KCl,100 mmol/L Tris-HCl,1.0%Triton X-100,20 mmol/L MgCl2)2.0μL,引物(1.5μmol/L)0.2μL,dNTPs(10 mmol/L)0.3μL,模板2μL(15 ng),Taq酶0.4μL(0.5 U),水20.1μL。     

两种荒漠小灌木RAPD反应条件优化与引物筛选

分析了模板DNA、引物、Taq酶、dNTP、Mg2+浓度对红砂和长叶红砂RAPD扩增的影响,筛选并建立了适合红砂和长叶红砂的RAPD扩增反应体系:反应体积25μL,内含20 ng模板DNA,0.16μmol/L引物,0.5 U Taq DNA聚合酶,2.5 mmol/L MgCl2,0.1 mmol/L dNTP,2μL10×buffer.用60个引物进行扩增,筛选出扩增效果好的18个引物,为进一步研究红砂和长叶红砂的遗传多样性奠定了基础.     

用正交设计优化甜菜RAPD反应体系

采用正交设计对甜菜的RAPD反应体系进行优化．应用L25（5^6）正交表,研究了Taq、Mg^2＋、随机引物、dNTPs和DNA模板5种RAPD反应组分浓度变化对扩增结果的影响,并进行量化分析,试验结果表明用这种方法建立的甜菜RAPD-PCR优化反应体系为：25μL反应体系中含1×Buffer、1．0mmol／L Mg^2＋、1U TaqDNA聚合酶、0．25mmol／L dNTPs、0．4μmol／L随机引物及25ng DNA模板．     

安徽羽叶报春RAPD分析实验条件优化的研究

采用CTAB法^[1]从珍稀濒危植物安徽羽叶报春(Primula merrilliana)的幼叶中提取DNA，进行随机扩增多态DNA(RAPD)实验，通过Mg^2 、dNTP、Taq酶、模板浓度的优化，确立了RAPD反应的最佳体系(25μ1)范围为：Mg^2 浓度为2．0—2．5mmol／L，模板浓度为每个反应50—150ng，dNTP浓度为200—250μmol／L，Taq酶为1.5—2.0U，按照优化的RAPD条件进行的重复实验，重现性良好。     

朱鹮RAPD反应体系优化研究

目的研究朱鹮RAPD反应中Mg2 浓度、复性温度、引物浓度、Tag酶浓度和DNA模板量等几种因素对扩增结果的影响,并探讨反应的最优条件。方法以朱鹮DNA为材料进行RAPD试验,对Mg2 浓度、复性温度、引物浓度、Tag酶浓度和DNA模板量进行梯度设置,每次仅改变一个参数,并保持其他条件不变。结果建立了一套适用于朱鹮的RAPD反应体系。结论优化后的朱鹮RAPD反应条件为:反应总体积25μL,其中含Mg2 (25 mM)2.5μL,10×Buffer2.5μL,dNTPs(10mM)0.5μL,引物(8μmol/L)1.0μL,Tag酶(3 U/μL)0.4μL,DNA模板(10 ng/μL)3.0μL;PCR循环中复性温度为37℃。     

极度濒危植物猪血木RAPD反应体系的优化

采用改进的CTAB法提取中国特有极度濒危植物猪血木(Euryodendron excelsum H.T.Chang) 嫩叶总DNA,并对其进行RAPD分析.分别检测了模板DNA、引物、dNTP、Mg2+和Taq DNA聚合酶用量对反应结果的影响.筛选并建立了适合于猪血木RAPD扩增的反应体系:总体积25 μL,其中10×PCR 缓冲液(500 mmol/L KCl,100 mmol/L Tris-HCl,110% Triton X-100,20 mmol/L MgCl2) 2.5 μL,引物( 1.5 μmol/L) 0.3 μL,dNTPs (10 mmol/L) 0.5 μL,模板2 μL (25 ng),Taq 酶0.2 μL (0.5 U).     

木麻黄小枝基因组DNA的快速提取研究

提取介质中加入2.5% β-巯基乙醇, 能有效去除次生物质对木麻黄基因组DNA提取的影响.用新建方法所提DNA产率比用前人方法提的高出0.8倍左右.鉴定结果表明:鲜小枝、干小枝的DNA样品皆为48kb左右,适于限制性酶切和RAPD反应; 同时发现同一株树的鲜小枝、干小枝,基因组DNA RAPD扩增可得到相同的产物.     

七筋菇基因组DNA提取方法的比较研究

目的对七筋菇基因组DNA提取和ISSR-PCR扩增模板浓度进行优化。方法以常规的CTAB法为基础,对七筋菇基因组DNA提取进行了优化:提取液中加入PVP(6%(w/v)),β-巯基乙醇的浓度提高至5%(w/v);第一次抽提后,重新加入提取液及抗坏血酸(20%(w/v)),65℃水浴30 min。结果所提样品DNA,A260/280,A260/230的平均光吸收值分别为1.78,1.99,浓度为105 ng/μL左右,ISSR扩增带多且清晰明亮,稳定性及多态性高,表明DNA纯度高;对扩增反应的最佳模板浓度进行研究表明,所提DNA模板稀释2倍效果最好(浓度为50 ng/μL)。结论改良后的CTAB法适于提取七筋菇植物的基因组DNA。     

大黄鱼基因组DNA的不同提取方法及RAPD扩增比较

采用三种方法提取大黄鱼肌肉基因组DNA,并以所提取的DNA为模板进行RAPD分析比较。结果表明,与传统方法、高盐抽提法相比,星普法具有快速简便、所需样品量少,所提取的DNA质量高等特点。三种方法所得的DNA分子量大小都在20kb以上,且RAPD扩增条带基本一致。     

RAPD-PCR稳定性的探索

 以滇牡丹(Paeonia delevayi)为实验材料,分别测试了Mg²⁺、模板DNA、聚合酶、引物等反应成分对产物的影响,以期探索RAPD-PCR体系中各成分对产物的影响,以及各成分之间相互作用的规律,为利用RAPD进行生物学研究的人们提供一些参考.     

葎草单染色体的显微分离及DOP-PCR技术体系建立

葎草是具有XX/XY1Y2性染色体系统的雌雄异株植物,是研究植物性染色体演化的模式材料之一.利用染色体显微分离技术从葎草根尖有丝分裂中期分裂相中将单条染色体进行了显微分离及DOP-PCR(Degenerate oligonucleotide primer-PCR)扩增,并构建了单染色体DOP-PCR扩增产物的荧光探针,对葎草根尖有丝分裂中期分裂相染色体进行了荧光原位杂交,其结果表明荧光信号分布在所有的染色体上,表明所建立的技术体系能够成功分离葎草单染色体并进行DNA扩增.本研究结果为进一步进行葎草X,Y染色体的细胞及分子生物学研究提供了技术支持.     

非损伤性取样的蚕类DNA提取及检测

对家蚕和蓖麻蚕的蚕蜕和蛾翅分别采用SDS裂解法和动物组织基因组试剂盒提取法提取DNS，并与常规方法以蚕蛹提取的DNA一起进行RAPD扩增图谱比较、分析，结果表明用非损伤性方法提取的DNA的RAPD图谱和常规方法提取的DNA的RAPD图谱基本一致。     

渗调修复黄瓜陈种子基因组DNA损伤的RAPD研究

用Vc，CaCl2，PEG及其组合对自然老化的黄瓜种子进行渗调处理，利用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术对处理前后的种子基因组DNA多态性进行比较分析．结果表明：渗调作用可以修复黄瓜陈种子的DNA损伤．修复效果与种子贮藏时间有关，贮藏半年的种子渗调处理前后RAPD产物差异不明显，贮藏1～2a的陈种子修复的效果好，表现为分子量高的DNA重新合成，RAPD扩增条带增多，亮度增加；贮藏3a的陈种子修复效果不理想。     

核桃DNA的提取及RAPD体系的优化

采用CTAB法和改进的CTAB法，从叶片中提取核桃基因组DNA，比较其分离效果，结果表明：改进的CTAB法可有效去除细胞内多糖和多酚等杂质对模板DNA的污染，并以此为模板进行RAPD反应，对RAPD反应程序中的一些重要参数进行摸索和优化试验，建立适合于核桃的RAPD-PCR反应体系，以进行该树种的分子标记研究。     

鹿鞭及其伪品随机扩增DNA多态性鉴定方法研究

目的建立鹿鞭及其伪品随机扩增DNA多态性(RAPD)鉴定方法,为鹿鞭的鉴别提供可靠依据.方法采用柱层析法从鹿鞭及其伪品中提取线粒体DNA并进行随机DNA多态性扩增.结果正品鹿鞭(梅花鹿鞭和马鹿鞭)与其常见伪品(牛鞭)线粒体DNA随机扩增产物的电泳图谱有明显区别,条带数量和位置均不同,说明本方法可以有效区分正品鹿鞭与其常见伪品.结论 RAPD技术可为鹿鞭及其伪品的鉴别提供一种简单、有效、可信度高的方法.     

不同方法提取鳗鲡病原茵DNA模板的差异分析

利用吸光值、琼脂糖电泳及PCR差异扩增等指标,对酚一氯仿法、水煮法、碱裂解法3种方法制备的鳗鲡病原菌DNA模板进行了差异分析．结果表明：1）不同方法提取的病原菌模板DNA的浓度、纯度及分子质量大小存在差异,但以这3种方法提取的病原菌DNA为模板,均能成功扩增到细菌16SrD．NA和外膜蛋白的保守序列．其中,酚一氯仿提取的模板DNA浓度较低、纯度较高;水煮法和碱裂解法提取的模板DNA浓度较高、纯度较低．2）电泳显示,3种方法获得的模板DNA扩增出的16SrDNA保守序列条带均一,没有显著差异,但在外膜蛋白保守序列的扩增中却因菌种和模板提取方法的不同而存在差异．     

墨西哥落羽杉无性系RAPD指纹图谱的构建

利用随机多态扩增DNA(RAPD)分子标记对53个墨西哥落羽杉无性系的研究表明:31个随机引物共扩增出了241条谱带,其中118条谱带在无性系间呈现多态性,多态位点占48.96%;用POPGENE软件对无性系进行遗传分析,得出无性系间的遗传距离为0.271~0.537,说明无性系间的遗传差异相对较大。通过聚类分析将53个优良无性系分为两大类,同时利用RAPD分子标记构建了53个无性系的指纹图谱,可对墨西哥落羽杉优良无性系进行区分和鉴定。