E2与BPA联合前后对ERK信号通路的诱导

研究雌二醇(E2)与双酚A(BPA)联合作用于乳腺癌MCF-7细胞后,对细胞内ERK信号转导通路的影响.运用Western blot法进行实验.测定增殖相关蛋白Ki67,观察到E2与BPA单独及联合后都能够诱导细胞增殖,发挥雌激素活性.通过对ERK蛋白和活化形式p-ERK蛋白的测定,E2及与BPA联合后的雌激素活性发挥...     

北五味子多糖通过ERK1/2通路对AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖的作用机制

目的观察北五味子多糖(polysaccharide of Schisandra chinensis,SCP)对血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的心肌成纤维细胞(CFb)增殖作用,并探讨其作用机制.方法以培养的新生Wistar大鼠乳鼠CFb为实验模型,实验分为对照组、模型组、3个药物剂量组.采用胰酶消化、差速贴壁法培养CFb;四氮唑盐(MTT)比色法检测CFb增殖;羟脯氨酸(Hyp)法测定胶原含量;分光光度计测定CFb中超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)水平;硝酸还原酶法和分光光度法分别测定不同干预条件下CFb培养液中一氧化氮合酶(NOS)活性及一氧化氮(NO)水平;免疫组化技术检测CFb中细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)蛋白表达.结果 SCP能够显著抑制AngⅡ诱导的CFb增殖(P0.05或P0.01),降低Hyp含量,提高SOD活力,降低MDA水平(P0.05,P0.01),提高NOS活性及NO水平(P0.05,P0.01),减低ERK1/2蛋白表达(P0.05,P0.01).结论 SCP可通过抑制ERK1/2信号通路提高NOS活性,并升高NO水平,增强抗AngⅡ诱导的CFb增殖能力.     

螺旋藻营养补充通过MEK/ERK信号途径改善运动疲劳大鼠海马损伤

目的探讨螺旋藻(SP)营养补充对MEK/ERK信号通路活性的调控及其在运动疲劳大鼠海马损伤中的作用。方法 90只清洁级健康SD大鼠随机分为正常对照组(NC组)、运动模型组(EM组)、运动+SP组(ES组)、运动+MEK阻滞剂组(EPD组)、运动+SP+MEK阻滞剂组(ESPD组)、阳性对照组(PC组),共6组,每组均为15只。实验末,用免疫组化和免疫印迹法检测各组大鼠海马p-MEK、p-ERK和Actived Caspase-3蛋白的表达含量,生化法观察血清BUN和BLA含量的变化,同时行尼氏染色法观察海马神经元的病理形态学改变。结果(1)与NC组相比,其余组海马CA1区细胞结构呈不同程度的病理改变;与EM组、EPD组、ESPD相比,ES组损伤程度要轻,其细胞整体形态渐趋于PC组;ESPD组细胞整体形态要好于EM组,EM组要好于EPD组。(2)ES组血清BUN和BLA含量均显著低于EM组,且较PC组无明显区别。(3)ES组海马p-MEK和p-ERK表达均显著高于EM组、ESPD和EPD组,但显著低于PC组;而ActivedCaspase-3表达则相反,显著低于EM组、EPD组和ESPD组,但稍高于PC组,两者无明显差别。结论螺旋藻营养补充能降低运动疲劳大鼠血清BUN和BLA含量,减轻海马形态损伤;其原因可能与其上调MEK和ERK的磷酸化水平和抑制Caspase-3活化而抑制细胞凋亡的神经保护作用有关。     

Rac1突变重组体的构建及对JAK/STAT信号通路的影响

通过构建Rac1突变体,研究Rac1激活对肾小球系膜细胞(MES)JAK2/STAT3信号通路的影响.以Rac1目的基因为模板,在引物中设计突变,扩增突变体Rac1(G12V)的目的基因,与PiggyBac(PB-FLAG)载体质粒连接,构建突变重组体PB-Rac1(G12V),并运用脂质体核酸试剂转染系膜细胞.比较正常组、Rac1(G12V)突变组中系膜细胞的ROS含量及NADPH氧化酶活性;Elisa法检测细胞因子TGF-β表达水平;Western blot法检测系膜细胞中JAK2/STAT3信号及FN蛋白的表达.结果表明,成功构建了Rac1(G12V)持续磷酸化突变体并在MES细胞中表达,与正常组相比,Rac1(G12V)激活突变MES细胞NADPH氧化酶的活性和ROS含量明显增加;JAK2/STAT3信号通路激活,TGF-β和FN表达明显增加.Rac1能激活系膜细胞氧化应激和JAK2/STAT3信号通路,并促进TGF-β及FN的表达.     

莱菔硫烷对人肝癌HepG-2细胞ERK信号通路的影响

研究莱菔硫烷(sulforaphane,SFN)对ERK、p-ERK蛋白表达的影响,探讨其诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡的机制.采用Western Blot方法检测人肝癌HepG-2细胞内ERK及p-ERK蛋白的表达.结果表明,10、20、40μmol/L的SFN作用人肝癌HepG-2细胞48 h可显著下调HepG-2...     

ATR-Chk1-Cdc25信号通路参与盘基网柄菌G2/M转变期的调控

显微镜观察盘基网柄菌野生型KAx--3细胞和突变型RNAi-allC细胞,计数结果表明后者的单细胞繁殖速度约为前者的8倍.为探究该突变型盘基网柄菌细胞周期缩短的原因,用荧光定量PCR和western blot研究了ATR-Chk1Cdc25信号通路在其中的可能作用.实验结果表明:RNAi-allC细胞中cdc25基因相对表达量约为KAx-3细胞的8倍,而其Chk1与ATR基因的相对表达量却明显低于KAx-3细胞.突变细胞中Cdc25蛋白含量高于KAx-3细胞,但其Chk1蛋白含量却显著低于KAx-3细胞.这些数据表明,两种类型细胞之间的ATR、Chk1、Cdc25在mRNA水平和蛋白表达上均存在差异,特别是ATR基因表达量的不同明显影响ChK1和Cdc25的表达量,提示ATR-Chk1-Cdc25信号通路应该在一定程度上参与了盘基网柄菌细胞周期G2/M期的调控.     

苯甲酰芍药苷通过Nrf2/HO-1通路对心肌梗死大鼠心功能的影响作用机制研究

目的 探究苯甲酰芍药苷(benzoylpaeoniflorin,BA)通过核因子E2相关因子2/血红素加氧酶1(Nrf2/HO-1)通路对急性心肌梗死(AMI)大鼠心功能的影响作用机制.方法 36只SD大鼠随机分为3组(n=12):Sham组、AMI组和AMI+BA组.AMI组和AMI+BA组大鼠建立AMI模型,建模后...     

消肿止痛合剂对大鼠缺血皮瓣血管再生及VEGF-Dll4/Notch信号通路的影响

目的:观察消肿止痛合剂对大鼠缺血皮瓣血管再生及VEGF-Dll4/Notch信号通路的影响.方法:将240只SD大鼠随机分为6组,分别为空白组、假手术组、模型组、消肿止痛合剂组(消肿组)、消肿止痛合剂+Notch阻断剂MK-0752组(消肿+MK组)、消肿止痛合剂+VEGF阻断剂Axitinib组(消肿+AXI组).用...     

ERK1／2通路和血管内皮细胞在15-KETE诱导缺氧大鼠肺动脉收缩中的作用

目的用组织浴槽血管环技术研究细胞外信号调节激酶1／2（extracellularregulatedproteinkinasesl／2,ERKl／2）通路和血管内皮细胞在15-KETE诱导缺氧大鼠肺动脉收缩中的作用。方法16只体质量为（220±20）g清洁级Wistar大鼠随机分为2组（n=8）,正常对照组置于正常环境中饲养（FiO,=21％）,缺氧组置于缺氧的培养箱中饲养（FiO2：10％）,连续饲养9d后处死,游离直径约为0．5—1．0inIn肺内肺动脉（PA）。剪成3mm长的动脉环,在组织浴槽内进行张力研究。比较在15一KETE给药前后肺动脉环张力变化;机械法去除动脉环内皮,比较内皮完整和去内皮后,15一KETE对缺氧性肺动脉环的收缩作用;用ERKl／2上游激酶抑制剂U0126孵育肺动脉环,比较U0126孵育前后15-KETE对缺氧性肺动脉环的收缩作用;机械法去除动脉环内皮,再比较U0126孵育前后15-KETE对缺氧性肺动脉环的收缩作用。结果1）15-KETE对缺氧大鼠肺动脉环有收缩作用,呈浓度-效应关系,与正常对照组比较差异显著（P〈0．05）;2）内皮完整和内皮去除的肺动脉环,15-KETE对其缩血管作用均受到抑制,但差异显著（P〈0．05）;3）内皮完整肺动脉环,在U0126孵育前后,15-KETE的缩血管作用均受到抑制,但差异显著（P〈0．05）;4）内皮去除的肺动脉环,U0126孵育前后,15-KETE的缩血管作用也受到抑制,差异显著（P〈0．05）。结论15-KETE可浓度依赖性地收缩缺氧大鼠肺动脉环;15-KETE引起缺氧肺动脉收缩可能与ERK1／2信号转导通路和血管内皮细胞有关,并且位于平滑肌的ERKl／2通路也参与15-KETE诱导缺氧大鼠肺动脉环的收缩。     

硫酸镁对大鼠继发性脊髓损伤保护作用的实验研究

为探讨硫酸镁对大鼠继发性脊髓损伤的保护作用及机制.用30只体重280±20g wister成年大白鼠随机分为三组:A组(对照组),仅行T10阶段椎板减压;B组(损伤组),C组(治疗组),均行T10阶段椎板减压和Allen's重物打击致脊髓损伤,伤后30min时B组腹腔注射蒸馏水1600mg/kg,C组腹腔注射硫酸镁1600m//kg.48h后切去伤段脊髓组织分别测定H2O、Ca2+、Mg2+离子含量,观察局部组织病理学改变,超微结构及单位面积的凋亡细胞数.结果显示跟A组比较,B、C组损伤段脊髓组织H2O、ca2+含量增多,Mg2+含量减少,组织病理学及超微结构破坏严重,凋亡细胞数升高,而且C组较B组轻.由此可知,病程早期应用硫酸镁可以减轻脊髓损伤后的继发性损伤,从而对受损脊髓起到保护作用.     

大鼠急性脊髓损伤后肝癌衍生生长因子的表达

目的:观察大鼠受损伤脊髓组织中肝癌衍生生长因子(Hepatoma-derived growthfactor,HDGF)表达的变化.方法:将40只成年大白鼠随机分成对照组(A组)和脊髓损伤组(B组),每组20只.脊髓损伤组采用改良的Allen’s打靶法制备,并于术后24 h处死大鼠,取损伤脊髓节段进行免疫组织化学染色.观察HDGF在正常对照组以及脊髓损伤后表达情况.以表达指数作为统计学指标,采用X2检验分析各组间的变化.结果:HDGF主要表达在神经细胞核中.15例损伤脊髓标本表现为HDGF表达指数为Ⅱ组,对照组中表达指数为Ⅱ组仅4只(P<0.05).结论:HDGF高表达于损伤脊髓组织中,提示HDGF可能参与脊髓损伤的修复.     

大鼠脊髓楔型半切空洞模型的建立及评估

摘要: 目的建立一种新型大鼠脊髓半切模型,为临床脊髓空洞损伤研究提供适宜的动物模型。方法25 只SD 大鼠随机分为脊髓楔型块状半切组( A 组,n = 10) 、假手术组( B 组,n = 10) 和正常对照组( C 组,n = 5) 。术后采用 BBB 运动功能评分、斜板试验、HE 染色和核磁共振( MRI) 检测综合评价脊髓半切模型的稳定性。结果术后A 组 大鼠伤侧后肢BBB 运动功能评分及斜板维持最大角度值显著低于B 组和C 组( P ＜ 0. 05) ,而这些指标在B 组和C 组之间没有明显差异; 术后28 d HE 和MRI 检测显示脊髓损伤区( A 组) 灰质和白质发生明显的形态学改变。结论 通过该方法建立的脊髓半切模型稳定、可靠,适于脊髓空洞性损伤的研究。     

乙酰水杨酸对福尔马林致痛大鼠的行为学影响

以往用细胞内微电极技术研究发现乙酰水杨酸可引起大鼠背根神经节神经元膜产生明显的超极化反应,即能产生外周神经镇痛作用。本实验旨在利用大鼠福尔马林致痛模型,通过观察大鼠的痛行为反应,建立乙酰水杨酸镇痛模型,以探索乙酰水杨酸可能的中枢及外周镇痛机制。将24只Wistar大鼠随机分为3组:生理盐水组、福尔马林致痛组和乙酰水杨酸镇痛组。结果发现,福尔马林致痛组大鼠的缩腿次数和舔爪时间都明显长于生理盐水组,给予乙酰水杨酸后,缩腿次数和舔爪时间均明显减少。故认为乙酰水杨酸可明显减轻福尔马林所致的痛行为反应。     

大鼠脊髓不同平面双侧半横切损伤模型的建立及评价

目的建立一种新型大鼠脊髓切割损伤模型,为临床脊髓不同平面损伤研究提供适宜的动物模型。方法45只SD大鼠随机分为脊髓不同平面双侧半横切组(A组,n=15)、脊髓全横切组(B组,n=15)和假手术组(C组,n=15)。术后观察、记录各组大鼠活动、进食水、排尿排便、切口感染等并发症和死亡情况,采用BBB运动功能评分和斜板试验评价大鼠行为学功能。结果术后A组大鼠活动、进食水量减少,53.33%大鼠出现尿潴留,40.00%大鼠于术后1~4周死亡;B组大鼠活动、进食水量明显减少,66.67%大鼠出现尿潴留,60.00%大鼠于术后1~4周死亡;C组大鼠活动、进食水量无明显变化,无并发症及死亡发生。BBB运动功能评分及斜板维持最大角度值检测显示,A、B组均低于C组(P0.05),而这些评价指标在A组和B组之间无显著差异。结论脊髓不同平面双侧半横切损伤模型大鼠尿潴留及死亡率低,行为学评价与脊髓全横切损伤模型类似,适于脊髓不同平面双侧损伤修复的研究。     

15-KETE对大鼠肺动脉平滑肌细胞上ERK1／2活性的影响

目的从细胞分子水平上研究15-酮基二十碳四烯酸（15-ketoeicosatetretraenoicacid,15-KETE）对大鼠肺动脉平滑肌细胞上ERKl／2的活性的影响。方法通过酶法分离、培养SD大鼠肺动脉平滑肌细胞（pulmonaryarterialsmoothcells,PASMCs）,使用Westernblot技术观察15-KETE对大鼠PASMCs上ERKl／2活性的影响。结果1）10～mol／L15-KETE作用从0．5h到24h与对照组（未加15-KETE）比较,对ERKl／2总量没有明显的影响。2）与对照组比较,15-KETE处理0．5、1．0、2．0、4．0、8．0h明显增强P—ERKl／2（P〈0．05）。3）与对照组比较,10、10^-7和10～mol／L15-KETE明显增强p-ERKl／2（P〈0．05）,随15-KETE浓度增大,p-ERKl／2增多。4）与15-KETE作用比较,ERKI／2抑制剂PD9805920μmol／L、50txmol／L和U01260．1txmol／L、1btmol／L均能抑制15-KETE对ERKl／2的活化（P〈0．05）,并且随着抑制剂浓度增大,抑制作用加强。结论15-KETE对大鼠肺动脉血管平滑肌细胞上的ERKl／2表达没有明显的影响,但能激活肺动脉血管平滑肌细胞ERKI／2．使其磷酸化,并呈时间一剂量依赖关系。ERKl／2通路的特异性抑制剂PD98059、U0126能抑制15-KETE对ERKl／2的磷酸化。     

bFGF对大鼠脊髓前角运动神经元的保护作用

利用大鼠坐骨神经钳夹损伤模型,观察了碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）对大鼠脊髓前角运动神经元的保护作用。ＳＤ成年大鼠４０只,分成实验组和对照组,钳夹损伤大鼠坐骨神经。在实验组损伤侧受损的神经周围放入浸有ｂＦＧＦ的明胶海绵,对照组则用生理盐水浸泡海绵置于受损神经处。以大鼠右侧坐骨神经为正常自身空白对照。术后隔日一次向损伤侧腓肠肌肌注ｂＦＧＦ,对照组注射等量生理盐水。术后２、３、４、５周分别对每只大鼠进行心脏灌注固定,切取脊髓腰４～６节段,恒冷箱冷冻切片,Ｎｉｓｌ染色,观察脊髓前角运动元的形态,计算其数目,将损伤侧与正常侧比较,将ｂＦＧＦ治疗组与非治疗组作比较,统计学处理。结果：术后３、４、５周治疗组的损伤侧脊髓前角运动神经元存活率均大于对照组,且统计差异有显著性意义（Ｐ＜０．０５）。表明ｂＦＧＦ对坐骨神经钳夹损伤所导致的脊髓前角运动神经元胞体死亡有保护作用,也许可能成为运动神经元新的神经营养因子。     

茵陈蒿汤对肝纤维化大鼠Caspase-12通路以及TIMP-1、Smad2的影响

目的探究茵陈蒿汤对肝纤维化（LF）大鼠Caspase-12通路以及TIMP-1、Smad2的影响。方法雄性SD大鼠45只,随机分为3组,即对照组,模型组和茵陈蒿汤组。使用腹腔注射CCl 4 建立LF模型,茵陈蒿汤组在建模时使用茵陈蒿汤灌胃,持续8周。比较8周后各组大鼠的一般情况,分别使用HE染色和Masson染色观察肝组织形态和纤维化情况。分别使用Western blot和RT-qPCR检测蛋白和mRNA的水平。结果模型组大鼠出现明显的肝损伤和纤维化,茵陈蒿汤组大鼠肝损伤情况和纤维化情况显著减轻。血生化结果显示,模型组ALT和AST水平显著高于对照组（P <0. 05）,菌陈蒿汤干预后ALT和AST水平显著低于模型组,差异具有统计学意义（P <0. 05）。建模后8周模型组大鼠肝组织中GRP78、eIF2α和Caspase-12显著升高（P <0. 01）,茵陈蒿汤组的GRP78、eIF2α和Caspase-12显著低于模型组（P <0. 01）。模型组的Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、TIMP-1、Smad2 mRNA和蛋白水平显著高于对照组（P <0. 01）,茵陈蒿汤组Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、TIMP-1、Smad2 mRNA和蛋白水平显著低于模型组（P <0. 01）。结论茵陈蒿汤可显著缓解大鼠肝组织的纤维化,这可能由于茵陈蒿汤具有抑制Caspase-12通路以及Smad2基因的表达发挥抗纤维化和抗凋亡的作用有关。