抗体药物的植物反应器生产

大量的重组抗体被用于疾病的预防、诊断和治疗.目前,这些重组抗体绝大多数是利用鼠源细胞生产的,它的缺点是有潜在的隐患和价格昂贵.然而,植物作为反应器生产抗体药物既具有安全性又可大规模廉价生产的特点,具有广阔的前景.     

重组人源性抗HBsAg Fab抗体的特性分析

通过噬菌体展示技术从含高滴度抗乙肝表面抗原(HBsAg)抗体的人外周血淋巴细胞获得抗HBsAg Fab抗体的轻、重链基因．将Fab的轻、重链基因分别整合到巴斯德毕赤酵母(Pichua pastons)GS115菌株的染色体上，成功构建了高效分泌表达抗HBsAg Fab抗体的酵母工程菌．对酵母表达的重组Fab抗体进行了纯化，并对其相对分子质量、糖基化以及抗原结合能力等特性进行了分析，结果显示重组酵母分泌表达的重组人源性抗HBsAg Fab是一个相对分子质量为50000左右的低糖基化糖蛋白，1mg重组Fab抗体相当于40u的抗乙肝表面抗原抗体(20U／mg)．表明重组Fab抗体具有较强的结合HBsAg的能力．     

发菜中麦芽寡糖基海藻糖合成酶的抗体制备及鉴定

通过PCR法从发菜总DNA中克隆到编码麦芽寡糖基海藻糖合成酶基因前645bp的催化位点保守序列的片段,将该基因片段在大肠杆菌中表达,得到符合预期大小的重组蛋白．将该重组蛋白纯化回收用于制备该酶的特异性抗体．检测表明抗体具有较高效价．利用该抗体检测干旱胁迫下发菜藻丝体中该酶的表达量表明干旱胁迫条件下该酶的表达量增加：且与海藻糖积累量呈正相关,可能参与发菜的抗逆性保护作用．     

以减毒猪霍乱沙门菌为载体的抗O型口蹄疫病毒重组活菌苗在家兔体内免疫应答的初步研究

将含有口蹄疫病毒疫苗基因的真核表达质粒pBO1经过中间宿主鼠伤寒沙门菌LB5010修饰后,电转化到减毒的猪霍乱沙门菌C500中,构建成抗O型口蹄疫病毒的重组活菌苗pBO1／S．cho．血清凝集实验验证,筛选到的转化菌仍然具有猪霍乱沙门菌的血清学特性,即具有免疫原性．采用口服方式免疫家兔,检测重组菌在家兔体内诱导的免疫应答．家兔免疫后8周,分离脾脏T细胞,检测T细胞增殖情况．结果显示,口服DBO1／S．fho的家兔T细胞在FMDV特异性抗原的刺激下有明显的增殖反应,刺激指数SI〉11;免疫后2周和8周分别取家兔静脉血,用液相阻断ELISA法检测血清中针对FMDV的特异性抗体,pBO1／S．cho组家兔产生的抗体效价为1／32。     

烟曲霉Asp f3和Asp f4的表达纯化与多克隆抗体的制备

侵袭性曲霉病以烟曲霉在肺部定植、侵袭为主,具有较高的致死率.治疗侵袭性曲霉病的关键是早期确诊.目前临床上用于诊断侵袭性曲霉病的血清学方法是检测血清中半乳甘露聚糖循环抗原的GM试验,在敏感性和特异性方面存在局限性.为了用抗重组蛋白多克隆抗体鉴定和分析烟曲霉Asp f3和Asp f4特异性和曲霉广谱性表位,构建检测可疑血清样本中相应抗体的表位嵌合肽,以诊断侵袭性曲霉病.本研究表达纯化了烟曲霉Asp f3和Asp f4重组蛋白,制备了IgG抗体滴度均在1.28×106以上的高滴度的兔抗重组蛋白多克隆抗体.     

不同因素HCV结构区基因重组诱发小鼠产生抗体的影响

目的：寻求ＨＣＶ基因免疫的最佳动物实验方法,探讨不同处理因素对基因重组体ｐＣＤ－ＨＣＶ１诱发小鼠产生抗体的影响。方法：用分子生物学技术构建丙型肝炎病毒基因重组体ｐＣＤ－ＨＣＶ１,采用不同免疫次数、途径、剂量和不同处理方法免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠。结果：重组体ｐＣＤ－ＨＣＶ１经肌肉１、２、３和４次免疫小鼠后（１００μｇ／只,ｎ＝１２）,抗体水平分别为０．１８３±０．００６、０．４２８±０．０５、０．７０     

太原市又一项科技明星项目达国内领先水平

正近日,山西省科技厅组织专家对太原市科技明星项目"重组Ⅱ型肿瘤坏死因子受体抗体融合蛋白工程菌的构建"进行了科技成果鉴定。经鉴定,该项科技成果达到国内领先水平。该项目成功解决了毕赤酵母表达生产重组Ⅱ型肿瘤坏死因子受体抗体融合蛋白的关键技术问题,项目顺利     

单链抗体的研究及应用

单链抗体（singlechainantitheySCA或sin－glechainFvScFv）是由抗体重链可变区和轻链可变区通过一段连接肽连接而成的重组蛋白。能较好保持抗原亲和活性，并具有分子量小、穿透力强、体内循环半衰期短及免疫原性低等特点，且易与效应分子相连构建多种新功能的抗体分子。是构建     

抗A5型口蹄疫病毒重组多肽疫苗的研究

根据A型口蹄疫病毒（FMDV）的VP1基因序列及国际上公认的抗病毒中和表位,并结合对口蹄疫病毒的研究成果。设计了A型FMDV的重组多肽疫苗．分别选择VP1上21～40位和137～160位氨基酸对应的基因序列为表位基因,组成137～160—21～40-137～160的串连结构,并以大肠杆菌β-半乳糖苷酶为大分子载体,构建重组质粒pLM99,在大肠杆菌中表达得到高含量的融和蛋白．体外免疫原性检测表明,所表达的融和蛋白与标准A型阳性血清有特异性抗原／抗体反应,即说明该融和蛋白具有免疫反应性．免疫豚鼠的实验结果表明,融合蛋白能在豚鼠体内诱导中和抗体,并使70％的豚鼠能抵抗病毒的攻击．     

抗汉滩病毒单抗3G1 scFv植物表达载体的构建

利用PCR方法，从含有3G1 scFv基因的重组质粒中扩增出抗体基因，并使基因两端携带合适的限制性酶切位点．将其克隆人植物表达载体pBI121，构建获得3G1 scFv-pBI121重组质粒．酶切鉴定及测序结果均证明重组质粒构建成功，将重组植物表达载体转入农杆菌LBA4404，为进一步构建转基因植物的研究奠定了基础．     

Ⅱ型猪圆环病毒ORP2基因的原核表达与初步应用

Ⅱ型猪圆环病毒（PCV2）是引起断奶仔猪多系统衰竭综合症（PMWS）的重要病原．本研究用PCR以构建的PCV2 ORF2重组质粒pBS-T-ORP2为模板，扩增截短的ORP2（tORF2）基因亚克隆至表达载体pGEX-4T-3，构建重组表达质粒pGEX-tORP2并转化大肠杆菌BL21（DE3）．经SDS-PAGE及Western blot鉴定，成功表达了谷胱甘肽S转移酶（GST）融合的tORP2，重组蛋白分子量约为45ku，表达量约为菌体总蛋白的20％，重组蛋白具有良好的免疫学活性．用tORP2重组蛋白对20份临床猪繁殖与呼吸障碍综合征（PRRS）阳性猪血清进行Western blot检测，有4份（20％）血清显示PCV2抗体阳性，说明PCV2与PRRSV存在共同感染现象．本研究初步证明表达的tORV2重组融合蛋白可以应用于临床检测．     

重组戊型肝炎疫苗的免疫原性试验

目的　研究重组戊型肝炎疫苗的免疫原性。方法　通过对小鼠、新西兰兔的多点皮内注射及肌肉注射 ,然后测定其抗体效价 ,研究重组戊型肝炎疫苗的性能。结果　小鼠在免疫 7d后开始产生抗体 ,两周抗体阳性率为80 % ,四周抗体阳性率达 10 0 %。新西兰兔从第二周后开始产生抗体 ,第三周达到高峰 ,抗血清在 1∶6 4 0 0稀释度的阳性率达 4 0 %。结论　重组戊型肝炎疫苗免疫动物具有良好的免疫原性 ,为进一步研究开发戊肝疫苗对人体的免疫提供了基础     

杀鲑气单胞菌溶血素和菌毛蛋白的重组表达及其免疫保护效果研究

为探究杀鲑气单胞菌溶血素和菌毛蛋白能否作为亚单位疫苗候选抗原,本研究针对前期分离的杀鲑气单胞菌杀日本鲑亚种(Aeromonas salmonicida subsp.masoucida, ASM),利用原核表达系统对其进行重组表达,免疫虹鳟后检测其免疫保护效果与诱导的免疫应答特征。Western-blotting结果显示,虹鳟抗灭活ASM血清可与2种重组蛋白发生阳性反应,说明其具有较好的免疫原性。免疫保护实验结果显示,重组溶血素、重组菌毛蛋白及两者混合物免疫对虹鳟的相对免疫保护率(Relative Percentage Survival, RPS)分别为64.6%、37.5%和75.0%;ELISA检测发现,重组溶血素和重组菌毛蛋白单独免疫以及两者混合免疫均能有效诱导虹鳟产生抗各抗原的特异性抗体,在免疫2周后特异性抗体水平均显著高于对照组(P0.05),其中混合免疫组虹鳟血清中抗重组溶血素抗体水平显著高于重组溶血素单独免疫组,但其诱导产生的抗重组菌毛蛋白抗体水平与重组菌毛蛋白单独免疫组无显著性差异;荧光定量PCR检测结果显示,3个免疫组中IL-6、IL-8、TCR及CD4基因的表达水平均显著高于PBS对照组,其中重组溶血素与重组菌毛蛋白共免疫组中IL-6、CD4、MHC-Ⅱ及IgM基因表达水平显著高于其他免疫组。研究结果表明,重组溶血素对虹鳟具有较好的免疫保护效果,且提示重组菌毛蛋白具有开发成为佐剂分子的潜在价值,该结果可为杀鲑气单胞菌亚单位疫苗的研制及应用提供了重要参考。     

传统抗原、重组抗原检测啮齿类动物病毒的ELISA法敏感性和特异性

酶联免疫吸附试验 (ELISA)是一种常用的检测啮齿动物血清病毒抗体的方法。用于检测血清抗体的抗原可是用常规方法制备的全病毒或是在原核或真核系统中表达的重组抗原蛋白。利用杆状病毒表达系统已获得细小病毒、沙粒样病毒和冠状病毒的带有His标记的重组病毒抗原。重组抗原在昆虫细胞中表达裂解后 ,可用色谱法提纯。提纯的抗原用来包被 96孔ELISA板。用细小病毒非结构蛋白 (NS 1) ELISA法检测啮齿动物血清 ,在检测的 345 7份样本中有 88份 (2 5 % )NS 1抗体阳性 ,9份 (0 3% )为非特异性反应。虽然NS 1ELISA检测NS 1抗体具有…     

国有企业资产重组方式及比较分析

从资产重组的目的着手，将资产重组的方式分为四类：一是生产经营性重组；二是资本经营性重组；三是生产经营与资本经营混合性重组；四是体制变改性重组．这四种类型的资产重组都有各自的领域和侧重点，都有各自的优势．建立现代企业制度过程中多种类型的重组方式应同时存在，共同发挥各自作用，以更快地促进经济体制改革和国企改革。     

人血管生成抑制素基因在大肠杆菌中的融合表达

将人血管生成抑制素基因定向插入表达载体ｐＥＴ－１７ｂ的ＢａｍＨⅠ位点,构建重组质粒ｐＥＴＡ２,转化Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）．在ＩＰＴＧ诱导下,血管生成抑制素基因在重组转化株Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３,ｐＥＴＡ２）中获得高效表达．表达产物以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的３７．２％．利用羊抗人纤溶酶原抗血清作为第一抗体,免疫印迹分析证明表达产物具有特异的免疫原性     

莱茵衣藻作为绿色细胞工厂生产高附加值重组蛋白的研究进展

重组蛋白广泛用于医疗、养殖、食品等领域.利用单细胞绿藻——莱茵衣藻为绿色细胞工厂生产重组蛋白的研究在很长时间以来便引起了广泛的关注.相对于传统细胞工厂,这种光合真核微生物在生产高附加值蛋白方面具有众多潜在优势,包括具备准确折叠和组装复杂蛋白的能力、规模化培养时间短、生物安全性高和生产成本低廉等.目前,利用莱茵衣藻叶绿体基因组和核基因组已成功表达了多种重组蛋白,如蛋白亚基疫苗、单链抗体、蛋白细胞因子、蛋白(肽)类激素和工业养殖业用酶等,初步证实了莱茵衣藻作为绿色细胞工厂方面的实用性.本文阐释了莱茵衣藻作为绿色细胞工厂生产高附加值重组蛋白的优势和目前已取得成就的典型案例,并对今后需要克服的困难进行了讨论.     

VMP1基因的克隆及其抗体的制备与鉴定

为了得到效价高、特异性强、能用于检测内源性VMP1蛋白的抗体，采用RT-PCR法，从L929细胞株中克隆鼠VMP1基因，重组入pCMVS载体，用PCR扩增与其氨基酸132-239区域对应的DNA片断，将该片段连接到原核表达载体pGST parallel中，在大肠杆菌BL21菌株中大量表达，经谷胱甘肽-琼脂糖树脂纯化后，得到高纯度的VMP1抗原．免疫新西兰兔，获得抗VMP1蛋白的兔抗血清，将血清纯化后即得到抗VMP1的多克隆抗体．用Western blot分析手段检测了该抗体的特异性及效价．在用该抗体检测外源性和内源性VMP1蛋白的试验中，证实该抗体效价高，特异性强，效果很理想．此方法可用于获得大量廉价的抗VMP1蛋白的高滴度和高特异性的抗体，为进一步研究VMP1在细胞内，尤其是在信号转导通路中的功能和作用奠定了基础．     

密码子优化的H5亚型流感病毒HA基因重组质粒在哺乳动物细胞中的高效表达及其免疫原性的研究

为了提高流感病毒血凝素（HA）基因的表达量及其免疫原性,按照哺乳动物偏爱密码子将A／Goose／HLJ／QFY／04（H5N1）流感病毒的血凝素基因进行优化改造,然后插入到真核表达载体pCI—neo中,构建了真核表达质粒pCI—opti—HA．将此质粒和含野生HA基因的真核表达质粒pCI—wt—HA分别转染Vero或293T细胞,通过免疫过氧化物酶单层细胞试验（IPMA）和蛋白免疫印迹（WB）实验比较HA蛋白的表达量．将两种重组质粒免疫Balb／c小鼠,比较两者诱导的抗体产生水平．三次免疫后两周用强毒攻击,通过体温和体重变化评价两种重组质粒的免疫保护效果．IP—MA和WWWB实验结果表明：密码子优化后,HA蛋白在哺乳动物细胞中的表达水平显著提高．酶联免疫吸附实验（ELISA）结果表明：小鼠免疫后密码子优化的重组质粒诱导的特异性抗体效价较高．攻毒试验结果表明：两种重组质粒均能够提供较好的保护．     

人凝血因子Ⅸ的线性B细胞表位预测及鉴定

为预测并鉴定人凝血因子IX(FIX)的线性B细胞表位.通过IEDB数据库及Discovery Studio软件预测FIX的B表位和白喉毒素T结构域(DTT)的B表位,用所预测的FIX的B表位替换某预测的DTT的B表位形成DTT-表位融合蛋白.通过基因工程技术制备各重组蛋白,并免疫小鼠,通过ELISA和Western-blot检测抗血清效价和特异性,通过等温量热滴定技术(ITC)测定抗体的亲和力.预测到4个FIX的B表位.用重组蛋白FIX-2-DTT免疫的小鼠产生了识别完整FIX的抗体,该抗体具有良好的特异性,其结合常数KD为106 M-1.表明FIX-2(306 NAAINKY312)是FIX的B表位,用重组蛋白FIX-2-DTT免疫小鼠能够产生特异性识别FIX且亲和力温和的抗体.