哺乳类细胞受照射后DNA损伤修复中的“二次损伤”现象及其机理初探

应用彗星法研究了小鼠乳腺癌细胞SX_9受照后DNA损伤修复动力学曲线 ,观察到细胞受照后出现损伤_修复_再损伤_再修复的“二次损伤”现象 .进一步研究表明 ,聚腺苷二磷酸核糖聚合酶 (poly(ADP_ribose)polymerase,PARP)的抑制剂 3_氨基苯甲酰胺 (3_AB)可改变“二次损伤”的进程 ,因而对“二次损伤”现象与PARP对DNA损伤的识别、结合与脱离之间的内在联系及PARP在这个过程中的作用进行了初步的探讨 .     

ATM介导的蛋白磷酸化在辐射损伤信号传递过程中的作用

为了阐明ＡＴＭ在介导辐射损伤信号传导中的作用,对ＡＴＭ,ｃ－Ａｂｌ免疫淀物激酶活性,辐射及损伤ＤＮＡ对其活性的影响进行了分析。结果表明辐射呆引起细胞中多种蛋白磷酸化发生改变,ｐ５３上游基因ＡＴＭ突变的ＡＴ细胞与ＡＴＭ基因正常的同源细胞ＨＥＬ相比,ＡＴ细胞受照后多种蛋白的磷酸化明显减弱。ＡＴＭ与ｃ－Ａｂｌ共沉淀物激酶活性催化ｐ５３在内的多种蛋白磷酸化。ＡＴＭ,ｃ－Ａｂｌ共沉淀物激酶活性可为辐射及损伤     

与水稻光敏核不育性相关的cDNA片段的鉴定和染色体定位

对利用ｃＤＮＡ－ＲＡＰＤ技术获得的光敏核不育水稻可育和不育幼穗ｍＲＮＡ差异表达的ｃＤＮＡ片段进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交鉴定,获得１个与光敏核不育性相关的阳性片段ＲＰＧ４３。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交及相应的ＲＡＰＤ分析表明,ＲＰＧ４３为单拷贝序列,是转录后的加工产物。序列分析表明,ＲＰＧ４３长度为７４４ｂｐ,其中第１２６～１８５的６０个碱基与人类１１号染色体的ｐａｃ ｐＤＪ３５６ｄ６ ＤＮＡ序列有７２％的     

竹红菌乙素及其溴代物对DNA结构光敏损伤的Raman光谱

利用Ｒａｍａｎ光谱技术从分子水平研究了ＨＢ及５－Ｂｒ－ＨＢ对小胸腺ＤＮＡ空间结构微观光敏损伤的特征。实验结果表明,小牛胸腺ＤＮＡ在加入ＨＢ及５－Ｂｒ－ＨＢ合并光照后,Ｒａｍａｎ特征频率与强度均发生了不同程度的变化。     

对生命科学中几个热点问题的再思考

本文对分子遗传学与分子生物学理论上亟待表的四个热点问题－－内含子，癌变、衰老与ＤＮＡ的损伤修复，癌变、肥胖与基因，细胞的分化与生物生长发育的分子模型谈了一些的认识，以期加快对这些问题的研究进展。     

人δ珠蛋白基因启动子区-64位C→T点突变对DNA结合蛋白的影响

用凝胶迁移改变实验研究了人δ珠蛋白基因启动子区－６４Ｃ→Ｔ点突变对ＤＮＡ结合蛋白的影响,人工合成两条３６ｂｐ该基因启动子区－８３－－４８ｂｐ之间的片段ＷＯＧ和ＭＯＧ,ＷＯＧ含有野生型“ＣＡＡＴ样盒”以及,ＭＯＧ含有变异型“ＣＡＡＴ样盒”。结果表明：（１）在红系细胞ＭＥＬ,ｋ５６２以及经Ｈｅｍｉｎ诱导的ｋ５６２细胞中,ＭＧ对ＣＣＡＡＴ结合蛋白和ＧＡＴＡ－１的要和力显著增加;（２）经Ｈｅｍｉｎ诱导的ｋ     

离子束介导转基因提高E.coli UV敏感菌株的DNA损伤修复能力

以氯化钙制备感受态受体细胞转移法为对照,用离子束介导基因转移技术,将具有高效ＤＮＡ损伤修复系统的耐辐射异常球菌（Ｄ．ｒａｄｉｏｄｕｒａｎｓ ＡＳ１．６３３）的基因组ＤＮＡ片段,转入对紫外（ＵＶ）辐照敏感的大肠杆菌中。结果表明,转入ＤＮＡ后的菌株对ＵＶ辐射的抗性不仅高于其对应的敏感菌株,而且也高于其对应的敏感菌株的产生菌株,表现为转入ＤＮＡ后的菌株受紫外辐照的存活率明显提高,代表修复合成的非按期ＤＮ     

CⅡTA反义RNA对HLAⅡ类分子表达的抑制作用

为研究ＭＨＣⅡ类基因转录活化因子对人类白细胞抗原Ⅱ类分子表达的影响,用ＲＴ－ＰＣＲ方法从Ｒａｊｉ细胞中克隆到ＣⅡＴＡ基因ｃＤＮＡ５’端片段,构建成ＣⅡＴＡ反义ＲＮＡ真核表达载体ｐｃＤＮＡ－Ⅱ,基因转移ＨＬＡⅡ类分子诱导型表达的ＨｅＬａ细胞,ＩＦＮ－γ诱导,发现稳定转染ｐｃＤＮＡ－Ⅱ的细胞中ＨＬＡ－ＤＲ,ＤＰ和ＤＱ的表达均较转ｐｃＤＮＡ３空载体的细胞有显著下降,而ＨＬＡ Ｉ类分子的表达不受影响。实验     

CⅡTA反义RNA对HLAⅡ类分子表达的仰制作用

为研究ＭＨＣⅡ类基因转录活化因子（ＣⅡＴＡ）对人类白细胞抗原（ＨＬＡ）Ⅱ类分子表达的影响,用ＲＴ－ＰＣＲ方法从Ｒａｊｉ细胞中克隆到Ｃ Ⅱ ＴＡ基因ｃＤＮＡ ５＇端片段,构建成ＣⅡＴＡ反义ＲＮＡ真核表达载体 ｐｃＤＮＡ－Ⅱ,基因转移 ＨＬＡ Ⅱ类分子诱导型表达的 ＨｅＬａ细胞．经 ＩＦＮ－γ诱导,发现稳定转染ｐｃＤＮＡ－Ⅱ的细胞中ＨＬＡ－ＤＲ,ＤＰ和ＤＱ的表达均较转ｐｃＤＮＡ３空载体的细胞有显著下降,而 ＨＬＡⅠ类分子的表达不受影响．实验证明 ＣⅡ ＴＡ反义 ＲＮＡ对 ＨＬＡ Ⅱ类分子表达具有显著的抑制作用,为进一步开展低免疫原性的细胞移植提供了依据．     

人β-簇珠蛋白基因上游远侧端调控元件与GATA转录因子结合模式

用羟基脲诱导ＨＥＬ细胞,将诱导前后细胞核内蛋白质因子与人β－类珠蛋白基因ＬＣＲ调控元件内ＤＮａｓｅⅠ超敏感点Ⅲ和Ⅳ核心ＤＮＡ序列（ＨＳ３－１４７１６－－１４９９１ＢＰ和ＨＳ４－１８３０６－１８５８６ＢＰ）的结合模式进行了分析,Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析结果表明,随着羟基脲诱导ＨＥＬ细胞时间的延长,细胞核内ＧＡＴＡ－２的含暧渐减少;与之相反,ＧＡＴＡ－１的含量却随着诱导的时间而增加。结合竞争性ＥＭＳ     

细胞突起损伤对细胞活性的影响

研究了嗅鞘细胞突起不同位置的飞秒激光手术损伤对细胞活性的影响, 探讨了细胞损伤、修复和死亡的动力学过程. 功率100 μW、切割速度2 μm/s的紧聚焦飞秒激光对小直径的细胞突起切割两次, 观察突起不同位置的损伤对细胞活性的影响; 采用同样参数对大直径的细胞突起切割6次, 观察损伤后细胞的变化. 当细胞突起直径较小时, 无论是突起末端、中部还是根部的损伤都不能使细胞死亡, 损伤的细胞在3 h内恢复了活性; 当突起直径较大时, 多次的飞秒激光损伤导致细胞的胀亡. 通过飞秒激光手术对细胞突起损伤和诱导胀亡的研究, 提出了飞秒激光细胞损伤的多种机制, 探讨了飞秒激光诱发细胞内部钙波的形成、细胞形态学变化和胀亡的动力学. 因此, 飞秒激光手术为建立细胞损伤模型和研究细胞动力学提供了一个非常重要的方法.     

孤儿受体TR2 mRNA在恒河猴睾丸中表达的研究

以孤儿受体ＴＲ２ ｃＤＮＡ５＇－端的一段片段为模板体外转录的地高辛标记的ｃＤＮＡ及α－＾３２Ｐ－ｄＣＴＰ标记的该片段ｃＤＮＡ为探针,用原位杂交和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交的方法研究孤儿受体ＴＲ２ｍＲＮＡ在恒河猴睾丸中的细胞定位和特异表达。结果表明ＴＲ２ｍＲＮＡ在恒河猴睾丸中特异定位于生精细胞,主要在处于减数分裂期的分化程度较高的生精细胞,其表达在不同的曲细精管有明显的差异,主要在处于减数分裂期的分化程度     

将商陆抗病毒蛋白(PAP)cDNA导入油菜获得抗病毒转基因植株

以子叶柄为材料,分别采用农杆菌介导法与激光微束穿刺法,将损伤诱导型启动子控制之下的商陆抗病毒蛋白（ＰＡＰ）ｃＤＮＡ导入甘蓝型油型（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ Ｌ．）“双低”品种Ｈ１６５．经庆大霉素筛选,获得了抗性再生植株。ＰＣＲ扩增检测及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析表明,ＰＡＰｃＤＮＡ连同损伤诱导型启动子已稳定整合至油菜基因组。     

极谱法测定植物中聚(ADP-核糖基)聚合酶活性

建立了一种简便,灵敏,可信的ＰＡＲＰ活性测定的非同位素方法,即用线性扫描极谱法测出植物中ＰＡＲＰ酶促反应产物烟酰胺的含量,从而测定了ＰＡＲＰ的活性。ＮＩＣ的检测限达０．０３μｍｏｌ／Ｌ,线性关系为０．０６－５μｍｏｌ／Ｌ,相关系数ｒ＝０．９９９,ＮＩＣ的回收率约达９２％－９８％,相对标准偏差小于６．６％《     

睫状神经营养因子对新生大鼠培养星形细胞胶质化的影响

在新生大鼠混合培养胶质细胞机械划伤模型上,研究了睫状神经营养因子（ＣＮＴＦ）对反应性星形细胞胶质化的影响。损伤后,在损伤边缘可见典型的星形细胞胶质化过程,表现为扁平型星形胶质细胞增生肥大,其胞内ＧＦＡＰ表达增加,Ｏ－２Ａ前体细胞向受损区域迁移,并分化成为突起型星形胶质细胞。向培养基加入外源性ＣＮＴＦ可促进损伤边缘的扁平型星形胶质细胞的增生及ＧＦＡＰ的表达。结果提示ＣＮＴＦ可以加强损伤区的星形细胞胶     

genistein抑制人TNF-α诱导的猪内皮细胞对人单核细胞和自然杀伤细胞的黏附

研究了蛋白质酷氨酸磷酸化在ｈＴＮＦ－α诱导猪主动脉内皮细胞（ＰＡＥＣ）黏附分子Ｅ－选择素（Ｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ）和血管细胞黏附分子－１（ＶＣＡＭ－１）表达以及在增强人外周血单核细胞（ＰＢＭｏ）和自然杀伤细胞（ＰＢＮＫ）黏附中的作用,以选择性的蛋白质酷氨酸激酶（ＰＴＫｓ）抑制剂ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ预处理ＰＡＥＣ,剂量依赖性也抑制了ｈＴＮＦ－α增强的ＰＡＥＣ对ＰＢＭｏ和ＰＢＮＫ的黏附。这种抑制作用发生在     

MAP2c诱导产生的微管束具有药物稳定性

将插入ＭＡＰ２ｃｃＤＮＡ的重组杆状病毒感染ｓｆ９细胞后能诱导细胞长出类似于神经元所特有细胞突起,其内部充满足了微管束,为了研究神经元内微管结构体系的稳定性与ＭＡＰｓ的关系,我们分别用微管解聚药物ｎｏｃｏｄａｚｌｅ和秋水仙素或低温处理已经出突直怕ｓｆ９细胞。     

洋葱细胞核仁中DNA的原位位置和排布构型

真核细胞核仁中ＤＮＡ的原位位置及排布构型是长期以来未能解决的问题,以洋葱细胞为研究材料,应用电子显微镜常规技术和ＤＮＡ细胞化学转异染色技术,观察并分析了洋葱细胞核仁的超微结构以及核仁内ＤＮＡ的分布和特征;并进一步对ＮＡＭＡ－Ｕｒ ＤＮＡ特异染色方法进行了改进,从而在原位水平对核仁中ＤＮＡ的位置以及排布构型进行了直观的观察,研究结果揭示出洋葱细胞核仁中ＤＮＡ主要位于ＦＣ与ＤＦＣ的交界处,并呈现出环绕     

人和鼠GRY-RBP cDNA的克隆

通过筛选人胎儿脑ｃＤＮＡ文库,克隆了编码一个新的ＲＮＡ结合蛋白的人ｃＤＮＡ,命名为ＧＲＹ－ＲＢＰ,人ＧＲＹ－ＲＢＰ ｃＤＮＡ的长度为２９３２ｂｐ,编码一个具６２３个氨基酸,分子量为６９．６ｋｕ的ＲＮＡ结合蛋白。ＧＲＹ－ＲＢＰ蛋白含有３个ＲＮＡ识别基序（ＲＮＡ Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｍｏｔｉｆｓ,ＲＲＭｓ）和一个富含甘氨酸（Ｇ）、精氨酸（Ｒ）、酷氨酸（Ｙ）的羧基端,经数据库比较发现该蛋白与许多ＲＲ     

DNA损伤修复的单分子水平研究进展

外源或内源的DNA损伤在生物体内持续发生。DNA损伤修复的缺陷与很多疾病甚至癌症等息息相关,而生物细胞进化出一系列精密的修复机制以耐受或切除这些损伤。单分子技术区别于常规的生化、分子生物学等手段,可以在体外和活细胞内研究DNA修复相关生物分子的动态反应特征,从而对DNA修复机制进行更充分的剖析。文章围绕常见的DNA损伤及其修复类型,阐述了近年来利用原子力显微镜、磁镊、光镊等单分子操控技术,以及全内反射荧光显微镜、光激活定位显微镜和超分辨显微示踪等单分子荧光成像技术在DNA修复机制研究中取得的进展,梳理了利用单分子技术解决的长期存在的关于DNA修复难题,并展望了单分子技术联合其他交叉学科技术在研究DNA修复机制方面的前景。