鳙鱼原肌球蛋白的提取、结晶及分子量测定

原肌球蛋白(Tropmyosin 以下用 TM 表示)是动物肌肉收缩的一种重要的调节蛋白。本文对我国四大家之一鳙鱼肌肉的 TM 进行了提取,纯化和结晶。并用 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定了鳙鱼 TM亚基的分子量为36,500。     

人原肌球蛋白结合蛋白3(TMOD3)cDNA的克隆及功能初步分析

从人的胎脑cDNA文库到中克隆到1条人原肌球蛋白结合蛋白3（TMOD3）基因,该基因cDNA序列长1402bp,可以编码352个氨基酸残基组成的蛋白,与大鼠,果蝇和线虫的原肌球结合蛋白同源性分别为82％,41％和35％,TMOD3基因定位在人15q21.1-q21.2,位于遗传位标D15S146和D15S117之间,采用基因芯片杂交的方法研究其表达谱概况,发现该基因在多种,组织和细胞中均表达。     

克氏原螯虾原肌球蛋白的纯化及过敏原性分析

以13份甲壳类动物过敏患者血清的Western—blotting分析,确定克氏原螯虾主要过敏原为36ku蛋白质．通过盐析、等电点沉淀及热处理等方法纯化该蛋白质,以兔抗拟穴青蟹原肌球蛋白（Tropo-myosin,TM）多克隆抗体的Western—blotting分析,确定该蛋白质为TM．同源性分析表明,克氏原螯虾TM与南美白对虾TM、拟穴青蟹的氨基酸序列相似性较高（〉90％）．酶切位点预测显示,它分别有49个胰蛋白酶和6个胰凝乳蛋白酶的酶切位点．模拟胃肠液消化实验结果显示,纯化TM不易被胃蛋白酶降解,易于被胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶降解,进一步的Western—blotting和抑制性ELISA分析结果显示,其消化产物仍具有一定的免疫活性．采用蒸煮处理可降低TM的消化稳定性及免疫活性,且蒸煮处理时间越长,效果越显著．说明。TM为克氏原螯虾主要过敏原．与其他甲壳娄动物TM的序列相似件较高．     

松墨天牛原肌球蛋白基因的克隆和表达检测

利用先前构建的cDNA文库和RACE方法,克隆了松墨天牛原肌球蛋白基因的cDNA全长,该序列长1 203 bp,命名为MaTm(GenBank登录号:KM099072),其中开放阅读框长852 bp,编码283个氨基酸.MaTm的氨基酸序列与赤拟谷盗 (Tribolium castaneum)相似性最高,为97%,与家蚕相似性 (Bombyx mori)为94%.松墨天牛与赤拟谷盗处在系统发育树的同一个分支上.用 RT-qPCR 分析了MaTm的相对表达量,结果显示:蛹和幼虫的表达量低于成虫;成虫足和头的表达量高于对照;在幼虫各组织中均有表达,且差异显著(p0.05),其中在体壁的表达量最高.     

草鱼原肌球蛋白基因的克隆及其组织表达

为揭示原肌球蛋白基因在草鱼肌肉中的作用,利用RT-PCR和RACE技术克隆获得了草鱼原肌球蛋白基因c DNA,并对该基因在普通草鱼和脆肉鲩不同组织中的表达情况进行研究分析。结果表明原肌球蛋白基因c DNA全长序列为1 705 bp,包含387 bp的5′UTR序列,1 307 bp的3′UTR序列和855 bp开放阅读框(ORF)。其ORF编码284个氨基酸。系统进化分析表明普通草鱼与斑马鱼、墨西哥脂鲤的原肌球蛋白基因核苷酸同源性分别是93%和87%,氨基酸同源性分别是96%和93%。在聚类上普通草鱼原肌球蛋白基因与其他鲤科鱼类同源性较高,表明亲缘关系最近,与传统分类相一致。Real time-PCR结果表明原肌球蛋白基因在所检测的普通草鱼和脆肉鲩7个组织中均有表达,原肌球蛋白基因在普通草鱼腹肌中表达最高,其次为前肠。原肌球蛋白基因在脆肉鲩腹肌中的表达低于普通草鱼,而脆肉鲩中肌肉、肝脏、肾脏、前肠、后肠中原肌球蛋白基因表达量大于普通草鱼相对应组织,但差异不显著。     

罗氏沼虾原肌球蛋白基因的克隆表达及变应原性鉴定

通过NCBI查找到罗氏沼虾原肌球蛋白的mRNA,根据其CDS区域设计特异引物,通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)克隆出目的基因片段,测序后将该片段克隆到原核表达载体 pET-28a 上,转化到 E. coli BL21(DE3)和E. coli Rosatta后,经异丙基-B-D-硫代乳糖苷(IPTG)诱导表达,用Ni2+亲和层析柱对重组变应原进行纯化.采用免疫印迹检测其与对虾过敏患者血清的 IgE 结合活性.对罗氏沼虾变应原进行了表达、鉴定及纯化,成功地获得了具有变应原活性的重组罗氏沼虾原肌球蛋白,为罗氏沼虾过敏性疾病的诊断、治疗奠定了基础.     

辐照处理对蟹类过敏原（原肌球蛋白）性质的影响

食物过敏是当前食品安全领域较为突出的问题,辐照作为食物过敏原的加工处理方法之一,引起了学者的重视.作者对中华绒鳌蟹和三疣梭子蟹的主要过敏原(原肌球蛋白)进行了辐照处理,并分析了辐照处理对原肌球蛋白性质的影响.十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示,部分纯化的蟹类原肌球蛋白经7 kGy辐照处理后出现明显降解,10 kGy辐照处理后完全降解;蟹类过敏者血清的免疫印迹分析结果显示,部分纯化原肌球蛋白经3～7 kGy辐照处理后的过敏原性无明显变化,而10 kGy辐照处理后的过敏原性降低;兔抗锯缘青蟹原肌球蛋白抗体的免疫胶体金层析检测结果证实部分纯化原肌球蛋白经10 kGy辐照处理后的抗原性为阴性.但是,3～10 kGy辐照处理对整蟹原肌球蛋白及其过敏原性无明显影响,模拟胃液消化反应结果也表明3～10 kGy辐照处理对整蟹原肌球蛋白的酶解消化特性无明显影响.     

基于转录组学分析日本沼虾原肌球蛋白对小鼠巨噬细胞极化的影响

为研究日本沼虾原肌球蛋白对巨噬细胞极化的影响,运用转录组学分析原肌球蛋白诱导的巨噬细胞极化过程中基因表达的差异性。结果表明:与磷酸盐缓冲溶液组(PBS组)相比,原肌球蛋白诱导组(TM组)有69个基因表达上调,154个基因表达下调,富集到180条通路;TM组相较于脂多糖和IFN-γ联合诱导M1型巨噬细胞组(LPSIFN组)有1346个基因表达上调,1360个基因下调,富集到308条通路;TM组与IL-4诱导M2型巨噬细胞组(IL4组)相比,有455个基因上调,446个基因下调,富集到269条通路。根据KEGG结果选择5条可能涉及巨噬细胞极化的信号通路,包括NOD样受体信号通路、Jak-STAT信号通路、NF-κB信号通路、Toll样受体信号通路和PI3K/Akt信号通路,对这5条通路中的NOD2、TLR2、AKT3、NLRP3、Caspase-1、CD14、Lat、Myd88、NFKBIA和STAT1基因的表达进行验证,检测到TM组NOD2、TLR2、NLRP3、STAT1这4个基因表达量相较于PBS组显著升高,与这4个基因相关的NOD样受体信号通路、Jak-STAT信号通路、Toll样受体信号通路参与原肌球蛋白诱导巨噬细胞极化的过程。研究旨在为进一步分析巨噬细胞极化与食物过敏的关系提供理论依据。     

萌发百合花粉中原肌球蛋白的免疫鉴定及免疫荧光定位

原肌球蛋白是肌动蛋白的结合蛋白，调节肌动蛋白与肌球蛋白的相互作用，用免疫印迹的方法证明，在萌发百合花粉的提取液中存在的一种原肌球蛋白，分子量为６４ｋｕ，能与抗兔肌原肌球蛋白的多克隆抗体发生免疫交叉反应。免疫荧光标记后激光共聚焦显微镜观察结果表明，该蛋白在百合花粉管中呈不连续的点状分布。     

克氏原螯虾主要变应原原肌球蛋白的一个片段区基因的克隆表达、纯化及免疫原性鉴定

克隆克氏原螯虾主要过敏原原肌球蛋白的一个片段区基因,表达并纯化该蛋白,检测其免疫原性.提取克氏原螯虾总RNA,设计特异性引物,RT-PCR克隆得到目的基因;将目的基因连入pMD19-T载体,提质粒酶切鉴定并测序;将测序正确的片段连入原核表达载体pET-32a(+)上,并转入BL21(DE3)宿主表达菌中;IPTG诱导表达;通过Ni2+亲和层析(FPLC)纯化目的蛋白;利用Western-blotting和ELISA检测该重组蛋白的免疫原性.克隆获得目的基因,其片段长为291 bp,编码97个氨基酸.重组蛋白纯化后经SDS-PAGE鉴定,目的蛋白大小与理论值相符.Western-blotting和ELISA结果表明该蛋白与克氏原螯虾过敏病人混合血清中IgE结合,具有免疫原性.     

鳙鱼Aristichthys nobilis吻端细胞系BHS的建立及特性观察

以鳙鱼吻端组织为材料,建立了鳙鱼吻端细胞系,定命为 BHS。7个月期间细胞已传25代,选用培养基为 TC-199加20%或10%小牛血清。该细胞生长温度范围为14℃—35℃,最适温度28℃—30℃,形态主要为纤维样细胞,染色体数从55—82(2n=48)为异倍体细胞,克隆形成率较低为4.4%。     

鳙鱼不同组织的同工酶研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法,对鳙鱼的脑、晶体、心脏、肝脏、肾脏、肌肉等六种组织进行了十种同工酶（α＿ＡＭＹ、ＥＳＴ、ＧＯＴ、Ｇ６ＰＤ、ＩＤＨ、ＬＤＨ、ＭＤＨ、ＭＥ、ＰＯＸ、ＳＯＤ）的电泳研究,并对各种酶的同工酶位点及酶谱表型进行了分析,其中鳙鱼的α＿ＡＭＹ和ＰＯＸ的研究还未见报道．结果表明,除ＧＯＴ外,其余酶均存在不同程度的组织差异,Ｇ６ＰＤ在肝脏,ＩＤＨ在脑以及ＬＤＨ在心脏出现了特殊的酶谱,作者就此进行了分析和推测．     

鳙鱼鳃表面形态结构的扫描电镜研究

用扫描电镜对鳙鱼(Aristichthys nobilis)鳃表面形态结构进行了详细的观察研究。结果表明：鳃耙、鳃弓、鳃丝上皮细胞表面都有环形隆嵴、断续的短纹；而鳃小片的上皮细胞表面没有环形隆嵴，只有沟、回、短纹等结构。这些结构特点是与鳃的生理功能密切相关的。     

鳙鱼人工繁殖群体遗传多样性的研究

运用40个随机引物对湖北荆州和广西昭平的两个鳙鱼（Aristchthys nobilis)人工繁殖群体进行了随机扩增多态DNA（RAPD）分析。结果表明，两个鳙鱼人工繁殖群体内个体间的遗传相似度分别为0．9755和0．9797，Shanonn表型多样性指数分别为5．541和4．954；以所得RAPD数据分析为基础，对鳙鱼人工繁殖群体的遗传多样性进行了分析，对鳙鱼人工繁殖过程中的一些问题进行了讨论。     

植物肌球蛋白的研究进展

肌球蛋白是依赖微丝的、把贮存在ATP中的化学能转化为机械能的分子马达。广泛存在于动、植物中,与信号传导、肌肉收缩、细胞器运动等有关。到现为止,肌球蛋白分类两类：传统肌球蛋白（肌球蛋白Ⅱ）与非传统肌球蛋白。除肌球蛋白Ⅱ外,其余的都是非传统肌球蛋白,植物肌球蛋白为其中的第Ⅷ、Ⅵ、Ⅷ类。然而,赵发清博干从丝瓜卷须中鉴定出一肌球蛋白（LFM174）,其分子量174KDa,可能属于传统肌球蛋白。LFM174具两个头、一个长约为100nm的尾,与肌球蛋白Ⅱ极为相似。不断出现的新技术将对肌球蛋白的研究产生影响。     

黄瓜幼叶叶绿体分裂的电镜观察

本文以黄瓜幼叶为材料，在电镜下观察到了叶绿体的二分分裂，其分裂方式以哑铃状分裂为主。     

肌球蛋白工作循环模型

目的基于肌肉的特殊结构,给出肌球蛋白工作循环的四态模型,研究肌肉中力与位移的关系。方法利用化学动力学方法及其非平衡稳态解,从物理学的角度讨论肌肉中力与位移的关系。结果力与位移的关系与实验结果基本吻合。结论此模型可用于讨论肌肉的力与位移的关系,而且化学动力学方法适用于研究本文体系。     

鳙鱼肽的抗衰老和免疫调节作用

利用D-半乳糖致衰小鼠模型,观察了鳙鱼肽对衰老模型小鼠免疫器官指数及吞噬能力的影响,以及对小鼠血清、肝脑组织中丙二醛（MDA）、超氧化物岐化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—Px）及单胺氧化酶（MAO—B）等的影响,并从细胞器——线粒体角度探讨了鳙鱼肽对Ca^2＋泵和Na^＋泵的作用．结果表明：鳙鱼肽可明显降低致衰小鼠肝脑组织中MDA的含量;降低脑组织中MAO—B的活性（P〈0．01）;提高抗氧化酶SOD和GSH-Px的活性;同时对线粒体中Na^＋泵和Ca^2＋泵的活力也有显著影响,能显著提高致衰小鼠吞噬细胞的吞噬能力（P〈0．01）．说明鳙鱼肽对D-半乳糖致衰小鼠有明显的抗衰老和免疫调节作用．     

平滑肌肌球蛋白轻链激酶对肌球蛋白的非钙依赖性磷酸化

发现肌球蛋白轻链激酶(MLCK)不仅以钙依赖性的方式,同时也以非钙依赖性的方式参与对肌球蛋白轻链的磷酸化。该非钙依赖性磷酸化的特征是:需要高浓度,但受温度升高、反应时间延长、离子浓度升高的影响远小于钙依赖性磷酸化。研究结果提示肌球蛋白轻链激酶对肌球蛋白的非钙依赖性磷酸化可能是一种新的机制,并与平滑肌张力的维持有关。