Anti-HER2免疫脂质体的制备及其靶向特异性的检测1

目的 将靶向HER2过表达细胞的HER2抗体偶联在纳米脂质体上,探索抗体偶联脂质体的方法.方法 通过乙醇注入法制备脂质体,表面修饰HER2抗体,成功制备Anti-HER2免疫脂质体;由SDS-PAGE电泳检测抗体偶联脂质体的连接效率;通过MTT检测免疫脂质体对乳腺癌细胞的细胞毒性;采用共聚焦显微镜和流式细胞技术检测免疫...     

抗肺癌免疫光敏剂的制备及其杀伤作用

以碳二亚胺(EDCI)为连接剂将抗肺癌单克隆抗体(McAb 3D3与血卟啉衍生物(HpD)共价连接,制备成免疫光敏剂,经ELISA法测定及溶血试验,结果表明偶联物保留了 McAb的反应性及HpD的光敏活性,偶联物经紫外光谱及荧光光谱扫描分析表明,偶联HpD与非偶联HpD的光谱特性有所差别,体外杀伤试验表明,偶联物的杀伤效率提高了10.5倍,且对非靶细胞的杀伤作用微弱,证明HpD与McAb偶联后,对靶细胞具有特异杀伤作用,可为肿瘤的治疗提供一种新的药物。     

DNA免疫制备抗人CD154单克隆抗体及其轻链可变区基因序列分析

采用pcDNA3 1 hCD15 4重组质粒DNA免疫BALB c小鼠 ,制备抗人CD15 4单克隆抗体 ,得到了能分泌针对人T细胞表面CD15 4分子的特异性单抗的杂交瘤细胞株 (7E8)。通过RT_PCR扩增 7E8单抗轻链可变区基因 ,并对其进行克隆、测序、DNA序列分析和氨基酸推导 ,结果显示轻链可变区基因和氨基酸序列完全符合小鼠Ig轻链的结构特征 ,为制备基因工程抗体并应用于临床打下了基础。     

微波和长春新碱对白血病细胞的体外净化研究

旨在研究一种较好的微波和长春新碱的联合方法,用于白血病细胞的体外净化．将微波和长春新碱分别单独以及联合作用于正常骨髓细胞ＨＬ６０、Ｕ９３７和Ｋ５６２细胞株,通过ＧＭ－ＣＦＵ和ｔＣＦＵ的测定来评价体外净化的效果．结果发现微波和长春新碱对ＧＭ－ＣＦＵ、ｔＣＦＵ存活率均表现出抑制作用,抑制程度呈现出功率相关性和浓度相关性;在一定范围内,微波和长春新碱对３种细胞株ｔＣＦＵ存活率的抑制显著大于ＧＭ－ＣＦＵ（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）;微波和长春新碱联合作用对３种细胞株的杀伤作用比单用长春新碱有显著性增加（Ｐ＜０．０５）,而不显著增加对ＧＭ－ＣＦＵ的抑制（Ｐ＞０．０５）．这一结果提示微波和长春新碱联合用于白血病细胞的体外净化能产生协同效应,值得进一步研究．     

弥漫大B细胞淋巴瘤的治疗进展

弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)是非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma,NHL)最常见的组织学类型,具有不同的生物学特性,其发病机制、免疫表型、遗传学、临床表现和疗效预后均具有异质性.治疗方法主要包括化疗、放疗、生物治疗及造血干细胞移植等....     

核糖体蛋白RPL34-PS1对B细胞淋巴瘤的生长促进作用

一种核糖体蛋白RPL34具有促进B细胞淋巴瘤生长的作用,通过分子克隆将RPL34基因的序列克隆到逆转录病毒载体pBABE-Puro上后,包装逆转录病毒并感染Balb/c小鼠来源的B淋巴瘤细胞38B9,经嘌呤霉素筛选后构建稳定过表达RPL34的B淋巴瘤细胞系RPL34-38B9。体外培养计数比较细胞增殖变化情况;流式检测细胞凋亡和细胞周期水平;小鼠皮下荷瘤并测量肿瘤体积。结果表明:过表达的核糖体蛋白RPL34能够显著促进B淋巴瘤细胞的生长速率,减少细胞凋亡,同时能够显著增加B淋巴瘤细胞的成瘤速率。     

新型肿瘤细胞膜重组脂质体体外免疫激活作用的实验研究

将肿瘤细胞膜与人工脂质体重组,制备新型重组复合体并探索其体外免疫活性.热处理S180细胞并收集裂解细胞膜,重组于人工脂质体得重组复合体,电镜和Weston杂交鉴定重组复合体.体外培养观察该复合体对小鼠树突状细胞及淋巴细胞的影响,流式细胞仪分析CD11c,CD80,CD86等表面标志,3H-TdR掺入测定淋巴细胞增殖.设立单纯细胞膜碎片及单纯脂质体组为对照.裂解肿瘤细胞膜可以重组复合于人工脂质体,形成稳定的复合物,可刺激DC成熟,促进淋巴细胞增殖,与对照组均有显著差异(P<0.05).肿瘤细胞膜重组脂质体可以显著改善肿瘤的体外免疫原性,为快速的个体化肿瘤免疫治疗提供了新思路.     

人淋巴瘤OCI-Ly3细胞的免疫学特性研究和小鼠模型建立

以人弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)活化B细胞(activated B-cell,ABC)型细胞株OCI-Ly3为研究对象,探索ABC型的生物学特性及肿瘤相关分子的表达,以及小鼠成瘤条件.对不同条件下培养的OCI-Ly3细胞进行对比分析,观察细胞生长形态及生物学特性;分析肿瘤相关抗原在OCI-Ly3细胞的表达情况;采用皮下和腹腔接种,在SCID小鼠中建立移植瘤动物模型.流式分析显示,体外培养的OCI-Ly3细胞对c-Met、Ki-67和survivin等细胞增殖和凋亡相关标记物具有较高的表达;SCID小鼠皮下接种107 OCILy3细胞,成瘤率87.5%;腹腔接种2×107细胞,成瘤率75%;肿瘤组织符合人DLBCL的组织学特征,且分布弥散,具有较高的侵袭性.成功构建了人ABC型DLBCL的小鼠模型,并对OCI-Ly3细胞的体外培养特性和与肿瘤发生相关的免疫标记物进行了较为系统的检测,为DLBCL的进一步研究提供了参考和工具.     

免疫核糖核酸作用机制的研究──抗SRBCIRNA的电泳分离及分离组分对靶细胞的作用

报道了用聚丙烯酰胺凝胶电泳法和电泳洗脱法分离抗 ＳＲＢＣ ＩＲＮＡ及各分离组分的 活性．结果表明电泳能将ＩＲＮＡ分为３０多条带．沉降系数为８～１８ｓ的Ｆｒ２组分具有传递免疫反应的活性。测定了总ＩＲＮＡ及其各组分对 Ｔ细胞和 Ｂ细胞的作用，表明总 ＩＲＮＡ既能激活Ｔ细胞，亦能激活Ｂ细胞． Ｆｒ２－ａ能激活 Ｔ细胞，Ｆｒ２－２，Ｆｒ２－ｂ、 Ｆｒ２－ｃ和Ｆｒ２－ｄ都能激活Ｂ细胞、实验还表明ＩＲＮＡ不大可能作为抗体的直接模板。     

溶菌酶脂质体的制备及其对生物膜的剥离作用

采用逆向蒸发法制备了稳定的溶菌酶脂质体.在不锈钢表面培养出稳定生物膜后,分别利用溶菌酶和溶菌酶脂质体对其进行剥离.运用Zeta电位仪、扫描电子显微镜(SEM)和红外光谱(FT-IR)对脂质体和生物膜进行表征.结果表明制备的脂质体平均粒径为80~100 nm,包封率为82.4%.相同浓度下溶菌酶及其脂质体对混合菌种形成的生物膜剥离效率分别达到62.4%和86.5%.溶菌酶脂质体在24h内对生物膜和水体中微生物去除率分别达到89.6%和99.6%.因此,溶菌酶脂质体能够有效控制不锈钢表面生物膜污染风险.     

抗CD71人-鼠嵌合抗体的制备及其诱导肿瘤细胞凋亡

目的 :研究在液氮中冻存 2年的转染瘤细胞株 (D2C)复苏后其分泌抗CD71人 -鼠嵌合抗体的特异性、分泌量及诱导肿瘤细胞凋亡的效应。方法 :用ELISA方法检测转染瘤细胞培养上清的抗体分泌量。经DEAE SephadexA 5 0离子交换法纯化产生的抗体 ,并采用SDS PAGE电泳鉴定 ;台盼蓝拒染法观察其对K5 6 2细胞生存的影响 ;细胞计数和MTT试验测定嵌合抗体及鼠源性抗体对K5 6 2细胞的作用 ;琼脂糖凝胶电泳和透射电镜观察K5 6 2细胞凋亡。结果 :Balb/c裸鼠腹腔接种转染瘤细胞后 ,每只裸鼠腹水量在 3～ 5mL。抗体经纯化 ,产量约为 1～ 2mg/mL腹水。经SDS PAGE电泳鉴定 ,在分子量 5 5kD和 2 7kD处 ,可见有抗体IgG重链和轻链的染色条带。抗CD71嵌合抗体及鼠源性抗CD71抗体均可抑制K5 6 2细胞的增殖作用 ,且二者抑制作用无显著性差异 (P >0 .0 5 )。经琼脂糖凝胶电泳和透射电镜观察分别可见抗体诱导的K5 6 2细胞DNA梯形条带和细胞凋亡的形态改变。结论 :液氮中冻存 2年的转染瘤细胞体外生长良好 ,抗体分泌稳定 ,特异性高 ,并可诱导K5 6 2人红白血病细胞凋亡     

白藜芦醇诱导人T淋巴瘤Jurkat细胞凋亡的研究

用荧光染色、透射电镜、Wright-Giemsa染色方法检测人T淋巴瘤Jurkat细胞在白藜芦醇（resveratrol，Res）诱导凋亡时的形态学变化情况，并用流式细胞仪对其进行定量分析，Westblot检测部分凋亡信号分子分泌的变化情况．发现白藜芦醇能明显诱导该细胞凋亡，显现出典型的凋亡现象，且凋亡有明显的药物依赖性．流式细胞仪检测发现，各药物处理组（0．125，0．25，0．5，1．0，2．0μL／mL）的凋亡率（3．01％，8．93％，17．97％，22．45％，32．88％）和对照组的凋亡百分率（0．91%）比较有显著性差异．West Blot检测则发现，Ras降低了bcl-xl，bax的表达，以至不能进一步产生bcl-2／bax和bcl-2／bcl-xL二聚体来抑制细胞凋亡，即减除了这些凋亡抑制因子对细胞凋亡的抑制，从而使细胞顺利进入caspase介导的凋亡途径．     

包覆包醛氧淀粉固定脲酶制备及对尿素吸附

包醛氧淀粉固定脲酶作为口服吸附剂，经口服首先进入胃中的酸性环境，使脲酶失活。为保护脲酶的活性，以海藻酸为主要原料，在固定脲酶表面覆上一层海藻酸膜，制成包覆型包醛氧淀粉固定脲酶，并对包覆的工艺和配方进行了研究。实验结果表明，经过包覆的包醛氧淀粉固定脲酶样品在经过0.1mol/L^-1的HCl溶液浸泡3h后，其对尿素的吸附量仍可达15mg/g，吸附量明显优于包醛氧淀粉，是一种高效的尿素吸附剂。     

掺铁纳米TiO2的制备及光催化降解罗丹明B的研究

采用溶胶-凝胶法制备了掺铁TiO2纳米粉体，并用x-射线衍射法（XRD）分析样品的晶相结构，考察了制备掺铁TiO2时的掺铁量和焙烧温度、降解体系的初始pH值和反应温度对掺铁纳米TiO2催化降解罗丹明B溶液效率的影响。实验证实，在金属卤素灯照射下，掺铁纳米Ti02在温和条件下催化降解罗丹明B可行。研究结果表明，初始pH=5、反应温度35℃、焙烧温度600℃、掺铁量为0.05wt％的纳米TiO2催化降解罗丹明B效果最佳，降解率可达94．69％；所制备的掺铁TiO2粒径在10—30nm左右，以锐钛矿为主的混晶存在于600℃焙烧的样品中。     

人甲状旁腺素的基因表达及活性的初步研究

从人甲状旁腺瘤组织中分离到ｍＲＮＡ,逆转成ｃＤＮＡ后,设计带有突变碱基的引物,通过聚合酶链式反应,扩增ｈＰＴＨ基因,使Ｎ端前５氨基酸的碱基富含腺嘌呤核苷（Ａ）．将该基因克隆到表达载体ＰＥＴＩＣ上,转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）表达,实验证实ｈＰＴＨ的表达量占菌体蛋白总量的１１％;细胞粗步处理产物经腺苷环化酶的生物鉴定实验证实,重组ｈＰＴＨ具有生物活性,粗产物５００倍稀释后,ｈＰＴＨ的放免活性为２０６．５ｎｇ／Ｌ,为对照的４１５倍     

纳米硅薄膜太阳能电池的制备及特性研究

主要讲述了单晶体硅电池、多晶体硅电池、微晶硅电池及薄膜硅电池的性质及特点,同时介绍了硅太阳能电池的发展历程;讲述了纳米硅薄膜太阳能电池的等离子体增强化学气相沉积制备及沉积理论;论证了H稀释浓度对硅纳米薄膜太阳电池性能的影响;阐述了沉积气压和衬底温度对薄膜性能的影响;最后讲述了透明导电薄膜在薄膜太阳能电池中的应用情况及光学性质。     

格列卫对恶性淋巴瘤细胞Raji凋亡和增殖的实验研究

目的研究不同浓度格列卫对恶性淋巴瘤细胞株Raji细胞的影响．方法采用MTT法检测不同浓度格列卫对Raji细胞在不同时间的生长抑制作用,应用流式细胞术检测药物对Raji细胞Caspase-3的表达及G1期、S期占整个细胞周期的比例,采用免疫组化SABC法检测药物对Raji细胞P16蛋白的表达．结果格列卫使细胞存活率明显下降（P〈0．05）;未能上调Caspase-3表达（P〉0．05）;无明显诱导凋亡作用（P〉0．05）;格列卫在低浓度72h与高浓度48h、72h时P16蛋白表达与对照组相比有显著差异（P〈0．05）;格列卫对Raji细胞G1期、S期所占细胞周期的比例与对照组相比无显著差异（P〉0．05）．结论ST1571在高浓度时可以上调Raji细胞P16蛋白的表达;ST1571对恶性淋巴瘤细胞株Raji细胞无上调Caspase-3表达及影响细胞周期的作用．     

新型呼肠病毒S1基因与宿主细胞相互作用的初步研究

摘要 目的 筛选出新型呼肠病毒S1基因和宿主相互作用的关键区段,为后续的宿主受体蛋白筛选工作提供可靠的基础。 方法 将编码全长S1基因,以及N端和C端阅读框分别克隆入真核表达载体pIRSE2-EGFP,转染敏感细胞株鼠成纤维细胞（L929）和人宫颈癌细胞（Hela）后,通过荧光报告基因EGFP的表达分析,筛选出S1基因与宿主细胞相互作用时起决定性影响的区段。 结果 同等量的3种真核表达质粒在单独转染L929时,pGSN质粒转染后荧光表达量最大,pGSC质粒转染后荧光表达量最小。 不同比例混合的pGS与pGSN进行共转染时,pGSN在转染质粒中的比例越高,荧光表达量也越高。 在Hela细胞中的转染结果与L929相同。 结论 新型呼肠病毒R4株的S1基因N端阅读框编码区（62-406bp）在S1基因转染时起关键作用。     

新基因BP1抗体制备及其在乳腺癌表达的初步观察

为了探讨新同源盒基因BP 1在乳腺癌的表达,运用生物信息学方法设计19肽,合成并偶联到大分子载体KLH上制成人工免疫原,制备兔抗BP 1多克隆抗体IgG.蛋白印迹方法检测BP 1在乳腺癌细胞系M CF 7、M DA-M B-231细胞均有表达:免疫组织化学结果显示,BP 1蛋白在乳腺癌的表达率显著高于癌旁组织,在雌激素受体阴性肿瘤的表达率高于雌激素受体阳性组。BP 1基因的异常表达参与了乳腺癌的发生,是一种新的乳腺癌分子标志物.     

B7-TNFR嵌合分子的构建及其在真核细胞中的表达

Ｂ７－ＣＤ２８／ＣＴＬＡ－４共刺激旁路在免疫应答中的Ｔ细胞激活中有重要功能,Ｂ７分子的肿瘤基因疗法是目前肿瘤基因治疗的热点和方向。ＴＮＦα能通过ＴＮＦＲ诱导细胞凋亡,直接杀伤肿瘤细胞。构建了由共刺激分子Ｂ７－１的细胞外区与ＴＮＦＲ Ｉ的越膜区和细胞内区组成的嵌合分子Ｂ７－ＴＮＦＲ,并在细胞表面得到了表达。这种分子可能从２个方面达到肿瘤治疗的目的;（１）增强肿瘤细胞激活机体免疫系统的能力;（２）诱导